極光激酶A在宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者血清中的表達(dá)及其臨床意義

李 燕，董經(jīng)茹，魏媛媛，張金艷

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院，河北 石家莊 050011)

宮頸癌(cervical cancer，CC)在全球女性惡性腫瘤中發(fā)病率及死亡率均居第4位，是我國(guó)女性常見(jiàn)的癌癥之一[1]，但目前缺乏高度特異性和敏感性的生物標(biāo)志物用于CC的診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)。近年來(lái)，大量研究利用微陣列生物信息學(xué)技術(shù)分析CC發(fā)生發(fā)展中的差異表達(dá)基因(differentially expressed genes，DEGs)及其分子機(jī)制[2]，為CC的早期診斷、療效觀察、預(yù)后監(jiān)測(cè)及基因治療提供了重要依據(jù)。通過(guò)人類(lèi)宮頸癌組織的全基因組表達(dá)譜芯片比較CC組織與正常宮頸組織中的DEGs，運(yùn)用多種生物信息學(xué)分析工具分析，極光激酶A(aurora kinase A，AURKA)在CC組織中高表達(dá)，隨著腫瘤分期的進(jìn)展AURKA的表達(dá)水平升高。AURKA是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂進(jìn)程，維持基因組穩(wěn)定性至關(guān)重要[3]。有研究發(fā)現(xiàn)AURKA在多種腫瘤中普遍存在基因擴(kuò)增和過(guò)表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及預(yù)后存在密切聯(lián)系[4]。宮頸鱗狀細(xì)胞癌(cervical squamous cell carcinoma，CSCC)是最常見(jiàn)的宮頸癌組織學(xué)類(lèi)型，且?guī)缀蹙l(fā)生在已婚多產(chǎn)的婦女。本研究以CSCC、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)和女性健康體檢者為研究對(duì)象，分別采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qPCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法定量檢測(cè)CSCC血清中AURKA mRNA及蛋白的表達(dá)，并分析其對(duì)CSCC的診斷價(jià)值及臨床意義，探尋以血清AURKA mRNA及蛋白作為無(wú)創(chuàng)分子標(biāo)志物來(lái)預(yù)測(cè)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展的可能性。

1 材料與方法

1.1 病例

2021年6—10月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院就診的96例患者，年齡25～79歲。其中宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者48例，宮頸上皮內(nèi)瘤變患者28例，健康體檢者20例。所有患者治療前清晨空腹采集靜脈血5 mL于無(wú)抗凝劑的真空采血管。本研究已獲得河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2021KS038)，所有患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均為首次就診，經(jīng)陰道鏡或手術(shù)活組織病理檢查確診，入院前未接受過(guò)手術(shù)及放射治療、化學(xué)治療等相關(guān)抗腫瘤治療措施；②無(wú)其他器官疾病或功能障礙；③患者各項(xiàng)臨床資料完整。健康體檢者性別為女性，超聲及血清腫瘤標(biāo)志物等均未見(jiàn)異常。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他惡性腫瘤；②入院前接受過(guò)手術(shù)或放療、化療等其他抗腫瘤治療；③合并有其他器官功能障礙或自身免疫性疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及儀器

1.2.1 試劑BIOG游離RNA提取試劑，購(gòu)于常州百代生物科技股份有限公司；PrimeScriptTMRT Reagent Kit和TB Green?Premix Ex TaqTMII購(gòu)于日本TaKaRa公司；人AURKA ELISA試劑盒購(gòu)于河南百奧維克生物科技有限公司；DEPC水購(gòu)于北京蘭杰柯科技有限公司。

1.2.2 儀器QunantStudioDx型PCR儀購(gòu)于美國(guó)Applied Biosystems公司；NanoDrop型微量核酸蛋白濃度測(cè)定儀購(gòu)于美國(guó)Thermo公司；PHOMO型酶標(biāo)儀購(gòu)于鄭州安圖生物工程有限公司。

1.2.3 引物設(shè)計(jì)AURKA為目的基因，GAPDH作為內(nèi)參基因，由上海生工生物工程股份有限公司合成。引物序列為：AURKA基因，上游5′-GGAATATGCAC CACTTGGAACA-3′，下 游5′-TAAGACAGGGCATTT GCCAAT-3′；GAPDH基因，上游5′-AGAAGGCTGG GGCTCATTTG-3′，下游5′-AGGGGCCATCCACAGTC TTC-3′。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 篩選差異表達(dá)基因GEO2R是基因表達(dá)綜合(Gene Expression Omnibus，GEO)數(shù)據(jù)庫(kù)自帶的基于R語(yǔ)言的在線分析工具，允許用戶(hù)對(duì)GEO數(shù)據(jù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換和復(fù)雜分析，以幫助識(shí)別和可視化差異基因表達(dá)[5]。通 過(guò)GEO2R對(duì)GSE63514、GSE52903、GSE39001、GSE27678和GSE9750共5個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集中癌組織和癌旁正常組織樣本進(jìn)行分組，以調(diào)整后的P＜0.05和|log2(FC)|＞1為標(biāo)準(zhǔn)，篩選兩組樣本的DEGs。FC(fold change)為基因表達(dá)的差異倍數(shù)變化，log2(FC)＞1的基因定義為上調(diào)基因，log2(FC)＜-1的基因定義為下調(diào)基因。通過(guò)在線分析網(wǎng)站繪制Venn圖，獲得5個(gè)GEO數(shù)據(jù)芯片上調(diào)基因的交集與下調(diào)基因的交集。

1.3.2 功能富集分析在DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇“Functional Annotation”分析工具，批量輸入通過(guò)Venn圖獲得的DEGs，“Select species”輸入“Homo sapiens”，提交數(shù)據(jù)后進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)功能注釋分析和京都基因與基因組百科全書(shū)(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析。以P＜0.05為標(biāo)準(zhǔn)篩選重要的功能注釋及通路富集結(jié)果。

1.3.3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析利用STRING在線數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建DEGs介導(dǎo)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)，以揭示它們之間的復(fù)雜相互作用。設(shè)置最低關(guān)聯(lián)度為0.7，并隱藏網(wǎng)絡(luò)中孤立的和部分連接的節(jié)點(diǎn)。將分析結(jié)果導(dǎo)入Cytoscape[3]軟件進(jìn)行可視化，應(yīng)用Cytohubba[6]插件進(jìn)行關(guān)聯(lián)度分析，取關(guān)聯(lián)度排名前10的差異表達(dá)基因節(jié)點(diǎn)作為關(guān)鍵基因。

1.3.4 生存預(yù)后分析Kaplan-Meier plotter是常用的檢測(cè)基因與腫瘤患者預(yù)后相關(guān)性的在線分析網(wǎng)站[7]，對(duì)10個(gè)關(guān)鍵基因進(jìn)行生存分析，篩選出與宮頸癌預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)志物。選擇“RNA-seq Start KM plotter for pan-cancer”，將篩選出的樞紐基因輸入，限定條件為總體生存期(OS)，生存時(shí)間統(tǒng)計(jì)最長(zhǎng)為120個(gè)月。腫瘤樣本為304例宮頸癌患者，腫瘤病理類(lèi)型、分期及其病人性別等其他條件不做限制，進(jìn)行Kaplan-Meier生存分析。以P＜0.05作為條件篩選出與宮頸癌預(yù)后相關(guān)的關(guān)鍵基因。

1.3.5 關(guān)鍵基因mRNA水平的表達(dá)基因表達(dá)譜交互式分析(gene expression profiling interactive analysis，GEPIA)可對(duì)基于癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas，TCGA)和基因型-組織表達(dá)(the genotype-tissue expression，GTEx)數(shù)據(jù)庫(kù)的腫瘤和正常組織進(jìn)行基因表達(dá)分析[8]。在GEPIA2表達(dá)分析模塊選擇Box Plot，數(shù)據(jù)來(lái)源選擇CC，得到關(guān)鍵基因在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達(dá)情況，選擇Stage Plot分析關(guān)鍵基因與腫瘤病理分期的關(guān)系。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.3.6 關(guān)鍵基因蛋白水平的表達(dá)人類(lèi)蛋白質(zhì)圖譜(the human protein atlas，HPA)可對(duì)編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色研究。利用HPA數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)一步驗(yàn)證與宮頸癌患者生存相關(guān)的4個(gè)關(guān)鍵基因在組織中蛋白水平的表達(dá)情況。組織圖譜模塊獲得關(guān)鍵基因在正常宮頸組織的免疫組織化學(xué)染色，病理圖譜模塊獲得其在宮頸癌組織的免疫組織化學(xué)染色，比較這些關(guān)鍵基因的抗體在宮頸癌組織和正常組織中免疫組織化學(xué)染色的差異。

1.3.7 血清游離AURKA mRNA及蛋白檢測(cè)血液離體后立即分離血清，提取血清循環(huán)游離RNA，使用微量核酸蛋白濃度測(cè)定儀檢測(cè)血清RNA的濃度和純度，以DEPC水作為空白對(duì)照，吸取2μL提取的RNA溶液進(jìn)行檢測(cè)。血清RNA濃度為40～160 ng/μL，260 nm和280 nm波長(zhǎng)下的吸光度之比在1.8～2.1之間，提示RNA濃度和純度符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求，利用qPCR檢測(cè)血清AURKA mRNA的表達(dá)，反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)qPCR的擴(kuò)增曲線和熔解曲線，利用2-ΔΔCT計(jì)算樣本目的基因的相對(duì)表達(dá)量，即ΔCT＝CT，目的基因-CT，對(duì)照基因，ΔΔCT＝ΔCT，實(shí)驗(yàn)組-ΔCT，對(duì)照組。ΔΔCT值越高，表示基因表達(dá)水平越低。采用ELISA檢測(cè)血清AURKA蛋白水平的表達(dá)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，根據(jù)曲線方程計(jì)算各樣本中AURKA的濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0和GraphPad Prism 9.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。計(jì)量資料進(jìn)行Shapiro-Wilk正態(tài)性檢驗(yàn)和Levene方差齊性檢驗(yàn)，正態(tài)分布資料以±s表示，偏態(tài)分布以M(Q)表示。正態(tài)分布且方差齊時(shí)多組比較采用方差分析，否則采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。采用Spearman秩檢驗(yàn)分析血清AURKA mRNA及蛋白的相關(guān)性。利用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)及曲線下面積(area under curve，AUC)評(píng)估血清AURKA對(duì)CC的診斷價(jià)值。采用χ2檢驗(yàn)分析血清AURKA mRNA表達(dá)與CC患者臨床病理特征間的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1 CC相關(guān)差異表達(dá)基因

通過(guò)GEO2R在線分析5個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集中187例宮頸癌組織和80例正常宮頸組織基因測(cè)序結(jié)果?；鹕綀D顯示了每個(gè)數(shù)據(jù)集中DEGs分布(見(jiàn)圖1)。Venn圖對(duì)數(shù)據(jù)取交集得到60個(gè)共同的差異表達(dá)基因(見(jiàn)表1)，包括41個(gè)上調(diào)和19個(gè)下調(diào)基因(見(jiàn)圖2)。

圖1 5個(gè)數(shù)據(jù)集差異基因的火山圖

表1 60個(gè)共表達(dá)的差異表達(dá)基因

圖2 Venn圖顯示5個(gè)數(shù)據(jù)集共有差異表達(dá)基因的交集

2.2 GO和KEGG富集分析

GO富集分析結(jié)果顯示，差異表達(dá)基因主要參與的生物過(guò)程(biological process，BP)為細(xì)胞分裂、DNA復(fù)制、有絲分裂的G1/S期轉(zhuǎn)換、有絲核分裂、細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)錄的負(fù)調(diào)控、p53類(lèi)介體對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控、有絲分裂的G2/M期轉(zhuǎn)換、DNA修復(fù)、細(xì)胞周期等；主要參與的細(xì)胞成分(cell component，CC)為核質(zhì)、細(xì)胞質(zhì)、膜、主軸、微管、中心體、蛋白質(zhì)復(fù)合物、著絲粒、染色體、MCM復(fù)合體等；主要參與的分子功能(molecular function，MF)為蛋白質(zhì)結(jié)合、ATP結(jié)合、DNA結(jié)合、酶結(jié)合、蛋白質(zhì)同源二聚化活性、蛋白激酶結(jié)合、染色質(zhì)結(jié)合、微管結(jié)合、蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、DNA解旋酶活性等(見(jiàn)圖3A)。KEGG通路富集結(jié)果顯示，差異表達(dá)基因主要富集在DNA復(fù)制、細(xì)胞周期、p53信號(hào)通路、錯(cuò)配修復(fù)、嘧啶代謝、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂、鉑耐藥、泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)水解、病毒致癌等信號(hào)通路(見(jiàn)圖3B)。

圖3 差異表達(dá)基因功能富集可視化結(jié)果

2.3 DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)分析

通過(guò)STRING在線分析構(gòu)建DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)中總共包含60個(gè)節(jié)點(diǎn)和660個(gè)邊(見(jiàn)圖4A)。通過(guò)Cytoscape軟件對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行可視化處理，利用Cytohubba插件計(jì)算出關(guān)聯(lián)度前10的節(jié)點(diǎn)基因作為宮頸癌的重要關(guān)鍵基因，分別為CDK1、NCAPG、TOP2A、AURKA、UBE2C、RRM2、TTK、CDC20、MCM2、RFC4(見(jiàn)圖4B)。

圖4 差異表達(dá)基因的PPI網(wǎng)絡(luò)和樞紐基因

2.4 AURKA基因表達(dá)與CC患者的生存分析

Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，10個(gè)關(guān)鍵基因中篩選出4個(gè)基因與TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中宮頸癌患者生存相關(guān)，且4個(gè)關(guān)鍵基因均為表達(dá)上調(diào)基因，分別為AURKA、CDK1、MCM2、RFC4。其中AURKA基因的表達(dá)水平與宮頸癌患者10年總體生存率呈負(fù)相關(guān)，即AURKA基因高表達(dá)的宮頸癌患者生存時(shí)間更短(見(jiàn)圖5)。

圖5 宮頸癌患者的生存曲線

2.5 AURKA基因表達(dá)驗(yàn)證

2.5.1 AURKA基因轉(zhuǎn)錄水平的差異GEPIA2表達(dá)分析模塊分析結(jié)果顯示與正常組織相比，AURKA mRNA在宮頸癌組織中高表達(dá)(P＜0.05)，且與GEO數(shù)據(jù)集的分析結(jié)果一致(見(jiàn)圖6)。進(jìn)一步分析關(guān)鍵基因與宮頸癌分期的關(guān)系，結(jié)果顯示AURKA mRNA在宮頸癌不同階段的表達(dá)水平存在顯著差異(P＜0.05)，隨著腫瘤分期的進(jìn)展AURKA mRNA的表達(dá)升高(見(jiàn)圖7)。

圖6 GEPIA2在線工具分析結(jié)果

圖7 AURKA mRNA在宮頸癌不同分期的表達(dá)

2.5.2 AURKA蛋白水平差異HPA數(shù)據(jù)庫(kù)的免疫組織化學(xué)分析結(jié)果顯示，與正常宮頸組織相比，宮頸癌組織中AURKA的抗體特異性著色程度均加深，即在宮頸癌組織中表達(dá)較高。

2.6 CSCC患者血清AURKA mRNA及蛋白的表達(dá)

AURKA mRNA擴(kuò)增曲線為平滑的S型曲線，閾值循環(huán)數(shù)(CT)值在20～30之間，提示擴(kuò)增結(jié)果可靠。熔解曲線為單一峰，沒(méi)有引物二聚體的產(chǎn)生，表示特異性較好(見(jiàn)圖8)。CSCC和CIN患者血清AURKA mRNA的相對(duì)表達(dá)水平明顯高于健康體檢者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。CSCC與CIN患者血清AURKA mRNA的相對(duì)表達(dá)水平無(wú)顯著差異。CSCC患者血清AURKA蛋白的表達(dá)水平明顯高于CIN及健康體檢者(P＜0.05)，與血清AURKA mRNA相對(duì)表達(dá)不同的是，CIN患者與健康體檢者血清AURKA蛋白表達(dá)水平無(wú)顯著差異(見(jiàn)圖9)。經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，血清AURKA mRNA與蛋白表達(dá)水平呈正相關(guān)關(guān)系，但關(guān)聯(lián)性較弱(r＝0.237，P＝0.020)。

圖8 AURKA mRNA擴(kuò)增曲線及熔解曲線

圖9 宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者血清AURKA mRNA及蛋白的表達(dá)

2.7 血清AURKA的表達(dá)對(duì)CSCC的臨床診斷價(jià)值

根據(jù)ROC曲線，血清AURKA mRNA和蛋白預(yù)測(cè)CSCC最佳截?cái)嘀捣謩e為2.028和3.239，此時(shí)曲線下面積(AUC)分別為0.869(敏感度75%，特異度90%)和0.699(敏感度85.4%，特異度60%)(見(jiàn)圖10)。根據(jù)ROC曲線的截?cái)嘀?，將AURKA mRNA表達(dá)水平分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。經(jīng)χ2檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，血清中高表達(dá)與低表達(dá)AURKA mRNA的CSCC患者年齡、分化程度均無(wú)明顯差異(P＞0.05)，而患者FIGO分期、是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及肌層浸潤(rùn)深度差異明顯(P＜0.05)。血清中高表達(dá)AURKA mRNA的CSCC患者往往臨床分期較晚、瘤組織較大、肌層浸潤(rùn)更深、更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(見(jiàn)表2)。

表2 血清AURKA mRNA表達(dá)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系

圖10 AURKA mRNA及蛋白預(yù)測(cè)宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的ROC曲線

3 討論

本研究比較了5個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集中宮頸癌組織與正常宮頸組織的mRNA表達(dá)譜，篩選出共同的DEGs，并通過(guò)多種生物信息學(xué)工具綜合分析它們的潛在功能。GO功能注釋結(jié)果顯示，DGEs在細(xì)胞有絲分裂、核質(zhì)、染色體和DNA解旋酶活性中顯著富集，表明其中一些DEGs可能定位于細(xì)胞核中，通過(guò)增強(qiáng)宮頸癌中的DNA解旋酶活性參與細(xì)胞分裂周期過(guò)程以促進(jìn)細(xì)胞增殖。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)，DEGs在DNA復(fù)制、細(xì)胞周期、p53信號(hào)通路、卵母細(xì)胞減數(shù)分裂和病毒致癌等信號(hào)通路中顯著富集。Mine等[9]研究發(fā)現(xiàn)，基因染色體畸變直接或間接驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期失調(diào)和抗病毒基因活性，導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生發(fā)展。構(gòu)建共同DEGs的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，確定了關(guān)聯(lián)度較高的10個(gè)重要關(guān)鍵基因。通過(guò)Kaplan-Meier分析樞紐基因的表達(dá)與TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中宮頸癌患者生存預(yù)后之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)與CC預(yù)后相關(guān)的4個(gè)關(guān)鍵基因，即AURKA、CDK1、MCM2和RFC4。

為進(jìn)一步探究4個(gè)關(guān)鍵基因與宮頸癌發(fā)生的關(guān)系及相關(guān)的分子機(jī)制，將其導(dǎo)入STRING在線分析網(wǎng)站，結(jié)果顯示關(guān)鍵基因主要富集在細(xì)胞有絲分裂過(guò)程中，包括DNA復(fù)制、細(xì)胞分裂周期相變。Espinosa等[10]研究發(fā)現(xiàn)，有絲分裂是宮頸癌篩查、生存和治療靶標(biāo)的潛在標(biāo)志物來(lái)源，而抑制有絲分裂是重要的抗癌策略。由此推斷，4個(gè)關(guān)鍵基因作為促癌基因可能通過(guò)加速細(xì)胞周期轉(zhuǎn)換，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖分化，從而導(dǎo)致人類(lèi)宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展。PPI網(wǎng)絡(luò)和生存分析結(jié)果顯示AURKA基因是和CC分期及預(yù)后相關(guān)的潛在生物標(biāo)志物。

本研究基于生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示，與正常宮頸組織相比，CC組織中AURKA mRNA及蛋白表達(dá)較高。通過(guò)qPCR及ELISA技術(shù)檢測(cè)CSCC患者血清AURKA mRNA及蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示CSCC和CIN患者血清AURKA mRNA的表達(dá)明顯高于健康體檢者，CSCC血清AURKA蛋白的表達(dá)明顯高于CIN及健康體檢者。CSCC血清AURKA mRNA高表達(dá)組患者FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小及肌層浸潤(rùn)深度均分別高于AURKA mRNA低表達(dá)組(P＜0.05)，這提示血清中高表達(dá)AURKA mRNA可能具有預(yù)測(cè)CSCC患者臨床進(jìn)展和預(yù)后的作用。本研究結(jié)果及文獻(xiàn)報(bào)道相似，Twu等[11]通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)正常宮頸、CIN和浸潤(rùn)性宮頸癌(鱗癌和腺癌)組織中AURKA的表達(dá)，結(jié)果顯示其在浸潤(rùn)性宮頸癌和CIN組織中的表達(dá)顯著高于正常宮頸組織。與腺癌相比，鱗癌中AURKA的表達(dá)更高。Zhang等[7]采用qPCR檢測(cè)宮頸癌細(xì)胞系及74例宮頸癌患者配對(duì)癌組織和相應(yīng)非癌組織中AURKA mRNA的表達(dá)，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡和免疫組織化學(xué)測(cè)定細(xì)胞懸液和組織中AURKA蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示AURKA mRNA和蛋白在宮頸癌細(xì)胞系和組織中的表達(dá)顯著高于正常宮頸上皮細(xì)胞和非癌組織，AURKA mRNA表達(dá)與FIGO分期、腫瘤分化、宮旁浸潤(rùn)、淋巴結(jié)或血行轉(zhuǎn)移相關(guān)，高表達(dá)患者的OS和無(wú)病生存率更差，提示其可能在原發(fā)腫瘤的進(jìn)展和侵襲中發(fā)揮重要促癌作用，并有潛力成為宮頸癌早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。有學(xué)者提出AURKA表達(dá)可能預(yù)測(cè)宮頸癌患者的結(jié)局，但其在宮頸癌發(fā)病機(jī)制中的確切功能和分子機(jī)制尚不明確[12]。AURKA是細(xì)胞周期調(diào)節(jié)激酶，對(duì)維持基因組穩(wěn)定性至關(guān)重要[3]。先前的一項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，抑制AURKA可作為HPV E7癌基因的合成致死靶點(diǎn)，用小分子抑制劑Alisertib抑制AURKA可選擇性地靶向體內(nèi)表達(dá)HPV E7的細(xì)胞，AURKA的過(guò)度表達(dá)對(duì)HPV轉(zhuǎn)化的宮頸癌細(xì)胞的存活至關(guān)重要[13]。研究發(fā)現(xiàn)AURKA過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)G1/S細(xì)胞周期過(guò)渡，促進(jìn)細(xì)胞增殖，并保護(hù)細(xì)胞免受凋亡，產(chǎn)生抗腫瘤藥的化學(xué)耐受性[14]。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)CC患者血清中AURKA mRNA及蛋白的表達(dá)水平升高且與CSCC患者臨床進(jìn)展有關(guān)，二者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于CSCC診斷及監(jiān)測(cè)預(yù)后具有一定意義。