• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    三七的組織培養(yǎng)研究進(jìn)展△

    2022-11-28 04:50:11強(qiáng)寶寶梁瑩候小利秦雙雙韋坤華繆劍華
    中國現(xiàn)代中藥 2022年8期
    關(guān)鍵詞:胚狀體不定根體細(xì)胞

    強(qiáng)寶寶,梁瑩,候小利,秦雙雙,韋坤華,繆劍華

    廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/廣西壯族自治區(qū)中藥資源智慧創(chuàng)制工程研究中心,廣西 南寧 530023

    三七Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen、人參和西洋參都是人參屬的藥用植物,在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)上具有很高的藥用價(jià)值[1-3]。三七是中國傳統(tǒng)名貴中藥材,主要分布于中國云南省文山市,全草入藥,享有“人參之王的美譽(yù)”,已有400 多年的栽培歷史[4-5]?,F(xiàn)在能查閱的最早使用三七的記錄為楊清叟的《仙傳外科方集》,已有640 多年的歷史[6]。三七有止血化瘀、活血定痛的功效,被稱為“止血之神藥”。三七廣泛用于治療心血管疾病、腦血管紊亂、炎癥、軀體疼痛、動(dòng)脈硬化、外傷及損傷引起的內(nèi)外出血[7-12],還有抗腫瘤和抗衰老的功效[13]。三七中人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd和人參皂苷Rg1含量高于人參和西洋參[14]。

    近年來,在亞洲和世界其他許多國家,三七廣泛應(yīng)用于藥品、食品和化妝品領(lǐng)域。在中國,三七年需求量約為5000 t[15-16],野生三七遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足需求[17],因此,研究者試圖利用組織培養(yǎng)技術(shù)來獲得三七苗。目前可以通過三七愈傷組織和種胚2 種途徑誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎,經(jīng)過分化誘導(dǎo)和再培養(yǎng)可以獲得大量三七組培苗。此外,三七細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和不定根培養(yǎng)也能生產(chǎn)可控制的活性代謝產(chǎn)物。本文將對(duì)近年來國內(nèi)外三七組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    1 愈傷組織誘導(dǎo)

    通過愈傷組織建立的組織培養(yǎng)技術(shù)不僅是植物快速繁殖的手段,也是植物遺傳改良、品種選育和提高次生代謝產(chǎn)物的理想途徑。鄭光植等[18]研究表明,三七愈傷組織在MS 培養(yǎng)基中比Heller、Miller、B5 和B5+N中的培養(yǎng)效果好。Zhou 等[17]以MS 培養(yǎng)基+3%蔗糖+10%椰奶+2 mg·L-12,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.1 mg·L-1激動(dòng)素(KT)作為培養(yǎng)條件,研究了低聚糖(鐵皮石斛、人參和天竺葵酊年幼細(xì)胞壁的酸水解產(chǎn)物)對(duì)三七愈傷組織的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)三者質(zhì)量濃度分別為15、15、20 mg·L-1時(shí)有益于三七愈傷組織皂苷的產(chǎn)生。王定康等[19]分別以2、3年生三七的花藥作為外植體,在MS+2.0 mg·L-12,4-D+1.5 mg·L-16-芐基嘌呤(6-BA)+1.0 mg·L-13-吲哚乙酸(IAA)+6%蔗糖的條件下,成功誘導(dǎo)了愈傷組織,誘導(dǎo)率分別為43.0%、55.0%,表明3年生三七花藥愈傷組織的出愈率和質(zhì)量均優(yōu)于2年生花藥。因此,進(jìn)行三七花藥培養(yǎng)以3 年生花藥為外植體較合適。有研究對(duì)誘導(dǎo)三七花藥愈傷組織的因素進(jìn)行了研究[20],結(jié)果表明,在MS+2.0 mg·L-12,4-D+1.5 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1IAA+6%蔗糖的培養(yǎng)基上,發(fā)育期處于單核中期的花粉誘導(dǎo)率最高,可達(dá)50%;在以上激素配比條件下,比較了MS、B5和N6培養(yǎng)基的愈傷組織誘導(dǎo)效果,發(fā)現(xiàn)MS培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率較高,且愈傷組織易增殖;6%蔗糖能產(chǎn)生較高的誘導(dǎo)率,后期長勢(shì)良好;將花藥在低溫3~4、7~8 ℃條件下分別處理4~6、6~8 d,均可以提高愈傷組織誘導(dǎo)率。

    黃天衛(wèi)等[21]用三七的幼嫩花蕾在MS+1.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1IAA+30 g·L-1蔗糖的條件下成功誘導(dǎo)出了愈傷組織,誘導(dǎo)率可以達(dá)到55.6%。張鐵等[22]研究表明,三七無菌苗的嫩芽、葉、葉柄、不定根和主根均能誘導(dǎo)出愈傷組織,尤以三七葉柄為外植體誘導(dǎo)出的愈傷組織質(zhì)量較好,最容易增殖,較適合的培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-16-BA+2.0 mg·L-12,4-D+3%蔗糖。李濤等[23]采用文山三七塊根作為外植體,研究獲得了最佳愈傷組織誘導(dǎo)條件為MS+1.0 mg·L-1KT +1.0 mg·L-12,4-D+30 g·L-1蔗糖。

    許鴻源等[24]研究了5組培養(yǎng)基對(duì)三七莖段愈傷組織發(fā)生和增殖的影響,發(fā)現(xiàn)在MS+2 mg·L-12,4-D的培養(yǎng)基上添加2 mg·L-1靈發(fā)素(LFS)可以促進(jìn)莖段愈傷組織早發(fā)生1~2 周,誘導(dǎo)率達(dá)81%,比2,4-D高出30%以上,而添加了6-BA、KT和玉米素(ZT)的培養(yǎng)基作用不明顯,而且LFS可以促進(jìn)愈傷組織增殖,40 d后收獲干質(zhì)量為81.5 mg·g-1,是不含LFS的3~4倍。此研究結(jié)果利用LFS建立了高效的三七愈傷組織生產(chǎn)模式。Li 等[25]研究表明,三七的根在MS+2.0 mg·L-12,4-D+1.5 mg·L-16-BA 的培養(yǎng)基中暗培養(yǎng),4周后可得到愈傷組織,誘導(dǎo)率可達(dá)到100%,是最佳的誘導(dǎo)條件。齊琳琳等[26]研究表明,激素配比對(duì)愈傷組織中皂苷含量的影響最大,在0.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA 組合下,培養(yǎng)物中總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)最多,達(dá)到(4.72±0.29)%;在總氮量為60 mmol·L-1條件下,45 mmol·L-1硝酸鉀+7.5 mmol·L-1硝酸氫銨(NO3-∶NH4+為7∶1)時(shí),愈傷組織皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)最多,達(dá)到(4.71±0.17)%;分別在1000、500 lx 光強(qiáng)下每天光照12 h 的愈傷組織皂苷含量均低于黑暗培養(yǎng)的愈傷組織,三者皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為(1.94±0.31)%、(2.38±0.12)% 和(3.57±0.27)%。光照引起愈傷組織表面變綠及細(xì)胞分化,可能是抑制愈傷組織中皂苷合成與積累的主要原因。

    2 胚胎誘導(dǎo)及再培養(yǎng)

    體細(xì)胞胚胎的發(fā)生是建立植物無性繁殖可靠的再生方法[27-28]。目前,可以通過三七的愈傷組織和種胚2種途徑誘導(dǎo)三七產(chǎn)生體細(xì)胞胚胎。張琪等[29]對(duì)沙藏后三七種子的種胚進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)在MS+1 mg·L-1IAA或萘乙酸(NAA)的培養(yǎng)基上暗培養(yǎng)可誘導(dǎo)產(chǎn)生胚狀體,繼而轉(zhuǎn)入MS+1 mg·L-1赤霉素(GA3)+0.5 mg·L-1IAA 培養(yǎng)基上光照培養(yǎng),大約80%的胚狀體可發(fā)育成小植株。

    許鴻源等[30]以三七莖段愈傷組織,在MS+1.5 mg·L-12,4-D+2 mg·L-1LFS的培養(yǎng)基,暗培養(yǎng)2~3個(gè)月,胚狀體發(fā)生率高達(dá)90%左右。將胚狀體轉(zhuǎn)移至上述培養(yǎng)基光照條件下進(jìn)行培養(yǎng),大約30%胚狀體可以發(fā)育完整的苗。這些現(xiàn)象表明,IAA、NAA、6-BA、KT 和LFS 等都可以在三七胚狀體發(fā)生的誘導(dǎo)中發(fā)揮作用,但是作為單一激素的報(bào)道,目前還只有LFS。LFS 誘導(dǎo)三七莖段愈傷組織發(fā)生胚狀體非常適宜,但是對(duì)于促進(jìn)胚狀體成苗效果一般。

    You 等[11]以三七不定根在MS+1.0 mg·L-12,4-D的固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)5 周,得到乳白色、易碎、快速增值的愈傷組織。再將其轉(zhuǎn)移到MS+0~1.0 mg·L-12,4-D 的固體培養(yǎng)基中,4 周后,在含有0.5 mg·L-12,4-D 的條件下,體細(xì)胞胚胎發(fā)生率可達(dá)100%,平均每個(gè)愈傷組織有32.7 個(gè)體細(xì)胞胚。將獲得的體細(xì)胞胚胎在不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑的1/2 MS 培養(yǎng)基上再培養(yǎng),2 周后生根,8 周后發(fā)芽。體細(xì)胞胚胎發(fā)芽緩慢,而且尚不能完全轉(zhuǎn)化為同時(shí)具有根和芽的完整小苗,推測(cè)可能是其仍然保持休眠[31-32]。添加0~4 mg·L-1的GA3能很好地促進(jìn)體細(xì)胞胚胎發(fā)芽,并能分化為同時(shí)具有適宜根和芽的完整小苗,此現(xiàn)象在人參和西洋參體細(xì)胞胚胎的培養(yǎng)中也有報(bào)道[33-34]。

    3 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)

    進(jìn)行植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)研究是植物組織培養(yǎng)向工業(yè)化生產(chǎn)轉(zhuǎn)化的重要步驟。植物細(xì)胞懸浮培養(yǎng)所用的細(xì)胞來自愈傷組織,或直接來自植物的器官及組織的外植體。植物細(xì)胞液體培養(yǎng)具有繁殖速度快的特點(diǎn),可大規(guī)模培養(yǎng),甚至可能實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。在人參屬植物的懸浮培養(yǎng)中,碳源、氮源和磷酸鹽源等培養(yǎng)基成分對(duì)植物細(xì)胞中人參皂苷的生物量和產(chǎn)量均有顯著影響。

    在三七的組織培養(yǎng)中,蔗糖質(zhì)量濃度從20 g·L-1增加到40 g·L-1,總皂苷的含量提高了2.3 倍[35]。在三七懸浮培養(yǎng)中,較高的氮源也可以提高人參皂苷的產(chǎn)量。Zhang 等[36]研究表明,隨著硝酸鹽濃度從0增加到60 mmol·L-1,三七細(xì)胞生物量從4.9 g·L-1增加到10.9 g·L-1。適當(dāng)?shù)牧姿猁}濃度也可以影響三七懸浮培養(yǎng)中皂苷的含量。Zhong 等[37]研究發(fā)現(xiàn),三七懸浮液中磷酸鹽添加量為1.25 mmol·L-1時(shí),人參皂苷的產(chǎn)率最佳。

    植物細(xì)胞培養(yǎng)是一種替代自然植物獲得有價(jià)值次生代謝產(chǎn)物的有效途徑[38]。Wang[39]等研究表明,三七細(xì)胞在MS+2 mg·L-12,4-D+0.7 mg·L-1KT 培養(yǎng)基中以110 r·min-1,黑暗條件下懸浮培養(yǎng)4 d 后,加入200 μmol·L-1茉莉酸2-羥乙基酯(HEJA),能更有效地刺激人參皂苷的生物合成,改變其多樣性。在第13 天,獲得最高的人參皂苷含量,與茉莉酸甲酯(MJ)相比,HEJA 誘導(dǎo)的人參皂苷總含量和人參皂苷Rb 與人參皂苷Rg 的比率分別提高了約60%、30%。Zhong 等[40]利用生物反應(yīng)器研究表明,在三七細(xì)胞懸浮培養(yǎng)中的第8天,添加200μmol·L-1MJ,最終可促使人參皂苷Rg1、人參皂苷Re和人參皂苷Rb1質(zhì)量濃度分別從(42±8)、(42±9)、(41±6)mg·L-1增加到(104±6)、(71±5)、(95±6)mg·L-1,分別提高了150%、70%、130%。

    近年來,有研究表明,細(xì)胞外Ca2+影響植物次生代謝物的產(chǎn)生[41]。Yue 等[42]研究發(fā)現(xiàn),在三七細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的3 d 內(nèi),人參皂苷Rb1的合成依賴于培養(yǎng)基所含Ca2+濃度。當(dāng)Ca2+的濃度為8 mmol·L-1時(shí),人參皂苷Rb1的含量達(dá)到最大(1.88±0.03)mg·g-1,比Ca2+的濃度為0、3 mmol·L-1時(shí)高出60%和25%。在植物的組織培養(yǎng)過程中,添加溶菌酶具有防止污染的作用,其對(duì)三七皂苷的合成和細(xì)胞生長也具有促進(jìn)作用。周立剛等[43]以MS+1 mg·L-12,4-D+0.05 mg·L-1KT+10%椰乳,120 r·min-1下進(jìn)行三七愈傷組織暗培養(yǎng),在誘導(dǎo)的第10 天加入100 mg·L-1溶菌酶能明顯促進(jìn)皂苷合成,皂苷產(chǎn)率為1.62 g·L-1,比對(duì)照組提高63.48%。

    王艷等[44]以三七種子剝?nèi)∽尤~,以MS+2 mg·L-12,4-D+1 mg·L-1KT為培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織,并在此培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織懸浮培養(yǎng),100 r·min-1測(cè)定懸浮培養(yǎng)過程中皂苷生物合成的動(dòng)力學(xué)變化。結(jié)果表明,人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rb1初始培養(yǎng)值分別為3.63、2.34、0.42、0.24 mg·g-1,培養(yǎng)25~30 d 后增至最高,分別為9.72、7.02、2.37、1.86 mg·g-1,而人參皂苷Rh2、人參皂苷F1含量無明顯變化,即三七愈傷組織生物合成過程中原人參三醇型皂苷(人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rh1)增長顯著,并表明七愈傷組織培養(yǎng)25 d,總皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到最高,為20.58 mg·g-1,主要為原人參三醇型皂苷。

    4 不定根誘導(dǎo)

    植物不定根是不按正常時(shí)序發(fā)生,出現(xiàn)在非正常位置的根。大多數(shù)情況下,不定根的發(fā)生是由于植物器官受傷或植物激素等外界刺激,通過植物的莖、葉、節(jié)、愈傷組織誘導(dǎo)而產(chǎn)生[45]。如今,人參不定根培養(yǎng)已成功實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化,反應(yīng)器規(guī)模達(dá)到10 000 kg[46],而三七在這方面還處于起步階段。

    Gao 等[47]以3 年生三七的葉、葉柄和根,在MS固體培養(yǎng)基中暗培養(yǎng)誘導(dǎo)不定根,發(fā)現(xiàn)側(cè)根外植體在第10天出現(xiàn)愈傷組織,第35天出現(xiàn)不定根,不定根誘導(dǎo)率為44%。葉柄外植體在第14 天出現(xiàn)愈傷組織,第45 天出現(xiàn)不定根,誘導(dǎo)率為37%,誘導(dǎo)不定根最佳條件為MS+3 mg·L-1IBA。在培養(yǎng)的第35天,不定根中的皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到最大值(46 mg·g-1),并表明2,4-D 只是誘發(fā)愈傷組織的形成,IBA 是誘發(fā)三七形成不定根的有效激素,在人參的組織培養(yǎng)研究中也發(fā)現(xiàn)相似的結(jié)果[48-49]。

    如今,利用茉莉酸(JA)、MJ 和二氫茉莉酸甲酯(MDJ)等茉莉酸信號(hào)化合物,在植物組織培養(yǎng)中刺激次生代謝產(chǎn)物的生物合成,越來越受到研究者的關(guān)注[50-51]。Qiang 等[52]總結(jié)發(fā)現(xiàn),茉莉酸類化合物具有促進(jìn)西洋參細(xì)胞和不定根培養(yǎng)物中皂苷含量積累的作用。研究表明,誘導(dǎo)處理后,可以誘導(dǎo)植物抗氧化酶活性增強(qiáng),保護(hù)植物免受活性氧的損害并減少次生代謝產(chǎn)物的損失[53-55]。JA 及其衍生物可以調(diào)控抗氧化酶活性,提高植物的廣泛防御反應(yīng)和次生代謝物含量[46,56]。淡墨[57]研究了MJ對(duì)三七不定根次生代謝產(chǎn)物的影響,表明MJ刺激后,三七不定根的次生代謝產(chǎn)物與天然三七根的次生代謝產(chǎn)物更為相似,證明MJ可以作為三七不定根有價(jià)值的誘導(dǎo)劑。Li等[25]將誘導(dǎo)得到的三七愈傷組織接種于MS+5 mg·L-1IBA培養(yǎng)基,在黑暗條件下暗培養(yǎng),4周后可得到不定根。不定根的最優(yōu)培養(yǎng)條件為搖床培養(yǎng)120 r·min-1,5/4 SH培養(yǎng)基+4%蔗糖+3.0 mg·L-1IBA+1.0 mg·L-1NAA。并在此培養(yǎng)條件加下,加入不同濃度的JA和MDJ,分別接種已獲得的不定根。發(fā)現(xiàn)接種后5 d,獲得最高多糖產(chǎn)量。接種后7 d,可獲得最高皂苷產(chǎn)量,5 mg·L-1JA 處理后皂苷總質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高(71.94 mg·g-1),比自然生長的根高出2.09倍,比對(duì)照組高8.45倍,多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為140.20 mg·g-1,比對(duì)照組高1.60 倍。MDJ 處理后,皂苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20.88 mg·g-1,比對(duì)照組高2.45 倍,多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為139.05 mg·g-1,比對(duì)照組高1.59 倍。可見,JA 和MDJ 都能刺激三七代謝產(chǎn)物的積累,JA處理后的效果優(yōu)于MDJ。

    5 問題及展望

    三七作為傳統(tǒng)名貴中藥材,應(yīng)用價(jià)值巨大。但其生長周期長、對(duì)生長條件要求苛刻、地理分布狹窄且面臨病蟲害的侵?jǐn)_,這些給三七的種植業(yè)帶來了嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。組織培養(yǎng)技術(shù)不僅可以克服這些弊端,還是植物快速繁殖的最佳途徑。通過對(duì)三七組織培養(yǎng)的研究,既可以實(shí)現(xiàn)快速繁殖,又可以生產(chǎn)主要的藥用成分,將補(bǔ)充和替代三七現(xiàn)有資源并繼續(xù)造福人類的有效途徑。目前,在三七的組織培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)兩大問題:一是愈傷組織增殖過程中使用傳統(tǒng)的固體培養(yǎng)基時(shí),三七愈傷組織生長比較緩慢;使用懸浮培養(yǎng)時(shí),雖然可以快速繁殖但是又容易形成團(tuán)塊狀的聚集體。二是三七愈傷組織形成的體細(xì)胞胚胎分化率低,不能全部分化成同時(shí)具有根和芽的完整植株,所以成苗率較低。如何有效解決這些問題,仍是未來需要繼續(xù)研究的方向。

    猜你喜歡
    胚狀體不定根體細(xì)胞
    日本落葉松胚狀體干化處理對(duì)萌發(fā)的影響
    煙草不定根發(fā)生研究進(jìn)展
    作物研究(2022年1期)2022-11-27 23:34:38
    HvLBD19基因?qū)Υ篼湶欢ǜl(fā)育的調(diào)控
    黃瓜胚狀體高頻再生體系的建立及優(yōu)化
    生長調(diào)節(jié)劑及莖表面機(jī)械損傷對(duì)烤煙莖不定根發(fā)生影響
    花椰菜雪劍4號(hào)合子胚增殖體系的建立
    浙江:誕生首批體細(xì)胞克隆豬
    新型冠狀病毒入侵人體細(xì)胞之謎
    科學(xué)(2020年4期)2020-11-26 08:27:10
    紫錐菊不定根懸浮共培養(yǎng)中咖啡酸衍生物積累研究
    內(nèi)皮前體細(xì)胞亞型與偏頭痛的相關(guān)性分析
    成人三级做爰电影| 热99re8久久精品国产| 最黄视频免费看| 成人黄色视频免费在线看| 国产国语露脸激情在线看| 国产精品亚洲av一区麻豆| svipshipincom国产片| 一本色道久久久久久精品综合| 高清在线国产一区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 午夜两性在线视频| 无遮挡黄片免费观看| 日韩欧美一区视频在线观看| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 最近最新免费中文字幕在线| 久久这里只有精品19| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 各种免费的搞黄视频| xxxhd国产人妻xxx| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 美女高潮到喷水免费观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 黑人猛操日本美女一级片| www日本在线高清视频| av在线app专区| 91成年电影在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 制服人妻中文乱码| 久久久久久免费高清国产稀缺| av视频免费观看在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 多毛熟女@视频| 老司机亚洲免费影院| 精品亚洲成国产av| 日本a在线网址| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲全国av大片| 国产在线视频一区二区| 99久久国产精品久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 老汉色∧v一级毛片| 久久亚洲国产成人精品v| 麻豆av在线久日| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老司机在亚洲福利影院| 丁香六月天网| 亚洲九九香蕉| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产在视频线精品| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜福利在线免费观看网站| 国产麻豆69| 美女福利国产在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 日本a在线网址| 色综合欧美亚洲国产小说| 又黄又粗又硬又大视频| 人妻 亚洲 视频| 交换朋友夫妻互换小说| 人人澡人人妻人| 国产亚洲一区二区精品| 91精品三级在线观看| 麻豆国产av国片精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 亚洲国产精品999| 日韩大码丰满熟妇| av国产精品久久久久影院| 飞空精品影院首页| 啦啦啦 在线观看视频| 久久久国产成人免费| 精品国产乱子伦一区二区三区 | av片东京热男人的天堂| 女性被躁到高潮视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产有黄有色有爽视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美日韩精品网址| 午夜福利,免费看| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产高清视频在线播放一区 | 国产免费视频播放在线视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 免费在线观看完整版高清| 久久性视频一级片| 国产免费视频播放在线视频| 国产在线一区二区三区精| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲国产中文字幕在线视频| 另类精品久久| 91成年电影在线观看| 国产97色在线日韩免费| 国产精品1区2区在线观看. | 午夜精品国产一区二区电影| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产成人免费观看mmmm| 超碰成人久久| 久久久欧美国产精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 黄片播放在线免费| www.自偷自拍.com| 男女下面插进去视频免费观看| 国产成人啪精品午夜网站| 一二三四在线观看免费中文在| 热99久久久久精品小说推荐| 一进一出抽搐动态| 老司机影院成人| 一区福利在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 丰满少妇做爰视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 色精品久久人妻99蜜桃| 中文字幕av电影在线播放| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久中文字幕一级| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 色视频在线一区二区三区| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产一区二区在线观看av| av不卡在线播放| 日韩精品免费视频一区二区三区| 国产精品成人在线| 中文字幕高清在线视频| 国产淫语在线视频| 后天国语完整版免费观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 丝袜喷水一区| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲国产欧美网| 久久久国产欧美日韩av| 日韩大码丰满熟妇| 99九九在线精品视频| 99久久人妻综合| 黑丝袜美女国产一区| 精品久久蜜臀av无| 久久久精品区二区三区| 午夜福利免费观看在线| 亚洲综合色网址| 九色亚洲精品在线播放| 久久中文看片网| 久久九九热精品免费| 天堂8中文在线网| 亚洲国产成人一精品久久久| 满18在线观看网站| 国产高清videossex| 欧美日韩黄片免| 视频区欧美日本亚洲| 成人国语在线视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产伦理片在线播放av一区| 男女边摸边吃奶| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 91老司机精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成年av动漫网址| 蜜桃在线观看..| 中文字幕人妻丝袜制服| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美精品av麻豆av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 高清视频免费观看一区二区| 男女下面插进去视频免费观看| 精品国产一区二区久久| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产成人啪精品午夜网站| 9191精品国产免费久久| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲九九香蕉| 性少妇av在线| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产免费av片在线观看野外av| 国产色视频综合| 在线观看舔阴道视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 少妇人妻久久综合中文| 国产亚洲一区二区精品| 久久99一区二区三区| 国产一区二区 视频在线| 嫩草影视91久久| 老鸭窝网址在线观看| 国产99久久九九免费精品| 91成人精品电影| 欧美日韩成人在线一区二区| 五月天丁香电影| 亚洲男人天堂网一区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久热爱精品视频在线9| 在线天堂中文资源库| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲三区欧美一区| 欧美xxⅹ黑人| 窝窝影院91人妻| 天天影视国产精品| 亚洲国产av影院在线观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧洲日产国产| 波多野结衣av一区二区av| a在线观看视频网站| 丝袜美足系列| 美女中出高潮动态图| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲伊人久久精品综合| 永久免费av网站大全| 国产男人的电影天堂91| 亚洲精品第二区| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲熟女毛片儿| 久久久欧美国产精品| 国产色视频综合| 久久99热这里只频精品6学生| 日本五十路高清| 免费观看人在逋| 一本色道久久久久久精品综合| 国产精品免费视频内射| 亚洲精品美女久久av网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久精品免费免费高清| 中文欧美无线码| 久久99热这里只频精品6学生| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 香蕉丝袜av| 久久久精品94久久精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 他把我摸到了高潮在线观看 | 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 亚洲视频免费观看视频| 最近最新中文字幕大全免费视频| 狂野欧美激情性xxxx| 免费日韩欧美在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 韩国精品一区二区三区| 久热爱精品视频在线9| 丁香六月天网| 国产成人精品久久二区二区91| 精品久久蜜臀av无| 制服人妻中文乱码| 激情视频va一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产成人av激情在线播放| 丰满饥渴人妻一区二区三| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产av又大| 一级毛片精品| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲人成77777在线视频| 后天国语完整版免费观看| 国产人伦9x9x在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 视频区图区小说| 久久精品国产综合久久久| tube8黄色片| 狠狠狠狠99中文字幕| 大片电影免费在线观看免费| 午夜激情av网站| 18禁国产床啪视频网站| 香蕉国产在线看| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲色图综合在线观看| 嫩草影视91久久| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| bbb黄色大片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产麻豆69| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲 国产 在线| 日韩视频一区二区在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 国产伦理片在线播放av一区| 日韩有码中文字幕| 美国免费a级毛片| 欧美97在线视频| 国产黄频视频在线观看| 日本av手机在线免费观看| 好男人电影高清在线观看| 精品免费久久久久久久清纯 | 在线看a的网站| 9色porny在线观看| 日本五十路高清| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 一级黄色大片毛片| 人成视频在线观看免费观看| 超碰成人久久| 成年美女黄网站色视频大全免费| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 老司机午夜十八禁免费视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 中文欧美无线码| 国产精品免费视频内射| 满18在线观看网站| www日本在线高清视频| 大陆偷拍与自拍| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲国产精品999| 久久久精品94久久精品| 国产免费av片在线观看野外av| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产色视频综合| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 又大又爽又粗| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩人妻精品一区2区三区| www日本在线高清视频| 丝袜美腿诱惑在线| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 老司机影院毛片| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲第一青青草原| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久亚洲国产成人精品v| 久久久精品94久久精品| av在线app专区| 黄片大片在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 窝窝影院91人妻| 美女中出高潮动态图| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美97在线视频| 三级毛片av免费| 久久久久国产精品人妻一区二区| av视频免费观看在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 精品久久蜜臀av无| 国产精品久久久久久精品古装| 精品免费久久久久久久清纯 | 91av网站免费观看| 欧美另类一区| 午夜91福利影院| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩有码中文字幕| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 岛国毛片在线播放| 国产亚洲欧美精品永久| 一级a爱视频在线免费观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲专区中文字幕在线| 免费看十八禁软件| 大片免费播放器 马上看| av视频免费观看在线观看| 操出白浆在线播放| 色老头精品视频在线观看| videosex国产| 国产97色在线日韩免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 天天添夜夜摸| 男女国产视频网站| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品av久久久久免费| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| www.av在线官网国产| 亚洲欧洲日产国产| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产成人精品在线电影| 欧美精品av麻豆av| 精品人妻一区二区三区麻豆| a级毛片在线看网站| 精品少妇内射三级| 国产精品二区激情视频| 亚洲欧洲日产国产| 12—13女人毛片做爰片一| 色婷婷久久久亚洲欧美| av欧美777| 波多野结衣一区麻豆| 一二三四在线观看免费中文在| 国产av精品麻豆| 国产精品一区二区免费欧美 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99热全是精品| 久久人妻熟女aⅴ| 91精品国产国语对白视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 多毛熟女@视频| 搡老岳熟女国产| 极品人妻少妇av视频| 激情视频va一区二区三区| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 淫妇啪啪啪对白视频 | 免费高清在线观看视频在线观看| 婷婷成人精品国产| 美女主播在线视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| av网站在线播放免费| 国产淫语在线视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 十八禁网站免费在线| 丁香六月欧美| 久久国产精品大桥未久av| 丰满少妇做爰视频| 天天操日日干夜夜撸| 丝袜脚勾引网站| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲精品在线美女| 免费在线观看黄色视频的| 超碰97精品在线观看| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲成国产人片在线观看| 高清av免费在线| 国产一级毛片在线| 亚洲av国产av综合av卡| 五月天丁香电影| 黑丝袜美女国产一区| 脱女人内裤的视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 99国产精品99久久久久| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲精品av麻豆狂野| 热99久久久久精品小说推荐| 色综合欧美亚洲国产小说| av天堂在线播放| av福利片在线| 不卡一级毛片| 18在线观看网站| 9热在线视频观看99| 国产伦人伦偷精品视频| 色播在线永久视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| www.熟女人妻精品国产| 国产亚洲精品第一综合不卡| 久久久国产成人免费| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 欧美精品一区二区大全| 无限看片的www在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 多毛熟女@视频| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 黄色 视频免费看| 在线观看免费日韩欧美大片| 夫妻午夜视频| 亚洲全国av大片| 国产熟女午夜一区二区三区| 欧美成人午夜精品| 69av精品久久久久久 | 不卡av一区二区三区| 黄色视频不卡| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产日韩欧美在线精品| 777米奇影视久久| 亚洲精品一二三| 一级毛片女人18水好多| 最近中文字幕2019免费版| 在线 av 中文字幕| 日本av免费视频播放| 欧美 日韩 精品 国产| 男人操女人黄网站| 国产精品一区二区在线不卡| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99国产精品免费福利视频| 91大片在线观看| 国产真人三级小视频在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成年人黄色毛片网站| 一区二区三区激情视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇 在线观看| 永久免费av网站大全| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 18在线观看网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久久久视频综合| 国产av一区二区精品久久| 国产av国产精品国产| 成年美女黄网站色视频大全免费| 动漫黄色视频在线观看| 极品人妻少妇av视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产99久久九九免费精品| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产亚洲av高清不卡| 三级毛片av免费| 久久狼人影院| 日日夜夜操网爽| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 久久久国产欧美日韩av| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 欧美精品啪啪一区二区三区 | 美国免费a级毛片| 久久女婷五月综合色啪小说| 夜夜夜夜夜久久久久| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 男女边摸边吃奶| 国产亚洲精品一区二区www | 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品九九99| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 搡老岳熟女国产| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美变态另类bdsm刘玥| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 欧美久久黑人一区二区| 丝袜喷水一区| 各种免费的搞黄视频| 丁香六月天网| 国产97色在线日韩免费| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲国产欧美在线一区| 午夜福利视频在线观看免费| 国产一区二区在线观看av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 在线av久久热| 美女中出高潮动态图| 国产片内射在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 九色亚洲精品在线播放| 国产极品粉嫩免费观看在线| 男女无遮挡免费网站观看| 窝窝影院91人妻| cao死你这个sao货| 亚洲全国av大片| 多毛熟女@视频| 成人亚洲精品一区在线观看| a级毛片在线看网站| 丝瓜视频免费看黄片| 男女国产视频网站| 成在线人永久免费视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 考比视频在线观看| 99九九在线精品视频| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产成人av激情在线播放| 国产免费福利视频在线观看| 午夜视频精品福利| svipshipincom国产片| 久久女婷五月综合色啪小说| 日韩一区二区三区影片| 久久久久视频综合| 在线天堂中文资源库| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久久国产成人免费| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 日韩人妻精品一区2区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| av一本久久久久| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 激情视频va一区二区三区| av又黄又爽大尺度在线免费看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产精品免费视频内射| 亚洲免费av在线视频| 99国产精品免费福利视频| a级毛片黄视频| 精品国产一区二区久久| 国产欧美日韩一区二区三 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 岛国在线观看网站| 三级毛片av免费| 久久中文看片网| 在线观看免费高清a一片| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲黑人精品在线| 99热全是精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美 日韩 精品 国产| 免费在线观看黄色视频的| 欧美 日韩 精品 国产| 国产国语露脸激情在线看| av在线老鸭窝| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久99热这里只频精品6学生| 午夜福利免费观看在线| 欧美性长视频在线观看| 久久久久国内视频| 黄色 视频免费看| 国产97色在线日韩免费| 久久亚洲精品不卡| 9色porny在线观看| 午夜福利免费观看在线| 久久久久网色| 久久性视频一级片| 日韩电影二区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久久国产成人免费| 久久毛片免费看一区二区三区| 无限看片的www在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲一区中文字幕在线| e午夜精品久久久久久久|