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    血清與戊唑醇相互作用的吸收光譜研究

    2017-02-15 20:47:31王樂(lè)新??陳丹萍??高天祎
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年8期
    關(guān)鍵詞:急救吸收光譜血清

    王樂(lè)新??+陳丹萍??高天祎

    摘要:用吸收光譜法研究戊唑醇與人體血清之間的相互作用。戊唑醇溶液在221、326、566 nm處有明顯的特征吸收峰,血清水溶液在278 nm處有明顯的特征吸收峰。當(dāng)血清樣本中加入不同濃度的戊唑醇藥液后,血清的特征吸收峰出現(xiàn)衰減現(xiàn)象,而且在可見(jiàn)區(qū)域內(nèi)逐漸出現(xiàn)戊唑醇溶液的特征吸收峰。利用Matlab對(duì)血樣中戊唑醇藥液濃度值與326、566 nm處吸光度進(jìn)行線性函數(shù)擬合,相關(guān)系數(shù)均超過(guò)0.98,擬合誤差都小于0.000 6,此結(jié)果說(shuō)明線性擬合效果很好,并且在波長(zhǎng)為566 nm處的函數(shù)模型比波長(zhǎng)為326 nm處的函數(shù)模型擬合效果更好。因此,566 nm處的波長(zhǎng)可作為血樣中戊唑醇農(nóng)藥殘留的特征吸收峰。此結(jié)果可為血樣中農(nóng)藥殘留吸收光譜檢測(cè)作參考依據(jù)。

    關(guān)鍵詞:吸收光譜;戊唑醇;血清;Matlab;農(nóng)藥中毒;急救

    中圖分類號(hào):O433.4 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:

    文章編號(hào):1002-1302(2016)08-0320-04

    戊唑醇化學(xué)名(RS)-1-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-3-(1H-1,2,4三唑-1-基甲基)戊-3-醇,化學(xué)式為 C16H22ClN3O。該品為無(wú)色晶體,是一種低毒、高效、廣譜、內(nèi)吸性三唑類殺菌農(nóng)藥,具有保護(hù)、治療、鏟除三大功能,殺菌譜廣、持效期長(zhǎng),適用于重要經(jīng)濟(jì)作物的種子處理或葉面噴撒,可有效防治禾谷類作物的多種銹病、白粉病、網(wǎng)斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病、種傳輪斑病及早稻紋枯病等[1],它能夠抑制真菌的麥角甾醇的生物合成,導(dǎo)致病原菌不能形成細(xì)胞膜,從而使病菌死亡。它可以在植物組織內(nèi)部轉(zhuǎn)移,殺死植物表面和內(nèi)部的病菌,不僅具有殺菌活性,還可以促進(jìn)作物生長(zhǎng),是一種值得大力推廣的殺菌劑[2]。

    目前,戊唑醇是三唑類殺菌劑中銷售量最高的一種產(chǎn)品,已有多家原藥生產(chǎn)廠,原藥最高含量超過(guò)98%,市場(chǎng)前景十分廣闊。近幾年對(duì)戊唑醇農(nóng)藥的研究也有很多,如丁蕊艷建立了氣相色譜氮磷檢測(cè)器檢測(cè)蘋果、水稻及土壤中戊唑醇的分析方法[3],李洪等為了解戊唑醇在黃瓜和土壤中的殘留狀況及消解動(dòng)態(tài),通過(guò)田間試驗(yàn)建立了戊唑醇在黃瓜和土壤中的高效液相色譜分析方法[4],王漢成等研究了戊唑醇對(duì)立枯絲核菌的抑制作用及在水稻上的應(yīng)用[5]。紫外-可見(jiàn)吸收光譜分析方法具有快速、操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、樣品使用量少等優(yōu)點(diǎn),可以實(shí)現(xiàn)對(duì)農(nóng)藥的直接檢測(cè),在醫(yī)學(xué)、制藥、石油化工及環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域已被廣泛應(yīng)用[6-8]。而目前利用此方法對(duì)戊唑醇農(nóng)藥檢測(cè)研究的相關(guān)文獻(xiàn)很少,所以本研究利用紫外-可見(jiàn)吸收光譜法研究血液與戊唑醇的相互作用規(guī)律,為醫(yī)學(xué)中農(nóng)藥中毒救急提供一定的參考。

    1材料與方法

    1.1試驗(yàn)儀器及樣品

    試驗(yàn)研究所用的吸收光譜檢測(cè)系統(tǒng)為澳大利亞GBC科學(xué)儀器公司生產(chǎn)的UV-VIS DB-20R紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì);試驗(yàn)樣品:血清樣品由健康人(GLU 4.67 mmol/L,TG 1.37 mmol/L,CHO 5.27 mmol/L)、高血糖(GLU 20.73 mmol/L,TG 0.75 mmol/L,CHO 2.24 mmol/L)、高血脂(GLU 4.56 mmol/L,TG 3.02 mmol/L,CHO 3.91 mmol/L)病人清晨空腹靜脈采血后經(jīng)離心分離后得到(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)校醫(yī)院);北農(nóng)(海利)涿州種衣劑有限公司生產(chǎn)的6%戊唑醇懸浮種衣劑;實(shí)驗(yàn)室用蒸餾水。

    1.2試驗(yàn)方法

    (1)將蒸餾水與戊唑醇農(nóng)藥配制成濃度為0.003%的標(biāo)準(zhǔn)溶液,然后對(duì)所配制的戊唑醇藥液依次進(jìn)行稀釋,稀釋后的濃度為0.000 12%、0.000 17%、0.000 22%、0.000 27%、0.000 32%、0.000 37%、0.000 41%、0.000 46%、0.000 50%、0.000 54%。

    (2)取正常、異常血清樣品按體積1 ∶[KG-3]40的比例配制成水溶液備用。把以上8種不同濃度的戊唑醇藥液分別取 1 mL 加入3 mL含有配制好的正常、異常血液溶液比色皿中,每次加入后都進(jìn)行充分搖勻,最后得到混合溶液。

    (3)試驗(yàn)利用UV-VIS DB-20R紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)戊唑醇藥液、不同生化指標(biāo)血樣水溶液以及戊唑醇藥液與血液相互作用的變化進(jìn)行吸收光譜檢測(cè),采樣間隔 0.5 nm,狹縫寬1 nm,掃描速度400 nm/min,進(jìn)行快速掃描,得到相關(guān)的吸收光譜。

    2結(jié)果與分析

    2.1戊唑醇的紫外-可見(jiàn)吸收光譜的測(cè)定

    將蒸餾水與戊唑醇農(nóng)藥配制成不同濃度比的戊唑醇標(biāo)準(zhǔn)藥液,利用微型注射器取濃度為0.000 37%的藥液3 mL放入比色皿中,用UV-VIS DB-20R進(jìn)行檢測(cè),測(cè)量波長(zhǎng)范圍為200~700 nm,檢測(cè)結(jié)果如圖1所示,得到戊唑醇溶液在221、326、566 nm處有特征吸收峰,并且從圖中可以看出,在250~300、390~450、500~550 nm之間有3處峰肩存在。

    2.2不同生化指標(biāo)血液樣本的吸收光譜

    為了對(duì)血樣中的藥物殘留作定性分析,要了解農(nóng)藥殘留藥物的吸收特征峰對(duì)血樣的吸收特征峰的影響,因此,本試驗(yàn)研究不同生化指標(biāo)血清樣本水溶液的吸收光譜。將具有不同生化指標(biāo)的血清樣品按體積1 ∶[KG-3]40的比例配制成水溶液,利用UV-VIS DB-20R分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)吸收光譜。試驗(yàn)結(jié)果如圖2所示,血清在紫外區(qū)有明顯的特征吸收峰,而且所有血清的特征吸收峰都在278 nm處。由于血清中含有血清蛋白、糖類和無(wú)機(jī)鹽類等,血清蛋白中又含有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸,這些氨基酸的存在都在血清溶液吸收光譜上有很好的反應(yīng),所以所有血清樣品在278 nm處的特征吸收峰可能是由氨基酸引起的。由圖2還可以看出,高血糖血清在278 nm處的峰值比正常血清小,而高血脂血清比正常血清大,高血糖高血脂血清樣本的吸收峰值最小??赡苁怯裳逯薪M織細(xì)胞代謝產(chǎn)物分子和含量變化引起的。

    2.3戊唑醇與血清樣本相互作用的吸收光譜

    在加入低濃度的戊唑醇藥液后吸光度降低,隨著加入戊唑醇藥液濃度的增加,吸光度又逐漸增加,但是一直低于血清樣本的吸光度值,并且在可見(jiàn)區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)戊唑醇藥液的特征吸收峰[CM(25]。說(shuō)明血清樣本與戊唑醇藥液發(fā)生了相互作用,從而降低[CM)]

    了血清的光照度值。這一結(jié)果可成為血液農(nóng)藥殘留檢測(cè)的參考依據(jù)。

    其次研究同濃度的戊唑醇藥液對(duì)不同生化指標(biāo)血清的影響,圖3給出了濃度為0.000 37%的戊唑醇與正常、異常血清水溶液相互作用的光譜圖。由圖3可以看出,同濃度的戊唑醇加入不同生化指標(biāo)中吸收光譜的變化是相同的,但衰減的程度不同。在吸收峰為278 nm處的高血脂血清衰減程度最大,其次是高血糖血清,再次是高血糖高血脂血清,最后是正常血清??赡苁怯捎诟哐且环N血液內(nèi)脂肪濃度過(guò)高,高血糖是體內(nèi)糖代謝紊亂,酯酶活潑性降低,再加入戊唑醇藥液后,使發(fā)生變化的組織細(xì)胞與該藥液發(fā)生反應(yīng)后,產(chǎn)物分子變化不同引起的。但是衰減后的峰值大小順序和圖2一樣,正常血清峰值比高血糖血清大,比高血脂血清小,高血糖高血脂血清樣本的吸收峰值仍然最小。

    2.4建模與分析

    通過(guò)利用紫外-可見(jiàn)吸收光譜技術(shù)對(duì)戊唑醇藥液與血樣進(jìn)行檢測(cè),得出戊唑醇藥液能對(duì)血清吸收光譜產(chǎn)生衰減現(xiàn)象,可能是血清中加入戊唑醇后,血清分子與戊唑醇分子發(fā)生相互作用,吸光度降低。又因?yàn)椴煌澹ㄕ!⒏哐?、高膽固醇、高甘油三脂血清)中分子濃度不同,所以同一濃度戊唑醇藥液與不同血清相互作用,吸光度衰減的程度會(huì)不同。當(dāng)血清中加入不同濃度戊唑醇藥液后吸光度先下降再上升,可能是因?yàn)槲爝虼嫁r(nóng)藥有復(fù)雜的分子結(jié)構(gòu)式所產(chǎn)生的,存在閉合的共軛體系產(chǎn)生強(qiáng)吸收峰。但是血清加入高濃度戊唑醇藥液后吸光度增加的程度要遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于血清本身的吸光度。

    為了研究農(nóng)藥戊唑醇與血樣之間的關(guān)系,表1列出了峰值為326、566 nm處的血清樣品中含不同濃度戊唑醇與所對(duì)應(yīng)的吸光度。以農(nóng)藥的不同濃度C作因變量,以含有農(nóng)藥殘留血樣溶液在特征波長(zhǎng)處的吸光度D為自變量,利用Matlab作線性擬合(如圖8、圖9、圖10、圖11所示),得到不同濃度的農(nóng)藥殘留血樣在特征波長(zhǎng)處的回歸方程(表2)。

    3結(jié)論

    本研究結(jié)果表明,在221、326、566 nm處戊唑醇有明顯的特[CM(25][KG3]征吸收峰,而且還有3處峰肩,位置分別在250~300、[CM)]

    析。由圖2可以看出,把血清樣本按同比例配成血清水溶液后檢測(cè)的吸收光譜,得出正常、高血糖、高血脂、高血糖高血脂的吸收光譜圖基本相同,峰位也相同,都為278 nm,只是具體的峰值不同。由圖3可以看出,同一濃度的戊唑醇加入不同生化指標(biāo)血清中,278 nm處的吸收峰都產(chǎn)生顯著的衰減現(xiàn)象,但是衰減的程度不同,高血脂血清的衰減程度大于正常血清、高血糖血清和高血糖高血脂血清。通過(guò)利用Matlab對(duì)血樣中戊唑醇藥液濃度值與326、566 nm 處吸光度的關(guān)系建立了線性回歸模型,發(fā)現(xiàn)566 nm處的函數(shù)模型比326 nm處的函數(shù)模型擬合效果更好。該結(jié)果可為吸收光譜檢測(cè)不同生化指標(biāo)中農(nóng)藥殘留作參考。為進(jìn)一步研究農(nóng)藥與血清樣本相互作用吸收光譜檢測(cè)作理論依據(jù),并且在醫(yī)學(xué)上農(nóng)藥中毒急救有重要的參考價(jià)值。

    參考文獻(xiàn):

    [1]黃新輝,張發(fā)亮,馬淑惠,等. 新型殺菌劑戊唑醇的合成工藝[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(1):144-192.[HJ1.7mm]

    [2]王愛(ài)華,徐寶強(qiáng). 戊唑醇使用方法[J]. 河北果樹,2009(4):41.

    [3]丁蕊艷. 戊唑醇在蘋果、水稻及土壤上的殘留動(dòng)態(tài)研究[D]. 濟(jì)南:山東大學(xué),2012.

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    [5]王漢成,周明國(guó),張艷軍. 戊唑醇對(duì)立枯絲核菌的抑制作用及在水稻上的應(yīng)用[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2007,9(4):357-362.

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