老年口腔癌患者Foxp3 mRNA、CD4+/CD8+、生存素表達及與病理特征相關性

潘晨 周特

口腔癌(oral cancer，OC)是臨床較為常見的頭頸部惡性腫瘤之一，流行病學調(diào)查顯示，我國OC發(fā)病率約為3.6/10萬～8.0/10萬，因OC患者細胞生長分裂速度較為緩慢，擴散轉(zhuǎn)移晚，大部分患者確診時已處于中晚期，喪失最佳治療時機，5年生存率僅為50.0%[1-3]。因此，加強對OC研究尤為重要。新近研究提出[4-5]，免疫相關的細胞因子及其相關的調(diào)節(jié)因子可能參與OC發(fā)生、發(fā)展。CD4+/CD8+可有效反映機體局部細胞免疫功能。叉頭狀轉(zhuǎn)錄因子P3(forkhead box p3，F(xiàn)oxp3)在調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)育、成熟中發(fā)揮著重要作用，可能引起腫瘤免疫逃逸[6]。生存素(Survivin)是一種細胞凋亡抑制蛋白，在前列腺癌[7]、胃癌[8]等多種惡性腫瘤組織中均呈異常高表達，但在老年OC診斷價值臨床報道較少。本研究探討Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA在老年OC、口腔潰瘍中的表達，并分析其與病理特征的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月～2020 年12 月江漢大學附屬黃陂區(qū)人民醫(yī)院收治的85 例OC患者(OC組)及85 例口腔潰瘍患者(潰瘍組)。納入標準：(1)OC組均經(jīng)手術病理組織學證實為OC；(2)潰瘍組均符合《口腔黏膜病學》[9]中口腔潰瘍標準，且均未發(fā)生癌變；(3)兩組年齡均>60 歲，且所有研究對象均簽署知情同意書。排除標準：(1)伴有甲狀腺功能亢進或減退、潰瘍性結腸炎、血色病者；(2)合并心腦肝腎等重要臟器器質(zhì)性病變者；(3)合并胃癌、結直腸癌或其他部位惡性腫瘤者；(4)合并自身免疫系統(tǒng)疾病或全身感染性疾病者；(5)伴有嚴重心理或精神障礙者。

1.2 主要試劑與儀器

乙二胺四乙酸(EDTA)(陜西晨明生物科技有限公司)；流式細胞儀(FACS Calibur)、鼠抗人CD4-Per CP、CD8-PE單克隆抗體(BD公司，美國)；酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑盒(武漢云克隆科技股份有限公司)；逆轉(zhuǎn)錄-多聚合酶鏈反應(RT-PCR)試劑盒(天根生化科技(北京)有限公司)。

1.3 實驗方法

入院后清晨空腹取外周血6 mL，取其中2 mL，EDTA抗凝，免疫熒光染色和固定，采用流式細胞儀測定CD4+/CD8+；取其中2 mL，常規(guī)離心處理[3 000 r/min離心12 min(離心半徑10 cm)]，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定Survivin水平；另取其中2 mL，采用RT-PCR法檢測Foxp3 mRNA表達。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結 果

2.1 兩組人口學資料、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比較

兩組年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)、飲酒史、既往史比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；OC組吸煙史、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA與潰瘍組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表 1)。

表 1 兩組人口學資料、Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA表達比較

2.2 OC不同病理特征者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比較

不同T分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移患者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(表 2)。

表 2 OC不同病理特征者Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA比較

2.3 Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA與T分期關系

采用Spearman進行相關性分析，結果顯示，Survivin(r=0.836，P<0.001)、Foxp3 mRNA(r=0.749，P<0.001)與T分期呈正相關，CD4+/CD8+與T分期呈負相關(r=-0.772，P<0.001)(圖 1～3)(賦值：1=T1，2=T2，3=T3，4=T4)。

圖 1 Survivin與T分期相關性 圖 2 Foxp3 mRNA與T分期相關性 圖 3 CD4+/CD8+與T分期相關性

3 討 論

Survivin具有抗細胞凋亡、調(diào)節(jié)細胞分裂、抑制免疫系統(tǒng)等多重作用，與癌癥血管生成、侵襲性、患者預后存在密切聯(lián)系[10-11]，既往研究已證實[12]，其可作為腫瘤基因治療靶標。本研究發(fā)現(xiàn)，老年OC患者Survivin水平顯著高于口腔潰瘍患者，并與T分期存在正相關關系，結合常建蘭等[13]研究考慮機制可能在于Survivin通過降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9表達，抑制細胞凋亡相關的膜表面分子Fas介導的細胞凋亡抑制免疫系統(tǒng)，可促進癌細胞增殖，抑制癌細胞凋亡，從而達到加快OC發(fā)生、發(fā)展的目的。提示Survivin與老年OC發(fā)生、發(fā)展密切相關，有望成為老年OC診治的新靶點。

T淋巴細胞是機體抗腫瘤過程中重要免疫細胞[14-15]，其中CD4+細胞可輔助機體抑制癌細胞異常增殖，CD8+細胞有助于評估機體免疫抑制狀態(tài)程度，CD4+/CD8+下降可幫助癌細胞逃脫免疫監(jiān)視，促使癌細胞進行性增殖[16]。通過對比研究可知，老年OC患者CD4+/CD8+水平低于口腔潰瘍，與李斌等[17]研究相似，這可能是由于OC患者處于免疫抑制狀態(tài)，利于癌細胞生存，故CD4+/CD8+水平較低，而口腔潰瘍發(fā)生時存在炎癥損傷，為抵抗感染，促進炎癥修復，機體宿主天然免疫系統(tǒng)被激活，故CD4+/CD8+水平較高。本研究顯示，CD4+/CD8+水平與老年OC及其病理特征有關，再次佐證了CD4+/CD8+可作為老年OC、口腔潰瘍的鑒別標志物。本研究進一步提出，隨T分期增加，老年OC患者CD4+/CD8+顯著下降，推測提高CD4+/CD8+表達有助于抑制癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移能力，促進預后改善。

Foxp3是調(diào)節(jié)性T細胞的特異性標志分子，可通過某種作用機制，調(diào)控效應性T細胞免疫功能[18-19]。Kim等[20]研究顯示，膽道癌患者腫瘤邊緣浸潤的FoxP3-CD4+輔助性T細胞密度可能與臨床結局有關。本研究數(shù)據(jù)表明，F(xiàn)oxp3異常高表達可能增加老年OC發(fā)生風險，調(diào)控癌細胞惡性生物學行為，與吳慧等[21]觀點基本一致，這可能歸因于Foxp3表達通過影響癌細胞中血管內(nèi)皮生長因子、白細胞介素10表達，促進新生血管形成，增加調(diào)節(jié)性T細胞對自身免疫系統(tǒng)的抑制功能，調(diào)節(jié)機體免疫監(jiān)視功能，引起機體對腫瘤的免疫耐受，從而促進OC發(fā)生與發(fā)展。不同T分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移患者Foxp3 mRNA比較，差異有統(tǒng)計學意義，且Foxp3 mRNA與T分期呈正相關，這一結果表明Foxp3 mRNA高表達可能在老年OC惡性生物學行為中起著重要調(diào)控作用，采用基因靶向技術沉默F(xiàn)oxp3 mRNA表達，可能有助于促進患者病情改善，防治腫瘤惡性生物學行為的增強。

綜上所述，老年口腔癌患者Survivin、Foxp3 mRNA表達升高，CD4+/CD8+降低，并與T分期、淋巴結轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移有關，有望成為評估腫瘤惡性生物學行為的標志物。但本研究樣本量較小，且屬單中心研究，有待進一步擴大樣本量多中心研究Survivin、CD4+/CD8+、Foxp3 mRNA之間相互調(diào)控關系及可能作用機制，以期為老年OC聯(lián)合靶向治療提供科學支持。