缺氧缺血性腦病新生兒血漿硫化氫水平變化及意義

閔宇懿，劉 璇

1.廣州市第八人民醫(yī)院兒科，廣東 廣州 510000；2.南方醫(yī)科大學(xué)，廣東 廣州 510515

新生兒缺氧缺血性腦?。℉IE）是指圍生期因羊水異常妊娠期高血壓病、糖尿病、臍帶繞頸等原因引起大腦部分或完全缺氧，腦部血流量減少，導(dǎo)致腦組織缺氧缺血性損傷［1］。HIE是新生兒期常見的一種疾病，發(fā)病率約為活產(chǎn)新生兒的0.3%～0.5%，輕者幾乎不留神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，而重者可出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥或致死，是兒童致殘的常見原因之一［2］。硫化氫（H2S）作為一種新發(fā)現(xiàn)的氣體信號分子，在人體組織中產(chǎn)生的含量相當(dāng)高，甚至在腦組織中的濃度可達(dá)60～170μmol/L［3］。有研究報(bào)道，H2S能直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有清除氧自由基、減輕氧化應(yīng)激、擴(kuò)張血管、保護(hù)神經(jīng)元等多種效能，并參與腦缺氧缺血再灌注的病理生理過程，現(xiàn)正成為一種有效的細(xì)胞保護(hù)劑，用于對抗多器官缺血性損傷［4］。本研究觀察50例HIE新生兒血漿H2S水平變化，并探討其與HIE的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察組選取2019年2月—2020年2月在廣州市第八人民醫(yī)院新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房（NICU）收治的50例HIE新生兒，男性23例，女性27例，胎齡37～40周，出生時(shí)體質(zhì)量為2 100～3 800 g；自然分娩29例，實(shí)施剖宮產(chǎn)21例。參照文獻(xiàn)［5］標(biāo)準(zhǔn)，HIE新生兒病情分為輕、中、重度。其中輕度16例，中度23例，重度11例。對照組：選取同時(shí)期出生的健康足月新生兒50例，男性24例，女性26例，胎齡37～41周，出生時(shí)體質(zhì)量為2 400～3 900 g；自然分娩27例，實(shí)施剖宮產(chǎn)23例。排除感染性疾病及神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常者。兩組新生兒在性別、胎齡、出生時(shí)體重及分娩方式等方面具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）標(biāo)本采集：兩組患兒出生后24 h內(nèi)，由專人取股靜脈血3 mL（0.1%肝素抗凝），然后靜置2 h，4℃下以3 000 r／min高速離心10 min，分離出血漿，然后將血漿保存于-70℃冰箱中，待測。（2）血漿H2S含量的測定：采用亞甲藍(lán)分光光度法。首先取0.1 mL血漿，然后再加入0.1 mL5%醋酸鋅，使之充分混勻形成醋酸鋅膠體后加入5 mol/L氫氧化鈉（NaOH）溶液溶0.1 mL，于溫度為-18℃的冰箱放置10 min，12 000 r/min速率離心10min，用吸管吸取上清液，然后加0.1 mL0.2%N-二甲基對苯二胺、0.1 mL20%三氯乙酸、加0.01 mL10%硫酸鐵銨，生成亞甲基藍(lán)絡(luò)合物，用分光光度儀于酶標(biāo)儀665 nm處檢測其吸光度，最后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線對H2S濃度進(jìn)行測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用配對t檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)及單因素方差分析。兩因素相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組與對照組新生兒血漿H2S水平分別為（36.75±4.85）μmol/L、（48.66±6.21）μmol/L，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。觀察組病情輕度、中度、重度新生兒H2S（44.12±4.82） μmol/L、（35.11±3.61） μmol/L、（27.91±7.22）μmol/L，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。相關(guān)性分析顯示，HIE新生兒病情程度與其血漿H2S水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.93，P＜0.05）

3 討論

HIE是指圍產(chǎn)期窒息導(dǎo)致大腦的缺氧缺血性損害，為新生兒期較嚴(yán)重的致死性和神經(jīng)致殘性疾病，一直是我國新生兒醫(yī)學(xué)研究的難題。該病以意識狀態(tài)、反射、肌張力異常為主要表現(xiàn)，嚴(yán)重可致昏迷或去大腦僵直狀態(tài)［6］。由于新生兒HIE臨床表現(xiàn)是隱匿的，因此，在早期階段會(huì)被忽視。普遍認(rèn)為HIE發(fā)病與大腦的缺氧缺血有關(guān)，并受到多種神經(jīng)調(diào)節(jié)因子影響，最終導(dǎo)致新生兒大腦受到病理性損害。如果能在新生兒發(fā)病早期及時(shí)干預(yù)，采取有效措施改善大腦的缺氧缺血，就能大大降低大腦病理性損害，為患兒救助贏得時(shí)間。因此，早期診斷和準(zhǔn)確的病情判斷，并采取針對性措施進(jìn)行干預(yù)，對患兒預(yù)后具有重要意義。

H2S為是一種有著臭雞蛋氣味的有毒氣體，為繼NO和CO之后發(fā)現(xiàn)的第三類氣體信號傳遞分子，也是一種新型的神經(jīng)調(diào)節(jié)因子。在人體組織中參與合成內(nèi)源性H2S的關(guān)鍵酶有兩種，一是胱硫醚-β-合酶，二是胱硫醚-γ-裂解酶。其中胱硫醚-β-合酶主要位于人體的海馬、小腦、大腦皮層和腦干等中樞組織，而胱硫醚-γ-裂解酶大多分布于血管組織中，少量存在顱內(nèi)［7］。研究表明［8］，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)H2S主要通過鈣離子/鈣調(diào)素路徑活化胱硫醚-β-合酶催解L-半胱氨酸及α-丙戊二酸而生成。內(nèi)源性H2S可以通過調(diào)節(jié)ATP敏感性鉀通道舒張血管平滑肌，擴(kuò)張腦血管，改善腦血流量；還可以下調(diào)絲裂原活化蛋白激酶的活性，抑制Bcl-2蛋白廣泛表達(dá)，激活含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（MAPK）活性，阻止血管平滑肌細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞凋亡，從而抑制血管重塑。同時(shí)，H2S可通過清除氧自由基、抗氧化應(yīng)激及KATP/PKC/ERK1/2/Hsp90途徑參與中樞神經(jīng)元的保護(hù)［9］。研究報(bào)道［10］，使用外源性H2S可防止大腦缺氧缺血時(shí)的神經(jīng)元損害，改善大腦循環(huán)，對中樞神經(jīng)元具有保護(hù)作用。這可能為大腦缺氧缺血引起損傷的患者提供一種新的治療方案。

當(dāng)顱腦損傷后，機(jī)體就會(huì)處于應(yīng)激狀態(tài)，胱硫醚-β-合酶的底物半胱氨酸就會(huì)處于相對生成不足狀態(tài)，導(dǎo)致胱硫醚-β-合酶生成不足，而胱硫醚-β-合酶則是中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生H2S的關(guān)鍵酶，因此腦內(nèi)生成H2S含量就會(huì)明顯減少。顱腦損傷后，H2S在參與抗氧化應(yīng)激、炎癥和凋亡等保護(hù)作用作用過程中也會(huì)被消耗過多，實(shí)際上腦組織H2S含量減少。同時(shí)，當(dāng)大腦受到損傷時(shí)就會(huì)產(chǎn)生大量NO，與胱硫醚-β-合酶的亞鐵血紅素結(jié)合，從而抑制胱硫醚-β-合酶酶的活性，最終導(dǎo)致H2S的生成減少［11］。

本研究表明，新生兒血漿H2S水平降低與HIE發(fā)病有關(guān)，其可能參與了HIE發(fā)病的病理生理過程。HIE新生兒出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞損害可能與血漿H2S明顯降低有關(guān)。通過進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，HIE新生兒病情程度與其血漿H2S均呈負(fù)相關(guān)，證實(shí)血漿H2S水平可反映HIE病情的嚴(yán)重程度，即血漿H2S水平可作為病情嚴(yán)重程度判斷指標(biāo)之一。

綜上所述，HIE新生兒血漿H2S水平明顯降低，血漿H2S水平可作為病情嚴(yán)重程度判斷指標(biāo)之一。通過對新生兒血漿H2S含量的檢測，有助于早期診斷和病情判斷，以便早期采取有效措施預(yù)防疾病進(jìn)展及術(shù)后并發(fā)癥的發(fā)生，對HIE防治具有一定意義。