對(duì)羥基苯甲酸及其鈉鹽在小鼠和食蟹猴體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布研究

楊營(yíng)營(yíng)，魏承瓊，韋杏淑，王宇暉*，段小群

1桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院；2桂林醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)學(xué)院，桂林 541199

對(duì)羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoic acid，p-HBA)是一種單羥基酚酸，是自然界中常見的化合物，存在于高等植物、微生物、苔蘚和土壤中[1]、具有抗菌[2]、抗氧化[3]、抗炎[4]和抗癌[5]等多種藥理活性。前期研究發(fā)現(xiàn)p-HBA是地皮菜活性成分對(duì)羥基苯甲醛的活性代謝物，通過抑制炎癥反應(yīng)和改善腸黏膜損傷發(fā)揮抗結(jié)腸炎作用[6]?？梢?，p-HBA可作為治療潰瘍性結(jié)腸炎的潛在化合物，具有良好的開發(fā)前景。然而，課題組前期研究結(jié)果顯示，p-HBA的水溶性較差，還伴隨脾臟腫大等不良反應(yīng)[7]，嚴(yán)重影響了其進(jìn)一步開發(fā)。因此，課題組對(duì)其鈉鹽對(duì)羥基苯甲酸鈉(sodiump-hydroxybenzoate，s-HBA)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其穩(wěn)定性較好，副作用不明顯，且水溶性較好，pH接近于中性或弱酸性，便于醫(yī)用，又不改變藥理活性；而從藥物代謝角度看，成鹽后的藥物更容易被人體吸收利用。同時(shí)為了進(jìn)一步了解p-HBA和s-HBA在體內(nèi)的吸收、分布規(guī)律，本文開展了p-HBA和s-HBA的藥代動(dòng)力學(xué)及組織分布特征的系統(tǒng)研究，為s-HBA的進(jìn)一步開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

p-HBA(C7H6O3，分子量138.12，純度≥98%，批號(hào)：S30121)，s-HBA(C7H5NaO3，分子量160.1，純度≥99%，批號(hào)為A04J11L107606)，購自上海源葉生物科技有限公司；甲苯磺丁脲(批號(hào)：20-01-0903，中國食品藥品檢定研究所)；肝素鈉注射液(成都市海通藥業(yè)有限公司)；甲醇(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；乙腈(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；乙酸(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；實(shí)驗(yàn)用水為純化水。

1.2 動(dòng)物

本實(shí)驗(yàn)的所有程序均經(jīng)過桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的嚴(yán)格審核和批準(zhǔn)，動(dòng)物協(xié)議批準(zhǔn)文號(hào)為GLMC201904008。SPF級(jí)C57BL/6小鼠，雌雄各半，共192只，體重18～22 g，購自昭衍(蘇州)新藥研究中心有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(蘇)2018-0006，飼養(yǎng)于溫度23～27 ℃、濕度45%～65%、12 h光/暗循環(huán)條件下，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后開始實(shí)驗(yàn)，給藥前自由飲水，禁食12 h。

本實(shí)驗(yàn)的所有程序均經(jīng)過桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的嚴(yán)格審核和批準(zhǔn)，動(dòng)物協(xié)議批準(zhǔn)文號(hào)為GLMC201904010。食蟹猴，4只雄性，2只雌性，體重2～3 kg，2～3歲齡，購自永?？h康順生物科技有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK桂-2018-0006。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)場(chǎng)所為桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，室溫21～25 ℃，相對(duì)濕度40%～60%，通風(fēng)換氣8次/h，光照周期10～14 h。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物飼養(yǎng)籠內(nèi)進(jìn)行單籠飼養(yǎng)，保持與鄰近實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行聽覺、視覺上的交互，并且在實(shí)驗(yàn)過程中，每天會(huì)周期性地打開籠隔，增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物間的交互性活動(dòng)，給藥前自由飲水，禁食12 h。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(150 mm × 2.1 mm，5 μm)；流動(dòng)相A為0.1%乙酸水溶液，B為乙腈，流速為0.6 mL/min，梯度洗脫(見表1)；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量1 μL(小鼠血漿，小鼠肝、腎組織)，3 μL(食蟹猴血漿及其他小鼠組織)。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution program of mobile phase

1.3.2 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子化(ESI)，負(fù)離子模式，電噴霧電壓-4 500 V，離子源溫度550 ℃，霧化氣55 psi，干燥氣55 psi，掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。p-HBA監(jiān)測(cè)離子對(duì)為m/z136.80→m/z93.00，甲苯磺丁脲(內(nèi)標(biāo))監(jiān)測(cè)離子對(duì)為m/z269.10→m/z169.80。質(zhì)譜參數(shù)如表2，二級(jí)質(zhì)譜圖見圖1。

表2 質(zhì)譜參數(shù)Table 2 Mass spectrum parameters

圖1 p-HBA(A)、甲苯磺丁脲(B)的二級(jí)色譜圖Fig.1 Secondary chromatogram of p-HBA (A) and tolbutamide (B)

1.3.3 對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)溶液的制備

精密稱量116.78 mg s-HBA(折算鹽系數(shù)后即為p-HBA)，用甲醇溶解并定容于10 mL，配制成濃度均為10 mg/mL的儲(chǔ)備液，于-20 ℃保存。實(shí)驗(yàn)時(shí)用50%甲醇水稀釋成500 000、200 000、100 000、50 000、20 000、10 000、5 000、1 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液1。用50%甲醇水稀釋成50 000、20 000、10 000、5 000、2 000、1 000、500、100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液2。用50%甲醇水稀釋成200 000、80 000、40 000、20 000、8 000、4 000、2 000、400 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液3。

精密稱量甲苯磺丁脲10 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL，配制成濃度為1 mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于-20 ℃保存，使用時(shí)用乙腈稀釋成100 ng/mL。

1.3.4 藥代動(dòng)力學(xué)研究

1.3.4.1 小鼠藥代動(dòng)力學(xué)研究

取48只小鼠隨機(jī)分為8小組，每組6只。單次灌胃給予20 mg/kg的p-HBA水溶液，給藥濃度為2 mg/mL，于給藥后0.03、0.08、0.17、0.25、0.5、1.00、2.00、4.00 h眼眶取血約0.2 mL，置于肝素鈉化的離心管中，離心10 min，離心條件為4 ℃，4 000 r/min，吸取血漿于標(biāo)記好的離心管中，于-80 ℃保存待測(cè)。

另取144只小鼠，分為三個(gè)大組，每組48只，分別單次灌胃給予20、50、100 mg/kg的s-HBA水溶液。給藥濃度分別為2、5、10 mg/mL，同樣于給藥后0.03、0.08、0.17、0.25、0.5、1.00、2.00、4.00 h眼眶取血于肝素鈉化的離心管中，4 ℃，4 000 r/min，10 min，轉(zhuǎn)移血漿于另一個(gè)離心管中，于-80 ℃保存待測(cè)。

1.3.4.2 食蟹猴藥代動(dòng)力學(xué)研究

取6只食蟹猴，單次周期共三次給藥，每次給藥后至少清洗7天后再進(jìn)行下一次給藥。s-HBA的給藥劑量分別為4、10、20 mg/kg，給藥濃度分別為2、5、10 mg/mL。于每次給藥前(0)和給藥后0.03、0.08、0.13、0.17、0.25、0.50、0.75、1.00、1.50、2.00、4.00、6.00 h后肢靜脈采血約0.5 mL于肝素鈉化的離心管中。離心(4 ℃，4 000 r/min)10 min，取上清液于新的離心管中，于-80 ℃保存待測(cè)。

1.3.5 組織分布研究

將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為兩組，分別灌胃給予20 mg/kg的p-HBA水溶液和100 mg/kg的s-HBA水溶液，分別于給藥后0.03、0.08、0.17、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 h處死，解剖各組小鼠，分別取心、肝、脾、肺、腎、腦和結(jié)腸共7種組織，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干。精密稱取各組織的重量，剪碎后置于勻漿管內(nèi)，按組織與生理鹽水1∶4(g∶mL)的比例進(jìn)行勻漿，勻漿液于-80 ℃保存待測(cè)。

1.3.6 樣本前處理

1.3.6.1 血漿樣本前處理

精密吸取50 μL小鼠(或食蟹猴)血漿樣品，加入500 μL(或300 μL)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(100 ng/mL)，渦旋混合3 min，離心(4 ℃，15 000 r/min)10 min，取上清液100 μL，加入等體積純化水，渦旋混勻后進(jìn)樣分析。

1.3.6.2 組織樣本前處理

精密吸取50 μL各組織勻漿液，肝和腎樣品分別加入500 μL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(100 ng/mL)，心、脾、肺、腦和結(jié)腸組織樣品則分別加入300 μL內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。所有組織渦旋混合3 min，離心(4 ℃，15 000 r/min)10 min，取上清液100 μL，加入等體積純化水，渦旋混勻后進(jìn)樣分析。

2 結(jié)果

2.1 專屬性

取空白小鼠血漿(小鼠組織)樣品、加入p-HBA和甲苯磺丁脲標(biāo)準(zhǔn)品的小鼠血漿(小鼠組織)樣品和灌胃給藥后小鼠血漿(小鼠組織)樣品；同樣取食蟹猴血漿樣品、加入p-HBA和甲苯磺丁脲標(biāo)準(zhǔn)品的食蟹猴血漿和灌胃給藥后食蟹猴血漿。上述樣本按照“1.3.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行操作并進(jìn)行分析得到色譜圖，結(jié)果見圖2和圖3。結(jié)果表明，在所選定的液相和質(zhì)譜條件中，p-HBA和甲苯磺丁脲基線分離，并且血漿中的內(nèi)源性成分在兩者的出峰時(shí)間均無干擾。

圖2 p-HBA在小鼠中的特異性色譜圖Fig.2 Specific chromatograms of p-HBA in mouse 注：A～C：小鼠血漿樣本；D～F：腎臟組織樣本；G～I(xiàn)：肝臟組織樣本；J～L：心臟組織樣本；M～O：肺組織樣本；P～R：脾臟組織樣本；S～U：腦組織樣本；V～X：結(jié)腸組織樣本；A、D、G、M、P、S、V：空白血漿(組織)樣本；B、E、H、N、Q、T、W：空白血漿(組織)加對(duì)照品樣本；C、F、I、L、O、R、U、X：灌胃s-HBA后的血漿(組織)樣本；1：p-HBA；2：甲苯磺丁脲。Note:A-C:Mouse plasma samples;D-F:Kidney tissue samples;G-I:Liver tissue samples;J-L:Heart tissue sample;M-O:Lung tissue sample;P～R:Spleen tissue sample;S～U:Brain tissue samples;V-X:Colon tissue samples;A.D,G,M,P,S,V:Blank plasma (tissue) samples;B.E,H,N,Q,T,W:Blank plasma (tissue) plus control samples;C.F,I,l,O,R,U,X:Plasma (tissue) samples after intragastric administration of s-HBA;1:p-HBA;2:Tolbutamide.

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性范圍

2.2.1 血漿樣品

2.2.1.1 小鼠血漿樣品

吸取45 μL小鼠空白血漿，精密加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液1，分別配制成系列濃度為100、500、1 000、2 000、5 000、10 000、20 000、50 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)小鼠血漿樣本。按照“1.3.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理分析。以p-HBA峰面積與甲苯磺丁脲峰面積之比為縱坐標(biāo)，以待測(cè)物濃度與內(nèi)標(biāo)(內(nèi)標(biāo)濃度歸一化)之比為橫坐標(biāo)，線性擬合成標(biāo)準(zhǔn)曲線，權(quán)重設(shè)置w=1/x2，所得方程為Y=0.000 757X+0.304 984，r=0.996 5。定量下限此時(shí)設(shè)為100 ng/mL，S/N大于10。表明方法在100～50 000 ng/mL的線性范圍良好。

圖3 p-HBA在食蟹猴中的特異性色譜圖Fig.3 Specific chromatograms of p-HBA in monkey注：A：空白食蟹猴血漿樣本；B：空白食蟹猴血漿加p-HBA和內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品樣本；C：灌胃s-HBA后的食蟹猴血漿樣本；1：p-HBA；2：甲苯磺丁脲。Note:A:Blank monkey plasma samples;B:Blank monkey plasma sample plus p-HBA and internal standard;C:Monkey plasma sample after intragastric administration of s-HBA;1:p-HBA;2:Tolbutamide.

2.2.1.2 食蟹猴血漿樣品

吸取45 μL食蟹猴空白血漿，精密加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液2，配制成系列濃度10、50、100、200、500、1 000、2 000、5 000 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)食蟹猴血漿樣本。按照“1.3.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理分析，所得方程為Y=0.000 734X+0.008 59，r=0.998 6。此時(shí)定量下限為10 ng/mL，S/N大于10。

2.2.2 組織樣品

精密吸取45 μL各小鼠空白組織勻漿液，分別加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液1，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線用來計(jì)算肝臟和腎臟組織中p-HBA的濃度，加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液3則用來計(jì)算心、脾、肺、腦和結(jié)腸等組織的濃度。p-HBA在各組織中的標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍見表3。

表3 小鼠各組織中p-HBA的線性方程和線性范圍Table 3 The linear equations of p-HBA in various tissues of mice

2.3 精密度和準(zhǔn)確度

取小鼠空白血漿45 μL，加入5 μL不同濃度的p-HBA配制成定量下限、低、中、高4個(gè)質(zhì)控濃度(100、200、8 000、40 000 ng/mL)的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度平行6份，考察日內(nèi)精密度和準(zhǔn)確度；連續(xù)測(cè)定3批(至少2天)來考察日間精密度和準(zhǔn)確度。精密度以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示，準(zhǔn)確度以相對(duì)誤差(RE)表示。分析結(jié)果見表4。

表4 p-HBA在小鼠血漿中的精密度和準(zhǔn)確度Table 4 The precision and accuracy of p-HBA in plasma of

2.4 基質(zhì)效應(yīng)

精密吸取45 μL小鼠空白血漿，加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)溶液配制為低、中、高3個(gè)濃度(200、8 000、40 000 ng/mL)的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度平行6份，然后按照“1.3.6”項(xiàng)下方法進(jìn)行處理并分析，得到的峰面積記為PA1。用空白血漿預(yù)處理后得到的上清液配制3個(gè)質(zhì)控樣品至最終進(jìn)樣濃度，每個(gè)濃度平行6份，進(jìn)樣分析得到的峰面積計(jì)為PA2。用純?nèi)芤号渲?個(gè)質(zhì)控樣品至最終進(jìn)樣濃度，每個(gè)濃度平行6份，進(jìn)樣分析得到的峰面積計(jì)為PA3。以PA1與PA2峰面積的比值計(jì)算提取回、收率，PA2與PA3峰面積的比值計(jì)算基質(zhì)效應(yīng)。經(jīng)測(cè)定，提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)結(jié)果見表5。3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品和內(nèi)標(biāo)的提取回收率分別為97.41%、100.30%、102.22%和102.35%；基質(zhì)效應(yīng)分別為109.46%、94.58%、100.72%和101.57%。

表5 p-HBA和甲苯磺丁脲在小鼠血漿中的提取回收率和基質(zhì)效應(yīng)Table 5 Matrix effect and recovery of p-HBA and Tolbutamide in mice

2.5 穩(wěn)定性

精密吸取45 μL小鼠空白血漿，加入5 μL不同濃度的p-HBA標(biāo)準(zhǔn)溶液配制為低、高2個(gè)濃度(200、40 000 ng/mL)的質(zhì)控樣品，每個(gè)濃度平行3份。處理后柱后保存24 h進(jìn)樣分析；考察血漿樣品在室溫保存24 h、進(jìn)柱后24 h的穩(wěn)定性、-80 ℃保存28 d的長(zhǎng)期穩(wěn)定性以及反復(fù)凍融5次后的凍融穩(wěn)定性。按“1.3.6”項(xiàng)處理后進(jìn)樣分析，結(jié)果見表6。

表6 p-HBA在小鼠血漿中的穩(wěn)定性(n = 3)Table 6 The stability of p-HBA in mice plasma (n = 3)

2.6 藥代動(dòng)力學(xué)研究

2.6.1 小鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

小鼠單次灌胃20 mg/kg的p-HBA水溶液和單次灌胃20、50、100 mg/kg的s-HBA水溶液后測(cè)得的血藥濃度曲線圖見圖4，相應(yīng)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表7。血藥濃度曲線表明p-HBA和s-HBA給藥后，兩者濃度隨時(shí)間變化趨勢(shì)相似，具有迅速吸收和快速消除特點(diǎn)。

圖4 小鼠單次灌胃p-HBA水溶液和s-HBA水溶液后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線Fig.4 Mean plasma concentration-time profiles of p-HBA and s-HBA after a single oral administration of

表7 小鼠單次灌胃p-HBA和s-HBA后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(n = 6)Table 7 Main pharmacokinetic parameters after a single oral administration of p-HBA and s-HBA (n = 6)

2.6.2 食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

食蟹猴單次灌胃4、10、20 mg/kg的s-HBA水溶液后測(cè)得的血藥濃度曲線圖見圖5，相應(yīng)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表8。血藥濃度曲線表明，s-HBA三個(gè)劑量組給藥后濃度隨時(shí)間變化趨勢(shì)相似，同樣被迅速吸收和快速消除。

2.7 小鼠體內(nèi)的組織分布研究

小鼠單次灌胃20 mg/kg的p-HBA水溶液和100 mg/kg的s-HBA水溶液后不同時(shí)間點(diǎn)的分布情況見圖6、表9和表10。組織分布結(jié)果顯示，p-HBA和s-HBA水溶液灌胃給藥后均能快速分布到組織中，以腎臟組織濃度分布最高，均在0.17 h時(shí)達(dá)到最高濃度，其余組織也均在0.17 h之內(nèi)達(dá)峰。此外，檢測(cè)的組織中1 h后消除均大于80%。p-HBA水溶液給藥后組織分布情況為腎>肝>肺>結(jié)腸>心>脾>腦；s-HBA水溶液給藥后分布情況為腎>肝>肺>心>脾>結(jié)腸>腦。

圖5 食蟹猴單次灌胃s-HBA水溶液后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線Fig.5 Mean plasma concentration-time curves of s-HBA after a single administration of

表8 食蟹猴單次灌胃s-HBA后的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)Table 8 Main pharmacokinetic parameters of of s-HBA after single intragastric administration in

圖6 小鼠單次灌胃p-HBA和s-HBA水溶液后的組織分布圖Fig.6 Tissue distribution of p-HBA and s-HBA after single intragastric administration of mice

表9 小鼠單次灌胃p-HBA水溶液后的組織分布濃度Table 9 Tissue distribution of p-HBA after single intragastric administration of

表10 小鼠單次灌胃s-HBA水溶液后的組織分布濃度Table 10 Tissue distribution of s-HBA after single intragastric administration of

3 討論與結(jié)論

本研究基于前期藥效實(shí)驗(yàn)研究，而后期也將會(huì)對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎造模后的小鼠繼續(xù)進(jìn)行藥代動(dòng)力學(xué)研究，研究其病理狀態(tài)對(duì)p-HBA和s-HBA藥代動(dòng)力學(xué)的影響，為保持與藥效研究一致，因此繼續(xù)選用在組織病理學(xué)方面與人類結(jié)腸炎最為相似的C57BL/6小鼠造模來開展藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)。本研究在預(yù)實(shí)驗(yàn)中通過設(shè)計(jì)密集的采樣點(diǎn)，采樣時(shí)長(zhǎng)為24 h，并根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)p-HBA和s-HBA的吸收相、分布相和消除相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，正式實(shí)驗(yàn)采樣時(shí)長(zhǎng)為4 h，共8個(gè)采樣點(diǎn)。結(jié)合藥效學(xué)和安全性實(shí)驗(yàn)，最終確定p-HBA的劑量為20 mg/kg，經(jīng)鹽系數(shù)校正后s-HBA的劑量為20、50、100 mg/kg。在藥動(dòng)學(xué)研究中兩種藥物采用了相同劑量20 mg/kg；在組織分布研究中兩種藥物均選擇最佳劑量，由于p-HBA的最佳劑量為20 mg/kg，s-HBA的最佳劑量為100 mg/kg，因此選擇p-HBA(20 mg/kg)和相差5倍劑量的s-HBA(100 mg/kg)單次給藥后研究其組織分布情況。此外，還設(shè)計(jì)了s-HBA在食蟹猴體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，經(jīng)等效劑量換算后，最終確定給藥劑量為4、10、20 mg/kg，采樣時(shí)長(zhǎng)為6 h，共13個(gè)時(shí)間點(diǎn)。

藥物在體內(nèi)吸收的程度直接影響藥物的作用效果，消除的快慢則與其作用時(shí)間息息相關(guān)。從小鼠藥代動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)上看，灌胃給藥后，p-HBA和s-HBA均具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)過程，在血漿中吸收迅速和快速消除，沒有明顯的體內(nèi)蓄積情況。相同劑量下，s-HBA的Cmax和AUC均比p-HBA稍高，而V和Cl稍低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能是由于p-HBA的水溶性較差造成的[8]，衍生為鈉鹽后，s-HBA的水溶性大大增加，灌胃給藥后可能其在胃黏液各層分布更均勻，吸收更充分。s-HBA在食蟹猴體內(nèi)也具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)過程，同樣被迅速吸收和快速消除；三個(gè)劑量灌胃給藥下，s-HBA在小鼠和食蟹猴體內(nèi)的Cmax和AUC0-t與劑量同樣呈良好的線性關(guān)系。此外，s-HBA在小鼠體內(nèi)的MRT0-t、V和Cl比食蟹猴稍低，相差2～3倍，差異不算太大。總體表明s-HBA在嚙齒類和非嚙齒類的體內(nèi)過程均較穩(wěn)定，無特殊吸收與消除情況。

藥物進(jìn)入機(jī)體后會(huì)隨循環(huán)系統(tǒng)運(yùn)送至各組織中，由于藥物在生物體內(nèi)分布存在差異，會(huì)影響到藥物的治療效果、蓄積、毒副反應(yīng)，因此研究藥物在各組織的分布情況對(duì)藥物的研發(fā)和改進(jìn)具有重要意義[9]。組織分布結(jié)果顯示，p-HBA和s-HBA給藥后，兩者在組織中迅速分布和快速消除，達(dá)峰時(shí)間集中在0.03～0.17 h，并在1 h后消除大于80%。p-HBA在組織中廣泛分布，腎和肝分布濃度最高，而肺、心、脾次之。這些組織均為血流量豐富并且毛細(xì)管內(nèi)屏障小的組織，可能是濃度分布較高的原因之一。此外，猜測(cè)p-HBA在體內(nèi)可能以腎排泄、肝代謝為主；同時(shí)可能也是藥物蓄積的主要部位，這與前期研究中s-HBA最大耐受劑量下的輕微的腎、肝毒性相符。腦組織中檢測(cè)到一定濃度的p-HBA，表明其可通過血腦屏障。一個(gè)比較特殊的情況是，p-HBA和s-HBA給藥后，結(jié)腸中p-HBA的濃度存在較大的差異，p-HBA給藥后組織分布大小為腎>肝>肺>結(jié)腸>心>脾>腦，s-HBA給藥后分布為腎>肝>肺>心>脾>結(jié)腸>腦，原因尚未明確，這可能與p-HBA和s-HBA作為治療結(jié)腸炎的潛在藥物，而結(jié)腸作為結(jié)腸炎發(fā)生病變的主要器官有關(guān)，后續(xù)實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步查證。

綜上所述，p-HBA和s-HBA均具有良好的藥代動(dòng)力學(xué)過程，體內(nèi)吸收和消除均較快，在組織中廣泛分布，以腎和肝分布濃度最高，提示組織的靶向性，還能通過血腦屏障，這些均證明p-HBA和s-HBA具有良好的開發(fā)前景。有研究表明，病理狀態(tài)下對(duì)藥物的多個(gè)過程均有影響[10-12]，課題組接下來將探討p-HBA和s-HBA在病理狀態(tài)下的藥代動(dòng)力學(xué)和組織分布是否發(fā)生變化，為后續(xù)研究提供更多的參考。