乳雙歧桿菌M8口服對重度燒傷患者免疫功能的調(diào)節(jié)作用

陳寧杰，李夢婕，楊金存，張偉，隋洪濤，王海濤，

1山東大學(xué)附屬威海市立醫(yī)院燒傷整形科，山東威海 264200；

2濱州醫(yī)學(xué)研究生院；3濰坊醫(yī)學(xué)院研究生院

腸道具有數(shù)量多樣且龐大的微生物群，其與健康宿主之間保持著動態(tài)平衡以阻止致病菌侵入，這對維持腸黏膜屏障功能具有重要意義［1-2］。重度燒傷會導(dǎo)致腸黏膜屏障不同程度受損及機(jī)體免疫功能降低，如細(xì)胞免疫抑制因子白細(xì)胞介素6（IL-6）表達(dá)增加，導(dǎo)致病原菌及其產(chǎn)生的毒素侵入機(jī)體，引發(fā)炎癥反應(yīng)，嚴(yán)重者甚至可引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征或多器官功能障礙，危及生命［3］。益生菌是一類能在體內(nèi)存活，有益于宿主健康的微生物，其具有特異性、效價(jià)強(qiáng)度和可證明的臨床效能，可調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，保護(hù)腸黏膜，減輕炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到改善機(jī)體免疫力的作用［4-5］。其中，雙歧桿菌是定植于健康人腸道中的優(yōu)勢菌，具有免疫調(diào)節(jié)、改善腸道屏障等多種生理功能［4］。既往研究顯示，在重度燒傷患者中應(yīng)用益生菌有調(diào)節(jié)腸道菌群紊亂、維護(hù)腸道屏障、減輕炎癥反應(yīng)等作用［6-8］。母乳作為嬰幼兒最自然安全的食源，蘊(yùn)含對新生兒健康有益的多種益生菌，這些益生菌不僅能夠促進(jìn)新生兒腸道建立正常的菌群平衡，還能夠促進(jìn)免疫系統(tǒng)成熟［2］。因此，母乳中的有益微生物具有重要價(jià)值。乳雙歧桿菌M8是從母乳中提取的益生菌，具有良好的胃腸消化耐受性及免疫調(diào)節(jié)作用，與市面上其他雙歧桿菌產(chǎn)品比較，具有生物相容度高、耐酸性高等優(yōu)勢［9-10］。2018年8月—2021年12月，本研究觀察了口服乳雙歧桿菌M8對重度燒傷患者白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比、T淋巴細(xì)胞亞群、血清免疫球蛋白水平和細(xì)胞因子水平的影響，探討其對重度燒傷患者免疫功能的調(diào)控作用，以期為重度燒傷患者的治療及愈后提供一定的臨床經(jīng)驗(yàn)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料經(jīng)山東大學(xué)附屬威海市立醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，收集我院燒傷整形外科同期收治的重度燒傷患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～65歲；②燒傷總面積31%～50%總體表面積（TBSA）或Ⅲ°燒傷面積10%～20% TBSA；③燒傷時(shí)間24 h內(nèi)；④傷后接受補(bǔ)液抗休克、抗感染、臟器功能保護(hù)和創(chuàng)面處理等常規(guī)燒傷治療；⑤簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有嚴(yán)重系統(tǒng)性疾??；②合并嚴(yán)重復(fù)合傷；③患精神疾病或依從性差難以配合治療；④妊娠、哺乳期；⑤伴免疫功能缺陷。共收集符合標(biāo)準(zhǔn)的重度燒傷患者30例，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為M8組及對照組各15例。對照組男9例、女6例，年齡（37.00±12.18）歲，燒傷總面積（37.87%±0.04%）TBSA，Ⅲ°燒傷面積（12.80%±0.02%）TBSA。M8組男10例、女5例，年齡（40.20±11.77）歲，燒傷總面積（40.87%±0.05%）TBSA，Ⅲ°燒傷面積（13.67%±0.02%）TBSA。兩組性別、年齡、燒傷總面積、Ⅲ°燒傷面積具有可比性。

1.2 乳雙歧桿菌M8及安慰劑制備方法選取內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)乳品生物技術(shù)與工程教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室于2017年自健康人母乳中分離的1株新型乳雙歧桿菌M8制成粉劑，將其分裝成50 g每份，保存于-20℃冰箱備用。另委托該實(shí)驗(yàn)室生產(chǎn)不含乳雙歧桿菌M8但形狀、大小、色澤、重量等外觀均與M8粉劑相同的安慰劑，同樣分裝為50 g每份，封裝在相應(yīng)外包裝中。

1.3 治療方法對照組予以燒傷常規(guī)治療（補(bǔ)液抗休克、抗感染、臟器功能保護(hù)和創(chuàng)面處理等）并口服安慰劑粉劑50 g，每日1次；M8組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上口服乳雙歧桿菌M8粉劑50 g，每日1次，共治療14 d。

1.4 指標(biāo)觀察方法①外周血白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，采用全血細(xì)胞檢測儀檢測白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比。②外周血T淋巴細(xì)胞亞群：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，流式細(xì)胞儀檢測CD4＋、CD8＋T淋巴細(xì)胞比例。③血清IgA、IgG：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，離心取上清液，置于EDTA抗凝管中，ELISA檢測試劑盒檢測各組血清IgA、IgG。④細(xì)胞免疫抑制因子IL-6水平：治療14 d后，抽取兩組外周靜脈血2 mL，離心取上清液，采用ELISA檢測試劑盒檢測各組血清IL-6水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用Shapiro-Wilk進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，呈正態(tài)分布的連續(xù)變量以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組外周血白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比比較對照組、M8組白細(xì)胞總數(shù)分別為（8.64±1.75）×109/L、（6.72±2.01）×109/L，中性粒細(xì)胞百分比分別為73.95%±8.42%、65.97%±8.19%，M8組外周血白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比均低于對照組（P均＜0.05）。

2.2 兩組外周血CD4＋、CD8＋T淋巴細(xì)胞比例比較對照組、M8組外周血CD4＋T淋巴細(xì)胞比例分別為38.12%±4.30%、48.09%±3.21%，CD8＋T淋巴細(xì)胞比例分別為（9.38%±1.01%、11.83%±1.30%，M8組外周血CD4＋、CD8＋T淋巴細(xì)胞比例均高于對照組（P均＜0.05）。

2.3 兩組血清IgA、IgG比較對照組、M8組血清IgA分別為（2.55±0.74）g/L、（3.28±0.90）g/L，血清IgG分別為（13.56±4.23）g/L、（17.30±3.37）g/L，M8組血清IgA、IgG均高于對照組（P均＜0.05）。

2.4 兩組血清IL-6比較對照組、M8組血清IL-6分別 為（161.87±65.48）pg/mL、（99.69±67.58）pg/mL，M8組血清IL-6低于對照組（P＜0.05）。

3 討論

人體正常的腸黏膜屏障包括機(jī)械屏障、化學(xué)屏障、免疫屏障和生物屏障，腸道微生物在維持腸黏膜屏障穩(wěn)定、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫以及抵御病原菌侵入方面均發(fā)揮重要作用［1，4］。腸道微生物對腸道屏障功能的影響主要包括以下幾個方面：①調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞系的分化及發(fā)育，進(jìn)而影響其免疫功能；②改善及維持腸黏膜層的保護(hù)性作用；③調(diào)節(jié)Paneth細(xì)胞分泌抗菌肽，維持菌群的動態(tài)平衡，從而提供一個綜合的物理抗菌屏障，以防止病原菌的附著及侵入［11-12］。健康情況下，腸道屏障允許水溶液和免疫調(diào)節(jié)因子通過，可以有效防止病原菌入侵和毒素吸收；而當(dāng)機(jī)體遭受燒（創(chuàng)）傷、大手術(shù)等情況時(shí)，創(chuàng)傷應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致腸道黏膜屏障破壞，致病菌和毒素穿過腸黏膜屏障進(jìn)入人體，并通過血液循環(huán)侵害重要組織器官，嚴(yán)重影響機(jī)體健康［1，13］。研究表明，重度燒傷免疫失調(diào)與腸道菌群紊亂密切相關(guān)：一方面，重度燒傷能夠?qū)е履c道菌群紊亂，誘導(dǎo)炎癥因子分泌，導(dǎo)致腸黏膜屏障損壞，進(jìn)而加重病情；另一方面，腸道菌群紊亂及屏障受損可增加重度燒傷發(fā)生全身炎癥反應(yīng)及多器官功能障礙的概率，進(jìn)一步加重病情［14］。臨床重度燒傷治療中，在積極的創(chuàng)面處理原發(fā)病和臟器支持治療基礎(chǔ)上，深入了解益生菌的免疫失調(diào)及其調(diào)控機(jī)制，對提高重度燒傷的救治水平和改善預(yù)后具有重要意義［15］。

重度燒傷因應(yīng)激反應(yīng)、血液濃縮等原因，早期多出現(xiàn)血液白細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞百分比急劇增高，少量患者因白細(xì)胞附壁，可能會出現(xiàn)血液白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比略有下降，但短時(shí)間內(nèi)可恢復(fù)正常。重度燒傷患者血液中白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞百分比隨病程進(jìn)展逐漸升高，這可能與應(yīng)激反應(yīng)、感染等因素有關(guān)。機(jī)體適當(dāng)?shù)难装Y反應(yīng)可防止病原菌及其產(chǎn)生的毒素侵入機(jī)體，但過度的炎癥反應(yīng)可引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征或多器官功能障礙，甚至危及生命。研究顯示，應(yīng)用益生菌制劑對維持正常有效的白細(xì)胞計(jì)數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比具有重要作用［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，與常規(guī)治療相比，重度燒傷患者口服乳雙歧桿菌M8能維持血液白細(xì)胞總數(shù)和中西粒細(xì)胞百分比在正常有效的范圍，可能有減輕燒傷后的炎癥反應(yīng)和機(jī)體的損傷的作用。

重度燒傷作為一種應(yīng)激性打擊可致應(yīng)激激素異常分泌，引起免疫細(xì)胞功能改變和免疫活性物質(zhì)水平上調(diào)或下調(diào)，導(dǎo)致免疫功能紊亂，其中免疫紊亂以細(xì)胞免疫功能受損為主，亦可累及體液免疫。細(xì)胞免疫是以T淋巴細(xì)胞為核心的免疫應(yīng)答，重度燒傷后T淋巴細(xì)胞分化、增殖為免疫T淋巴細(xì)胞，具體表現(xiàn)為外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，CD4＋T淋巴細(xì)胞和CD8＋T淋巴細(xì)胞比例下降，提示T淋巴細(xì)胞的功能受到抑制，進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體對感染、膿毒癥和多器官衰竭的易感性增強(qiáng)［3］。王鄉(xiāng)寧等［6］研究發(fā)現(xiàn)，重度燒傷患者應(yīng)用益生菌聯(lián)合谷氨酰胺的腸內(nèi)營養(yǎng)可改善患者營養(yǎng)狀況，提高患者免疫功能，縮短創(chuàng)面愈合時(shí)間。翟云等［10］通過對免疫抑制模型大鼠灌服乳雙歧桿菌M8發(fā)現(xiàn)，與模型對照組比較，高劑量乳雙歧桿菌M8組大鼠全血CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞百分比明顯升高，提示乳雙歧桿菌M8可提高免疫抑制模型大鼠的特異性和非特異性免疫應(yīng)答調(diào)控能力。本研究也有相似的發(fā)現(xiàn)，M8組在治療14 d后，外周血CD4＋T淋巴細(xì)胞、CD8＋T淋巴細(xì)胞百分比均高于對照組，提示乳雙歧桿菌M8對調(diào)節(jié)重度燒傷的細(xì)胞免疫具有積極作用。

T淋巴細(xì)胞的功能受到抑制還反映在分泌細(xì)胞因子的能力上。燒傷后，T淋巴細(xì)胞分泌具有免疫促進(jìn)作用的IFNγ、IL-2等因子的水平下降，分泌具有免疫抑制作用的IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13等細(xì)胞因子的水平上升，這是導(dǎo)致傷后免疫功能抑制的重要機(jī)制，與燒傷的嚴(yán)重程度密切相關(guān)［3］。諸多細(xì)胞因子通過彼此消長以及與免疫細(xì)胞間的相互作用，使機(jī)體形成一個復(fù)雜而有序的免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。嚴(yán)重?zé)齻笊鲜黾?xì)胞因子的合成、分泌、儲存和釋放水平發(fā)生改變，使得原先完整有序的免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的平衡關(guān)系被破壞，呈現(xiàn)細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)的過度表達(dá)以及免疫應(yīng)答和調(diào)控相關(guān)因子的分泌受抑，從而形成了燒傷后免疫功能紊亂的病理生理基礎(chǔ)［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，乳雙歧桿菌M8治療重度燒傷能夠降低血液IL-6濃度，對糾正其免疫失調(diào)具有一定的作用。

體液免疫是由特異性抗體起主要作用的免疫應(yīng)答反應(yīng)。機(jī)體免疫系統(tǒng)可合成、分泌IgA、IgG等多種免疫球蛋白，而這些蛋白可識別并特異性結(jié)合抗原，進(jìn)而介導(dǎo)免疫細(xì)胞活性，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，其中IgA的特異性免疫功能尤為重要。一些研究表明，益生菌可以改善腸道微生物群，減少細(xì)菌移位，增加IgA分泌，進(jìn)而達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的作用［16-17］。我們的研究也發(fā)現(xiàn)，口服乳雙歧桿菌M8可上調(diào)重度燒傷患者血清IgA、IgG水平，進(jìn)而可能達(dá)到部分的免疫調(diào)節(jié)作用。

綜上所述，乳雙歧桿菌M8能夠通過改善重度燒傷患者腸道微生物群紊亂、增強(qiáng)傷后腸道屏障來減輕患者炎癥反應(yīng)，以達(dá)到免疫調(diào)節(jié)的作用，其可能對改善燒傷患者的治療及愈后具有一定的積極意義。本研究尚存一些不足：首先，本研究只觀察了乳雙歧桿菌M8對重度燒傷患者免疫功能的調(diào)控作用，沒有將其與市面其他雙歧桿菌產(chǎn)品進(jìn)行對比，今后將與其他產(chǎn)品進(jìn)行對比研究；其次，本研究中采用乳雙歧桿菌M8單一益生菌治療重度燒傷患者，沒有探究是否多種益生菌聯(lián)合使用或聯(lián)合益生元是否具有更好的效果；再次，雖然大部分研究表明益生菌在重度燒傷中有積極的作用，但是也有研究發(fā)現(xiàn)益生菌應(yīng)用僅可以糾正燒傷患者腹瀉、吸收不良等癥狀，而與燒傷患者預(yù)后改善無關(guān)，并且有導(dǎo)致菌群紊亂的風(fēng)險(xiǎn)［18］，因此燒傷患者常規(guī)使用益生菌還需進(jìn)一步研究。