羥丙基甲基纖維素對(duì)鹽酸小檗堿腸道微環(huán)境調(diào)控效應(yīng)的影響△

吳晨陽，黎迎，鄒佩志，鄭婷婷，張運(yùn)，董政起

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所，北京 100193

鹽酸小檗堿（BBR）是主要從黃連及黃檗中分離出來的生物堿，具有多重生物學(xué)功能。BBR 極性小、溶解度低、滲透性差、血藥濃度極低、生物利用度低[1]，但其在治療胃腸道炎癥[2]、代謝相關(guān)疾病[3]（如2 型糖尿病[4]）、阿爾茨海默病及帕金森癥[5]等方面具有顯著的藥效。按照傳統(tǒng)藥理學(xué)觀念，藥物需靠有效成分入血并達(dá)到一定濃度才可發(fā)揮治療作用，這個(gè)理論尚無法全面闡釋BBR 的多種藥理活性。目前的研究指出，除少量吸收入血以外，BBR發(fā)揮上述藥效的另一關(guān)鍵原因可能是其吸收差而在腸道內(nèi)大量富集所帶來的菌群調(diào)節(jié)作用[6]，如提高短鏈脂肪酸（特別是丁酸）產(chǎn)生菌的相對(duì)豐度等[7]。因此，充分發(fā)揮BBR 的菌群調(diào)節(jié)作用或可作為提高其藥效的一種關(guān)鍵手段。

隨著越來越多的研究聚焦在腸道健康，腸道菌群與外界及機(jī)體關(guān)系的黑匣子逐漸被打開[8]，研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生態(tài)的穩(wěn)定與否[9]及日常飲食習(xí)慣[10]會(huì)對(duì)腸道功能產(chǎn)生多方面的影響，如腸道滲透性與腸道屏障功能。研究表明，腸道滲透性與多種疾病相關(guān)，關(guān)注腸道滲透性對(duì)于疾病預(yù)防及治療至關(guān)重要。據(jù)報(bào)道，腸道屏障輕度受損會(huì)引起腸道弱炎癥[11]，促炎細(xì)胞因子表達(dá)量升高，機(jī)體易感程度變大，易于受到黏附侵襲性大腸埃希氏菌感染，從而導(dǎo)致腸道紊亂進(jìn)一步加劇，腸道滲透性增強(qiáng)，有害小分子進(jìn)入機(jī)體，加劇機(jī)體炎癥[12]。其中腸道屏障功能受損的初始表現(xiàn)有腸道黏液層變薄[13]，從而引起黏膜層結(jié)構(gòu)等損傷，腸上皮出現(xiàn)囊腫的概率變大。

羥丙基甲基纖維素（HPMC）作為一種藥用輔料記載于《中華人民共和國藥典》2020 年版[14]，在生物醫(yī)藥行業(yè)有多方面的應(yīng)用，主要用于包衣材料、膜材料及緩釋制劑的控釋材料[15]，如作為片劑中的黏附材料[16]、改進(jìn)阿司匹林腸溶片的包衣材料[17]、藥物緩釋片的骨架材料[18-19]。一方面，作為最常用的親水載體之一，HPMC在制劑研究中得到廣泛青睞。研究表明，在口腔黏膜藥物遞送系統(tǒng)中，HPMC 可增強(qiáng)藥物黏附于口腔黏膜的能力，從而增加藥物與口腔黏膜接觸的時(shí)間，以更好地發(fā)揮藥效[20]。另有研究表明，作為原位凝膠的基質(zhì)之一，隨著HPMC F4M 濃度的增加，其凝膠黏性增加，同時(shí)延緩藥物釋放的程度也相應(yīng)增加[21]。另一方面，作為不可發(fā)酵的膳食纖維，HPMC 被認(rèn)為是一種潛在的益生元纖維[22]，已有報(bào)道指出其可調(diào)節(jié)高脂喂養(yǎng)小鼠的腸道菌群Alpha多樣性及菌群組成[23]。

目前，對(duì)藥用輔料的功能認(rèn)知逐漸深入，傳統(tǒng)意義上選用藥用輔料的標(biāo)準(zhǔn)不斷被刷新，已經(jīng)不局限于選擇安全性高、生物相容性好、不與活性物質(zhì)相互作用的輔料，其與腸道菌群的相互作用也逐漸被納入考慮范疇，有研究報(bào)道多種藥用輔料可通過調(diào)節(jié)菌群影響機(jī)體健康及藥物治療效果[24-28]，同時(shí)，輔料自身的理化性質(zhì)對(duì)藥物的菌群調(diào)節(jié)作用的影響也應(yīng)得到充分重視。與BBR 相似，HPMC 在人體內(nèi)不易被代謝，同時(shí)具有高黏性，可使BBR 在腸道內(nèi)滯留，這為藥物與腸道菌群充分接觸從而更好地發(fā)揮菌群調(diào)節(jié)作用創(chuàng)造了更為有利的條件。本研究以HPMC 為例，對(duì)其與BBR 物理混合使用時(shí)對(duì)腸道微環(huán)境的調(diào)控效應(yīng)進(jìn)行初步探索，也為類似性質(zhì)的輔料（如果膠、卡波姆和海藻酸鈉等）通過腸道菌群調(diào)控影響B(tài)BR藥效方面的研究提供參考。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

無特定病原體（SPF）級(jí)雄性C57BL/6 小鼠40只，體質(zhì)量18～20 g，購自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2016-0006，飼養(yǎng)于北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所SPF級(jí)動(dòng)物房，小鼠飼養(yǎng)條件為恒溫恒濕，環(huán)境溫度為（22±2）℃，相對(duì)濕度為（50±5）%，12 h/12 h 光暗交替，正常給予常規(guī)飼料及純凈水。本研究所涉及的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理程序和規(guī)范處理，審批號(hào)為SLXD-20201221013。

1.2 儀器

Secura224-1CN 型電子分析天平（德國Satrorius公司）；KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；SP131010-33Q型加熱磁力攪拌器（美國Barnstead Thermolyne公司）；L550型臺(tái)式低速大容量離心機(jī)（德國Eppendorf 公司）；TL-48R 型粉碎研磨儀（上海萬柏生物科技有限公司）；DYY-6C型電泳儀（北京市六一儀器廠）；NanoDrop 2000型超微量分光光度計(jì)（美國Thermo Fisher公司）；GeneAmp?9700 型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國ABI 公司）；Quantus?型微型熒光計(jì)（美國Promega 公司）；Miseq PE300/NovaSeq PE250 平臺(tái)（美國Illumina 公司）；Aperio CS2 型緊湊型臺(tái)式玻片掃描儀（德國徠卡顯微系統(tǒng)）。

1.3 試藥

HPMC F4M（批號(hào)：D180I8Q012，美國陶氏化學(xué)）；BBR（批號(hào)：ZLSC2020072617，純度＞98%，南京澤朗有限公司）；E.Z.N.A.?soil DNA kit（美國Omega Bio-Tek公司）；AxyPrep DNAGel Extraction Kit（美國Axygen 公司）；瓊脂糖（西班牙Biowest 公司）；Quantus?Fluorometer（美國Promega 公司）；NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit（美國Bioo Scientific公司）；蘇木精-伊紅（HE）染色試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；引物由北京易科拜德生物技術(shù)有限公司合成。

2 方法

2.1 溶液制備

配制HPMC 水溶液（40 mg·mL-1），經(jīng)24 h 常溫磁力攪拌，待溶脹至澄清透明黏稠狀液體后備用；配制BBR 水溶液（15 mg·mL-1），超聲30 min（100 W，40 kHz），得混懸液。先配制HPMC 的水溶液基質(zhì)，再將BBR 加入基質(zhì)中，得HPMC 質(zhì)量濃度為40 mg·mL-1、BBR 質(zhì)量濃度為15 mg·mL-1的混合溶液，經(jīng)24 h常溫磁力攪拌分散均勻后待用。

2.2 分組與給藥

將24 只C57BL/6 小鼠進(jìn)行1 周的適應(yīng)性飼養(yǎng)，之后隨機(jī)分組，分為對(duì)照組、HPMC（400 mg·kg-1）組、BBR（150 mg·kg-1）組、HPMC 與BBR 物理混合（H+B，400 mg·kg-1+150 mg·kg-1）組，每組6只。灌胃給藥，每日給藥1 次，對(duì)照組小鼠灌胃給予蒸餾水，共給藥3 周。其中，BBR 的給藥劑量由文獻(xiàn)調(diào)研[29]得到，選取BBR 常用給藥劑量區(qū)間內(nèi)的中等值進(jìn)行探索，HPMC 的劑量是預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出可口服給藥的最大劑量。

2.3 結(jié)腸病理學(xué)檢查

小鼠頸椎脫臼處死，取遠(yuǎn)端結(jié)腸組織，去除內(nèi)容物，以4%組織細(xì)胞固定液進(jìn)行固定，石蠟包埋，以梯度體積分?jǐn)?shù)酒精進(jìn)行洗脫，按照標(biāo)準(zhǔn)程序切厚度為3.5 μm 的薄片，采用HE 染色，每張切片隨機(jī)選取3個(gè)視野于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

2.4 腸道菌群高通量測(cè)序分析

藥物干預(yù)3 周后收集各組小鼠新鮮糞便，放置于凍存管中，液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存，備用。取小鼠糞便，采用E.Z.N.A.?soil DNA kit 進(jìn)行微生物群落總DNA 抽提，使用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA 的提取質(zhì)量，測(cè)定DNA 濃度和純度。使用338F（5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3'）和806R（5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'）對(duì)16S rRNA 基因V3～V4 可變區(qū)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。將同一樣本的PCR 產(chǎn)物混合后使用2%瓊脂糖凝膠回收PCR 產(chǎn)物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit 進(jìn)行回收產(chǎn)物純化，2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并用Quantus?Fluorometer 對(duì)回收產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)定量。使用NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit 進(jìn)行建庫，利用Miseq PE300/NovaSeq PE250平臺(tái)進(jìn)行測(cè)序。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

因H+B 組1 只小鼠意外死亡，故參與數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的各組樣本數(shù)目情況為對(duì)照組6 只，HPMC 組6 只，BBR 組6 只，H+B 組5 只。結(jié)腸組織切片觀察及厚度標(biāo)記使用CaseViewer 軟件進(jìn)行分析。菌群操作分類單元（OTUs）作圖使用R 3.2.0 軟件及GraphPad Prism 軟件。菌群Alpha 多樣性分析采用Observed-OTUs，Chao1 豐富度指數(shù)、Shannon 多樣性指數(shù)、Simpson多樣性指數(shù)、Beta多樣性分析采用非度量多維標(biāo)度（NMDS）分析。數(shù)據(jù)分析采用單因素方差分析（ANOVA）、非參數(shù)Tukey 檢驗(yàn)。以P＜0.05為組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與討論

3.1 HPMC和BBR對(duì)小鼠結(jié)腸組織的影響

結(jié)腸組織HE染色結(jié)果表明，各組小鼠結(jié)腸組織黏膜結(jié)構(gòu)完整，腸絨毛無明顯缺損，且未觀察到明顯水腫，說明各組小鼠均未出現(xiàn)明顯炎癥反應(yīng)（圖1）。

圖1 各組小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸組織HE染色切片

對(duì)各組小鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層及肌膜層（漿膜層與肌層的厚度總和）的厚度進(jìn)行分析，結(jié)果表明，干預(yù)3 周后，各組中較為關(guān)鍵的結(jié)腸黏膜層厚度未發(fā)生顯著變化（表1）。由結(jié)腸組織HE染色結(jié)果和對(duì)腸組織各部分厚度的分析，可得HPMC和BBR的干預(yù)未對(duì)結(jié)腸機(jī)械屏障造成顯著影響。

表1 小鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層及肌膜層厚度（, n=3）

表1 小鼠結(jié)腸組織黏膜層、黏膜下層及肌膜層厚度（, n=3）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05。

3.2 HPMC 和BBR 對(duì)小鼠腸道菌群多樣性及組成的影響

3.2.1 樣本OTUs 重疊情況 采用韋恩圖（圖2）對(duì)各組小鼠腸道菌群中特有OTUs和共有OTUs進(jìn)行分析，結(jié)果表明，對(duì)照組、HPMC 組、BBR 組、H+B組OTUs分別為2026、2095、299、161條。HPMC組特有OTUs為323條，多于對(duì)照組（267條）、BBR組（96 條）、H+B 組（7 條）。HPMC 組與對(duì)照組共有的OUTs為1577條，BBR組與對(duì)照組共有的OUTs為7 條，BBR 組與H+B 組共有的OUTs 為22 條。說明從OTUs 數(shù)目和特有成分上來看，HPMC 組與對(duì)照組相似性更高，而BBR組與H+B組相似性更高。

圖2 各組小鼠腸道菌群樣本OTUs重疊結(jié)果韋恩圖（n=5～6）

3.2.2 Alpha 多樣性 對(duì)各組小鼠腸道菌群測(cè)序所得的OTUs序列進(jìn)行Alpha多樣性分析（圖3），BBR組和H+B 組可觀察到的物種數(shù)顯著低于對(duì)照組及HPMC 組（P＜0.001）。對(duì)由OTUs 數(shù)量計(jì)算所得的Chao1、Shannon、Simpson 指數(shù)進(jìn)行分析。與對(duì)照組相比，HPMC組除組內(nèi)均勻度降低外，Shannon指數(shù)未發(fā)生明顯變化；BBR 組組內(nèi)均勻度較好，Shannon指數(shù)顯著降低（P＜0.001）。與BBR組相比，H+B 組Shannon 指數(shù)進(jìn)一步降低，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），Simpson 指數(shù)顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），即與HPMC 合用增強(qiáng)了BBR 的抗菌能力。推測(cè)這與HPMC 的物理性質(zhì)有關(guān)，如代謝惰性、高黏性、酶抑制和膠體保護(hù)等。其中，酶抑制的特性可以起到保持黏度穩(wěn)定性的作用，使得HPMC 在不同的環(huán)境中均可以保持出色的黏度。經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的物理混合，HPMC 充分溶脹，使BBR 分散均勻，防止其在溶液底部形成沉淀，HPMC 與水接觸后可形成透明、柔韌的膜[30]，當(dāng)經(jīng)過胃和小腸時(shí)對(duì)BBR 進(jìn)行包裹保護(hù)，當(dāng)?shù)竭_(dá)結(jié)腸后，HPMC 與BBR 的物理混合體系使得BBR 與腸道菌群接觸得更加均勻，因而促進(jìn)了BBR 降低腸道菌群Alpha多樣性的趨勢(shì)。

圖3 各組小鼠腸道菌群OTUs序列Alpha多樣性指數(shù)分析（n=5～6）

3.2.3 Beta 多樣性 繪制NMDS 圖分析對(duì)照組、HPMC 組、BBR 組及H+B 組的組間差異程度，進(jìn)行Beta 多樣性分析，不同組之間的分離程度越大，說明組間差異越明顯。結(jié)果表明，HPMC 組與對(duì)照組距離較近；BBR 組、H+B 組與對(duì)照組距離均較遠(yuǎn)，差異較大；BBR 組與H+B 組距離較近，差異較?。▓D4）。BBR 組與H+B 組的菌群組成明顯不同于其他2組，BBR干預(yù)有效發(fā)揮了菌群調(diào)節(jié)作用。

圖4 各組小鼠腸道菌群OTUs序列Beta多樣性分析（n=5～6）

3.2.4 腸道菌群在門水平上的組成 在門水平上，各組小鼠腸道菌群的組成中優(yōu)勢(shì)菌群包括擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、放線菌門（Actinobacteria）、變形菌門（Proteobacteria）及疣微菌門（Verrucomicrobia）（圖5A）。對(duì)照組擬桿菌門的相對(duì)豐度為57.11%，BBR 組為43.75%，H+B組為35.48%（圖5B）；對(duì)照組厚壁菌門的相對(duì)豐度為33.57%，BBR 組為24.22%，H+B 組為16.85%；對(duì)照組放線菌門的相對(duì)豐度為3.67%，BBR 組為0.01%（P＜0.05），H+B 組為0.01%（P＜0.05）。與之相反，BBR 干預(yù)可顯著富集變形菌門及疣微菌門。對(duì)照組變形菌門的相對(duì)豐度為2.00%，BBR 組為11.99%（P＜0.001），H+B組為14.65%（P＜0.001）；對(duì)照組疣微菌門的相對(duì)豐度為2.78%，BBR 組為19.63%（P＜0.05），H+B 組為33.00%（P＜0.001），H+B 組富集疣微菌門的能力優(yōu)于BBR 組。在這幾種優(yōu)勢(shì)菌門的變化中，疣微菌門的漲幅最為突出，推測(cè)這與屬于疣微菌門的艾克曼菌屬（Akkermansia）的相對(duì)豐度大幅提高有密切關(guān)聯(lián)。

圖5 各組小鼠腸道菌群在門水平的組成（n=5～6）

3.2.5 腸道菌群在屬水平上的組成 在屬水平上，對(duì)照組毛螺菌屬（Lachnospiraceae）的相對(duì)豐度為1.219 0%，BBR組為0.003 0%（P＜0.05），H+B組為0.0006%（P＜0.05）；對(duì)照組瘤胃菌屬（Ruminococcaceae_UCG-014）相對(duì)豐度為1.430%，BBR 組為0.013%，H+B 組為0；對(duì)照組另支菌屬（Alistipes）的相對(duì)豐度為1.319%，BBR 組為0.074%（P＜0.05），H+B組為0；對(duì)照組其他unidentified 菌屬的總相對(duì)豐度為70.92%，BBR 為34.73%（P＜0.001），H+B 組為12.88%（P＜0.001）；與BBR 組相比，H+B 組顯著降低（P＜0.05）。對(duì)于以上各菌屬，HPMC 組均未發(fā)生顯著性變化，BBR 使其相對(duì)豐度產(chǎn)生不同程度的下降趨勢(shì)，H+B 組與BBR 組變化趨勢(shì)一致，整體來看，以上所提到的菌屬除unidentified 菌屬以外，其余菌屬變化幅度均較小，不超過2%（圖6）。

圖6 各組小鼠腸道菌群在屬水平的組成（n=5～6）

BBR 對(duì)部分菌屬可產(chǎn)生富集作用，如布勞特氏菌屬（Blautia）、艾克曼菌屬和埃希氏菌-志賀菌屬（Escherichia-Shigella）。對(duì)照組布勞特氏菌屬的相對(duì)豐度為1.525%，BBR 為12.720%（P＜0.001），H+B 組為8.717%（P＜0.05）。布勞特氏菌屬是產(chǎn)丁酸的主要菌種，屬于短鏈脂肪酸產(chǎn)生菌，短鏈脂肪酸的產(chǎn)生可促進(jìn)機(jī)體內(nèi)腸道緊密連接蛋白的形成及腸道有益菌種的生長(zhǎng)[31]，可緩解因腸道滲透性增大引起的免疫炎癥，起到良好的修復(fù)及保護(hù)腸道屏障功能的作用；對(duì)照組艾克曼菌屬的相對(duì)豐度為2.776%，BBR 組為19.630%（P＜0.05），H+B 組為33.000%（P＜0.001），增強(qiáng)了BBR 富集艾克曼菌屬的作用。作為一種明星菌屬，艾克曼菌屬屬于疣微菌門，BBR 顯著上調(diào)了疣微菌門和艾克曼菌屬的豐度，這與先前的研究結(jié)果一致[32]，艾克曼菌屬是黏液定殖微生物中的主要菌屬，與黏液層發(fā)揮對(duì)腸道組織的保護(hù)作用密切相關(guān)。有研究表明，克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎患者腸道內(nèi)艾克曼菌屬相對(duì)豐度下降，與疾病狀態(tài)呈負(fù)相關(guān)[33]，因此BBR 富集此菌可能是其修復(fù)黏液層厚度的關(guān)鍵原因[34]。對(duì)照組埃希氏菌-志賀菌屬的相對(duì)豐度為0.002%，BBR 組為10.150%（P＜0.001），H+B組為11.890%（P＜0.001）。以上各菌屬，HPMC 干預(yù)均未使菌屬相對(duì)豐度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。值得注意的是，對(duì)照組薩特氏菌屬（Parasutterella）的相對(duì)豐度為0.961%，HPMC 組為0.116%（P＜0.001），與對(duì)照組相比，BBR 組薩特氏菌屬的相對(duì)豐度無明顯變化，H+B 組則產(chǎn)生輕微下降趨勢(shì)，薩特氏菌屬的相對(duì)豐度為0.441%。副薩特氏菌屬參與膽汁酸穩(wěn)態(tài)代謝維持，其穩(wěn)態(tài)失衡后或?qū)δc道屏障帶來不利影響[35]，HPMC 組該菌相對(duì)豐度輕度下降，與BBR 合用后恢復(fù)正常，避免出現(xiàn)腸道微生態(tài)紊亂。

綜合來看，無論是從Alpha 多樣性的變化還是腸道菌群的組成變化來看，與HPMC 物理混合使用后，BBR 的菌群調(diào)節(jié)作用均得到正向促進(jìn)，究其原因，很大程度上是由于HPMC 的高黏度，研究選用的HPMC F4M 在2% 的濃度下黏度即可達(dá)到4000 mPa·s，在本研究中，選取4%的HPMC。已有研究指出HPMC F4M 可使藥物更好地黏附在口腔黏膜[20]，推測(cè)4%的高黏性HPMC 與BBR 物理混合后，使BBR充分黏附于腸道黏膜，增加了BBR與定殖在腸道黏液層上的腸道菌群接觸的概率和時(shí)間，從而直接促進(jìn)了BBR 的菌群調(diào)節(jié)作用。同時(shí)，研究表明HPMC F4M 可延緩藥物的釋放[21]，推測(cè)其可增加BBR 在腸道內(nèi)的滯留，某種程度上也可促進(jìn)其與腸道菌群的相互作用。另一方面，從BBR 吸收入血發(fā)揮作用的角度考慮，由于HPMC 是一種親水性高分子，當(dāng)其與溶解度較低的BBR 物理混合后，存在提高BBR 溶解度的可能，從而促進(jìn)BBR 入血發(fā)揮藥效。

4 結(jié)論

本研究對(duì)BBR與HPMC合用及BBR單獨(dú)干預(yù)可能引起的小鼠腸道菌群及腸道微生態(tài)變化進(jìn)行初步探究，分析得出，HPMC 單獨(dú)使用未對(duì)小鼠腸道微生態(tài)產(chǎn)生明顯影響，HPMC 與BBR 物理混合后起到對(duì)BBR自身功能的正向促進(jìn)作用，可增強(qiáng)BBR的廣譜抗菌能力，同時(shí)增強(qiáng)BBR 富集艾克曼菌屬的作用，推測(cè)這與HPMC 與BBR 物理混合使用時(shí)增強(qiáng)其黏附于腸道黏膜及延緩BBR釋放，從而促進(jìn)BBR與腸道菌群充分接觸以更好地發(fā)揮菌群調(diào)節(jié)作用密切關(guān)聯(lián)。除此之外，還可考慮具有相同黏度，但甲氧基、羥丙基取代度不同的其他型號(hào)HPMC 如E4M、K4M 等對(duì)BBR 腸道微生態(tài)調(diào)控作用的影響的差異，從而探究黏性以外的作用機(jī)制。另外，果膠、卡波姆、海藻酸鈉等可作為凝膠基質(zhì)的藥用輔料也存在影響B(tài)BR 腸道微生態(tài)調(diào)控效應(yīng)的潛在可能，未來可開展相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行探究，以從全新的角度考量制劑研究中藥用輔料的選擇標(biāo)準(zhǔn)。