骨肉瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)信號通路研究進(jìn)展

陽慶林，謝犇，王一坤，秦慶慶，王勇平，2

1蘭州大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，蘭州 730000；2蘭州大學(xué)第一醫(yī)院骨科

骨肉瘤是一種起源于骨組織的惡性腫瘤，由腫瘤性的梭形基質(zhì)細(xì)胞和類骨質(zhì)構(gòu)成，常侵犯長骨的干骺端，特別是股骨遠(yuǎn)端和脛骨近端，易于血行肺轉(zhuǎn)移，好發(fā)于青少年。骨肉瘤早期即可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，病死率高且預(yù)后較差［1］。骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制復(fù)雜，雖然隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展，其5年生存率有所改善，但未取得實質(zhì)性進(jìn)展。近年來研究表明，多種細(xì)胞內(nèi)信號通路的失調(diào)與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，探究與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的信號通路對骨肉瘤的治療有著重要意義?，F(xiàn)就骨肉瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)信號通路作一綜述，希望可以為骨肉瘤相關(guān)研究提供參考。

1 Wnt/β連環(huán)蛋白（β-catenin）信號通路

Wnt信號通路是一條復(fù)雜且高度保守的信號通路，目前已經(jīng)證實Wnt信號通路包括經(jīng)典Wnt/βcatenin信號通路、Wnt/PCP信號通路和Wnt/Ca2+信號通路，其中Wnt/β-catenin信號通路在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。Wnt是一種分泌型糖蛋白，在與細(xì)胞膜上的7次跨膜卷曲蛋白Frizzled（Fzd）和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白LRP5、LRP6結(jié)合后，活化的Fzd及LRP5、LRP6通過募集Disheveled蛋白（DVL）到質(zhì)膜，干擾胞質(zhì)降解復(fù)合物AXIN1-GSK3β的合成，從而使不再被降解的β-catenin蛋白從細(xì)胞質(zhì)穩(wěn)定地轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，激活相關(guān)靶基因的表達(dá)。與Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)的RNA、藥物、蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等均能夠通過影響通路活性調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。

研究顯示，長鏈非編碼RNA（lncRNA）能夠影響骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。骨肉瘤中的lncRNA SNHG10水平較正常組織顯著增加。ZHU等［2］用SNHG10短發(fā)夾RNA（shRNA）轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin表達(dá)量減少，提示SNHG10可能通過Wnt/β-catenin信號通路調(diào)節(jié)骨肉瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移。LIN等［3］發(fā)現(xiàn)，敲低Lnc-MAP6-1∶3能夠顯著上調(diào)骨肉瘤細(xì)胞中的促凋亡蛋白Bax，同時下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2，β-catenin在Lnc-MAP6-1∶3敲低的骨肉瘤細(xì)胞中也被下調(diào)。這提示Lnc-MAP6-1∶3可能通過Wnt/β-catenin信號通路影響骨肉瘤的惡性行為，Lnc-MAP6-1∶3可能為骨肉瘤的診斷和治療提供新的分子研究和治療應(yīng)用途徑。LncRNA FLVCR1-AS1在骨肉瘤細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，并且與腫瘤大小、分級和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。在過表達(dá)FLVCR1-AS1的人骨肉瘤細(xì)胞U2OS和MG63中，βcatenin表達(dá)上調(diào)，提示LncRNA FLVCR1-AS1可能通過激活wnt/β-catenin信號通路加速骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲。

黃芩素是近年來備受關(guān)注的黃酮類化合物，其強(qiáng)大的抗腫瘤活性顯示出廣泛的生物學(xué)和藥學(xué)作用。?RENLILI等［4］用黃芩素處理骨肉瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)β-catenin蛋白表達(dá)下調(diào)，同時細(xì)胞活力下降。β-檸檬酸（β-EA）具有潛在的抗炎和抗癌活性，用β-檸檬酸處理的骨肉瘤細(xì)胞中β-catenin靶基因c-Myc、細(xì)胞周期蛋白D1（Cyclin D1）表達(dá)以及核β-catenin蛋白積累下降，提示β-EA對骨肉瘤有治療潛力。

蛋白質(zhì)Neurensin-2（NRSN2）是一種小神經(jīng)元膜蛋白。KEREMU等［5］發(fā)現(xiàn)，NRSN2在骨肉瘤組織中高度表達(dá)，過表達(dá)NRSN2可以顯著促進(jìn)MG63細(xì)胞克隆形成的能力，而敲低過表達(dá)細(xì)胞中的NRSN2可以逆轉(zhuǎn)這種促進(jìn)作用，同時胞核β-catenin表達(dá)隨之降低，提示NRSN2可能成為骨肉瘤的潛在治療靶點。

2 磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信號通路

PI3K是脂激酶家族成員之一，由一個調(diào)節(jié)亞基p85和一個催化亞基p110組成。當(dāng)配體與膜受體結(jié)合后，受體激活p85并招募p110，進(jìn)而催化膜內(nèi)表面的磷脂酰肌醇-4，5二磷酸（PIP2）生成磷脂酰肌醇-3，4，5三磷酸（PIP3），PIP3進(jìn)一步激活A(yù)kt磷酸化，磷酸化Akt可通過磷酸化多種酶和轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)蛋白質(zhì)合成和細(xì)胞增殖。與PI3K/Akt信號通路相關(guān)的蛋白質(zhì)、RNA、藥物和細(xì)胞因子等均可通過影響通路活性調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等。

P2X7受體是一種ATP門控離子通道，對腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲和血管生成至關(guān)重要。ZHANG等［6］研究發(fā)現(xiàn)，采用高效P2X7受體激動劑BzATP刺激人骨肉瘤細(xì)胞HOS/MNNG及SAOS-2可促進(jìn)細(xì)胞增殖，同時，BzATP刺激HOS/MNNG細(xì)胞24 h能夠?qū)е铝姿峄疉kt增加1.3～2.3倍；而用A740003或shP2X7阻斷P2X7受體，則可顯著降低Akt磷酸化水平。HER4表達(dá)也是腫瘤患者預(yù)后不良的指標(biāo)之一。LI等［7］發(fā)現(xiàn)，HER4蛋白在臨床骨肉瘤標(biāo)本和骨肉瘤細(xì)胞中高表達(dá)，同時高表達(dá)的HER4蛋白能夠上調(diào)磷酸化Akt，而用PI3K/Akt抑制劑LY294002處理的骨肉瘤細(xì)胞磷酸化Akt表達(dá)量明顯降低，其增殖、遷移和侵襲能力亦受到抑制。PIP3受磷酸酶和張力蛋白同源物（PTEN）可抑制骨肉瘤細(xì)胞系U2OS和MG63的腫瘤生長和侵襲，含PH結(jié)構(gòu)域的蛋白1（FGD1）與PTEN結(jié)合可以影響骨肉瘤細(xì)胞的生物行為。WU等［8］用FGD1轉(zhuǎn)染U2OS、MG63及HOS/MNNG細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖及侵襲能力增強(qiáng)；而敲低FGD1可導(dǎo)致骨肉瘤細(xì)胞Akt磷酸化下調(diào)。因此，F(xiàn)GD1可能是治療骨肉瘤的潛在靶點。

TDRG1是近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關(guān)LncRNA。HUANG等［9］發(fā)現(xiàn)，TDRG1在骨肉瘤細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)，敲低TDRG1的表達(dá)可顯著阻礙骨肉瘤細(xì)胞的侵襲和遷移，同時降低PI3K及Akt的磷酸化水平；而TDRG1過表達(dá)能夠增加PI3K及Akt的磷酸化水平。與之相反，LIU等［10］研究發(fā)現(xiàn)，上調(diào)LncRNA GAS5可以抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖活性并減少細(xì)胞侵襲次數(shù)，同時降PI3K和Akt磷酸化水平；而下調(diào)GAS5可促進(jìn)細(xì)胞增殖，并抑制細(xì)胞凋亡，提示LncRNA GAS5可能通過PI3K/Akt通路抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖和侵襲，GAS5可能成為骨肉瘤的潛在治療靶點。

Piceatannol（PIC）是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)類似于白藜蘆醇的化合物，具有抗腫瘤作用。WANG等［11］用不同濃度PIC處理人骨肉瘤細(xì)胞系U2OS和MG63，發(fā)現(xiàn)人骨肉瘤細(xì)胞增殖受到明顯抑制，同時磷酸化PI3K、Akt、mTOR的表達(dá)均呈下降趨勢；而使用PI3K/Akt/mTOR信號通路激動劑740Y-P處理骨肉瘤細(xì)胞可逆轉(zhuǎn)PIC對細(xì)胞活性的抑制作用。五味子乙素（SchB）是一種常用的中藥木酚素，已被發(fā)現(xiàn)可抑制癌癥進(jìn)展。WANG等［12］研究發(fā)現(xiàn)，用SchB處理后的人骨肉瘤細(xì)胞SaOS2和U2OS，細(xì)胞活力以劑量依賴性方式受到抑制，同時磷酸化PI3K、Akt蛋白表達(dá)下降。

3 Janus激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子（JAK/STAT）信號通路

JAK/STAT信號通路參與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡以及免疫調(diào)節(jié)等許多重要的生物學(xué)過程，相關(guān)細(xì)胞因子與相應(yīng)的受體結(jié)合后可引起受體二聚化，使與受體偶聯(lián)的JAK激酶通過交互的酪氨酸磷酸化作用而活化，活化后的JAK與STAT的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合從而激活STAT，被激活的STAT蛋白以二聚體的形式進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因結(jié)合調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。與JAK/STAT信號通路相關(guān)的藥物、蛋白質(zhì)和細(xì)胞因子等均可通過影響通路來調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移及侵襲。

姜黃素是一種天然化合物，具有良好的抗炎和抗癌特性。LU等［13］用姜黃素類似物L(fēng)48H37處理U2OS、MG63細(xì)胞24 h，發(fā)現(xiàn)U2OS、MG-63細(xì)胞的運(yùn)動性和侵襲活性明顯降低，且U2OS細(xì)胞中STAT3、JAK的磷酸化水平降低，提示L48H37通過JAK/STAT信號通路抑制人骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。丹參酮（TanⅠ）有抗增殖作用，WANG等［14］研究發(fā)現(xiàn)，TanⅠ呈劑量依賴性地抑制骨肉瘤細(xì)胞U2OS、MOS-J的細(xì)胞遷移能力，同時抑制骨肉瘤細(xì)胞中STAT3和JAK的表達(dá)。用TanⅠ處理已注射U2OS細(xì)胞的裸鼠，發(fā)現(xiàn)裸鼠體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞體積減小并停止增殖，提示TanⅠ在體外和體內(nèi)均能通過調(diào)控JAK/STAT信號通路來抑制腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移。

Serglycin（SRGN）是一種低分子糖蛋白，SRGN的表達(dá)在多種腫瘤中上調(diào)。LV等［15］分別將SRGN質(zhì)粒、siSRGN-1和siSRGN-2轉(zhuǎn)染到骨肉瘤細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)SRGN過表達(dá)細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，同時c-MYC、JAK2、STAT3的表達(dá)降低；而siSRGN-1和siSRGN-2轉(zhuǎn)染細(xì)胞的侵襲能力顯著降低，同時JAK2、STAT3磷酸化增加。組蛋白去甲基化酶KDM5A可以增加多種腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，用相關(guān)的siRNA敲低骨肉瘤細(xì)胞MG63和143B中的KDM5A基因，發(fā)現(xiàn)敲低KDM5A可以顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長，并降低Cyclin D1、JAK2和STAT3的表達(dá)，同時增加細(xì)胞凋亡標(biāo)志物膜聯(lián)蛋白V的表達(dá)。另外，WU等［16］發(fā)現(xiàn)絲氨酸/蘇氨酸激酶35（STK35）在骨肉瘤組織中過表達(dá)，并且JAK、STAT與STK35表達(dá)呈正相關(guān)，而用慢病毒質(zhì)粒pLKO.1干擾STK35的表達(dá)可抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長。

白細(xì)胞介素6（IL-6）是趨化因子家族的一種細(xì)胞因子，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成、侵襲和轉(zhuǎn)移。ZHANG等［17］研 究 發(fā) 現(xiàn)，骨 肉 瘤 細(xì) 胞SOSP-9607、F5M2、F4中IL-6水平均高于正常成骨細(xì)胞，在裸鼠模型中敲低IL-6表達(dá)能夠顯著降低骨肉瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移；而用重組人IL-6處理后的裸鼠磷酸化STAT3表達(dá)增加。這提示IL-6可能成為未來預(yù)防骨肉瘤進(jìn)展和治療干預(yù)的關(guān)鍵細(xì)胞因子。

4 程序性死亡受體1（PD-1）/程序性死亡配體1（PD-L1）信號通路

PD-1是一種主要表達(dá)于活化的CD4+T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞上的跨膜蛋白，屬于CD28超家族成員。PD-1配體PD-L1屬于B7家族成員，主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。正常生理條件下，PD-1/PD-L1可有效平衡免疫系統(tǒng)，但當(dāng)骨肉瘤發(fā)生時，PD-L1在腫瘤細(xì)胞中大量表達(dá)，同時腫瘤微環(huán)境可激活免疫細(xì)胞中的PD-1受體，抑制T淋巴細(xì)胞的激活、分化和增殖，使腫瘤細(xì)胞得以逃避T淋巴細(xì)胞的攻擊，為腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展提供有利的微環(huán)境。因此，研究PD-1的抑制性靶點及靶向PD-1/PD-L1信號通路的相關(guān)靶點或許是骨肉瘤治療的新方向。

骨肉瘤細(xì)胞中PD-L1蛋白高表達(dá)，用抗PD-1抗體聯(lián)合順鉑處理骨肉瘤后，PD-L1蛋白表達(dá)顯著降低，細(xì)胞增殖受到抑制并促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這提示PD-1抗體可以阻斷PD-1/PD-L1軸，增強(qiáng)順鉑在骨肉瘤中的抗腫瘤功效。研究顯示，人類骨肉瘤細(xì)胞及骨肉瘤患者肺轉(zhuǎn)移組織中PD-L1表達(dá)上調(diào)。DHUPKAR等［18］用抗PD-1處理人骨肉瘤細(xì)胞LM-7的小鼠模型，發(fā)現(xiàn)LM-7細(xì)胞大轉(zhuǎn)移和微轉(zhuǎn)移的平均數(shù)量均顯著減少且細(xì)胞增殖受到抑制，提示抗PD-1抗體可減少骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移數(shù)量，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞凋亡，降低腫瘤細(xì)胞增殖。因此，靶向PD-1/PD-L1信號通路的相關(guān)靶點可能是是治療骨肉瘤肺轉(zhuǎn)移的一種有前景的方法。CTLA-4是一種表達(dá)于T淋巴細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)受體，在骨肉瘤人源小鼠模型中發(fā)現(xiàn)，抗PD-L1與抗CTLA-4抗體聯(lián)合治療能夠減少肺轉(zhuǎn)移及抑制骨肉瘤細(xì)胞增殖，且治療效果優(yōu)于接受抗PD-L1阻斷單一療法，所以聯(lián)合治療或成為骨肉瘤治療的重點方案。

5 核因子κB（NF-κB）信號通路

NF-κB是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Rel家族成員之一，由p50和p65兩個亞單位組成。正常情況下，在細(xì)胞質(zhì)中的NF-κB與抑制蛋白IκB結(jié)合成三聚體復(fù)合物，處于失活狀態(tài)。當(dāng)受到TNF-α信號、炎癥因子以及紫外線等外界刺激時，IκB從p50/p65/IκB異源三聚體中解離，隨后NF-κB二聚體暴露出核定位序列，從而迅速從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，與核內(nèi)DNA上的特異性序列結(jié)合，啟動或增強(qiáng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。NF-κB的下游基因包括Cyclin D1和c-Myc，其持續(xù)激活可能會刺激細(xì)胞生長，導(dǎo)致細(xì)胞增殖失控。NF-κB的異常表達(dá)與骨肉瘤關(guān)系密切，GONG等［19］采用免疫組化法檢測骨肉瘤及鄰近組織中的NF-κB水平，發(fā)現(xiàn)NF-κB水平在骨肉瘤組織中顯著升高，提示NF-κB對骨肉瘤的早期診斷有重要意義。

LI等［20］研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移性骨肉瘤組織中整合素β1及NF-κB表達(dá)增加，敲低整合素β1能夠顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移，而外源性再引入整合素β1可在體外和體內(nèi)恢復(fù)骨肉瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，整合素β1和NF-κB信號通路可能成為骨肉瘤新的治療靶點。此外，HUANG等［21］用安石榴苷干擾人成骨細(xì)胞系hFOB1.19及人骨肉瘤細(xì)胞系U2OS、MG63、SaOS2，發(fā)現(xiàn)安石榴苷處理能夠顯著降低骨肉瘤細(xì)胞增殖并增加細(xì)胞凋亡，同時下調(diào)IL-6及IL-8水平。

ZHANG等［22］通過檢測60例骨肉瘤及鄰近組織中l(wèi)ncRNA NKILA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)lncRNA NKILA在骨肉瘤組織中表達(dá)降低，用細(xì)胞轉(zhuǎn)染NKILA-siRNA后，骨肉瘤細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力增強(qiáng)，而NFκB抑制劑JSH可以逆轉(zhuǎn)NKILA對細(xì)胞遷移和增殖的抑制作用，提示lncRNA NKILA可以通過NF-κB/Snail信號通路參與骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。LU等［23］用miR-155模擬作用于MG63細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MG63細(xì)胞增殖和侵襲能力均有增強(qiáng)，同時NF-κB和Bcl-2的表達(dá)上調(diào)；而miR-155抑制劑可以顯著抑制MG63細(xì)胞增殖和侵襲，并降低NF-κB和Bcl-2的表達(dá)。這提示miR-155能夠通過調(diào)節(jié)NF-κB信號通路影響骨肉瘤細(xì)胞增殖和凋亡，可能成為骨肉瘤診治的新生物標(biāo)志物。

蘿卜硫素（SFE）是一種天然存在于十字花科蔬菜中的異硫氰酸酯，ZHANG等［24］使用SFE處理骨肉瘤細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，SFE能夠以劑量依賴性方式抑制人骨肉瘤細(xì)胞U2OS和Saos2的生長和侵襲，同時抑制NF-κB的表達(dá)，提示SFE能夠通過調(diào)節(jié)NF-κB通路抑制骨肉瘤的進(jìn)展。JIN等［25］用茶褐素（TB）處理骨肉瘤的異種移植模型，發(fā)現(xiàn)骨肉瘤細(xì)胞活力和細(xì)胞遷移被TB顯著抑制，同時NF-κB通路中關(guān)鍵分子NF-κB、IκB激酶α（IKKα）、磷酸IKKα、磷酸IKKβ均顯著下調(diào)。因此，靶向抑制NF-κB信號通路可能成為抑制骨肉瘤發(fā)生發(fā)展的新策略。

6 絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路

MAPK是生物體內(nèi)廣泛存在的絲/蘇氨酸蛋白激酶，MAPK信號通路主要包括p38 MAPK、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）1/2、ERK5及c-Jun氨基末端激酶（JNK）四條途徑。在眾多的信號通路中，MAPK信號通路在細(xì)胞增殖、分化、凋亡、血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用比其他通路更為重要。

HUANG等［26］用PCDNA3.1-MAPK7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)在MAPK7表達(dá)升高的同時骨肉瘤細(xì)胞的增殖及侵襲能力增強(qiáng)，而經(jīng)siRNA-MAPK7質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的骨肉瘤細(xì)胞增殖和侵襲受到抑制，提示MAPK7可以作為藥物開發(fā)的有效靶點。

NING等［27］研究發(fā)現(xiàn)，石蒜堿（LY）對人骨肉瘤細(xì)胞系SJSA-1、U2OS表現(xiàn)出呈劑量依賴性的細(xì)胞毒性，能夠誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞死亡，同時上調(diào)p38 MAPK表達(dá)。在小鼠骨肉瘤異種移植模型中，LY體內(nèi)給藥顯著降低了腫瘤生長，并且?guī)缀鯖]有相關(guān)不良反應(yīng)。LIN等［28］用黃芩素處理裸鼠骨肉瘤模型，發(fā)現(xiàn)經(jīng)100 μmol/L黃芩素處理后的腫瘤質(zhì)量及體積明顯減小，同時體內(nèi)磷酸化ERK及ERK表達(dá)降低。JIE等［29］研究顯示，光甘草定（GLA）能夠降低骨肉瘤細(xì)胞的遷移和侵襲，同時下調(diào)p38 MAPK的磷酸化，提示GLA可能通過阻斷p38 MAPK通路抑制骨肉瘤細(xì)胞遷移和侵襲，有成為骨肉瘤治療劑的潛力。此外，番茄堿也可以抑制人骨肉瘤細(xì)胞U2OS、HOS的侵襲、遷移能力，且能夠顯著降低U2OS細(xì)胞中MAPK和ERK1/2的磷酸化。

7 Notch信號通路

Notch信號通路主要由Notch 受體、配體及細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)器分子組成，當(dāng)Notch配體與受體相互作用，Notch蛋白經(jīng)三次剪切，釋放Notch蛋白片段（NICD）進(jìn)入細(xì)胞核與轉(zhuǎn)錄因子CSL結(jié)合，形成NICD/CSL轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合體，進(jìn)而激活Hes、Hey及Herp等靶基因，從而調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲。與Notch信號通路相關(guān)的RNA、藥物及基因等均可通過影響通路活性調(diào)控骨肉瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等。

XIA等［30］研 究 發(fā) 現(xiàn)，骨 肉 瘤 組 織 中l(wèi)ncRNA CEBPA-AS1表達(dá)降低；lncRNA CEBPA-AS1過表達(dá)能夠抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖和遷移，同時下調(diào)Notch信號通路下游效應(yīng)分子Hes1、轉(zhuǎn)錄因子RBPJ的表達(dá)；使用siLncRNA CEBPA-AS1轉(zhuǎn)染骨肉瘤細(xì)胞可使Hes1和RBPJ表達(dá)上調(diào)，提示lncRNA CEBPA-AS1通過抑制Notch信號通路來減弱骨肉瘤細(xì)胞的增殖及侵襲。CHEN等［31］研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA MEG3過表達(dá)可減弱骨肉瘤細(xì)胞的增殖并增強(qiáng)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡，下調(diào)Jagged 1蛋白（JAG1）、Notch1的表達(dá)，提示lncRNA MEG3過表達(dá)可通過抑制Notch信號通路來抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡。JIN等［32］研究顯示，miR-135b的穩(wěn)定過表達(dá)可以顯著促進(jìn)體外MG63及Saos2細(xì)胞的遷移和侵襲；體內(nèi)實驗顯示，miR-135b的穩(wěn)定過表達(dá)能夠誘導(dǎo)裸鼠SaOS2骨肉瘤細(xì)胞向肺轉(zhuǎn)移，增強(qiáng)下游Notch信號蛋白Hes1表達(dá)及由Wnt/β-catenin信號驅(qū)動的熒光素酶報告基因的活性，提示抑制miR-135b可能是抑制骨肉瘤腫瘤轉(zhuǎn)移的新策略。

齊墩果酸（OA）是一種天然存在的三萜類化合物，在多種腫瘤細(xì)胞系中表現(xiàn)出潛在的抗腫瘤活性。XU等［33］研究顯示，OA能夠以劑量依賴性方式抑制骨肉瘤細(xì)胞的增殖能力，同時抑制Notch信號通路激活。順鉑（DDP）是一種很有前景的抗癌藥物，DAI等［34］發(fā)現(xiàn)使用華蟾蜍精聯(lián)合低劑量DDP可顯著抑制骨肉瘤細(xì)胞活性并抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移，延長裸鼠在骨肉瘤異種移植模型中的生存期，同時下調(diào)Notch1、Hes1、Hes5和Hey-L mRNA的表達(dá)。

IL-24是一種從人黑色素瘤HO-1細(xì)胞中克隆出來的具有細(xì)胞因子特性的抑癌基因，ZHUO等［35］使用IL-24處理骨肉瘤細(xì)胞并注入裸鼠側(cè)腹，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖標(biāo)志物Ki-67表達(dá)顯著減少。研究者同時使用IL-24處理143B骨肉瘤小鼠模型，發(fā)現(xiàn)腫瘤生長速度受到抑制，異種移植腫瘤組織中Notch1、Hes1、βcatenin表達(dá)下調(diào)，提示IL-24可能是提高骨肉瘤患者長期生存率的新靶點。

除上述信號通路外，Hippo信號通路、Hedgehog信號通路、CAMs信號通路，TNF信號通路及Rac1信號通路等也可能參與調(diào)控骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展，但目前國內(nèi)外對這些信號通路及相關(guān)調(diào)控機(jī)制與骨肉瘤發(fā)生發(fā)展關(guān)系研究較少。

綜上所述，藥物、蛋白質(zhì)、RNA、基因等多種因素能夠通過影響Wnt/β-catenin、PI3K/Akt、JAK/STAT、PD-1/PD-L1等信號通路對骨肉瘤的增殖、侵襲及凋亡等產(chǎn)生或正向或負(fù)向的調(diào)控。隨著分子生物學(xué)水平的不斷發(fā)展及基礎(chǔ)研究的不斷推進(jìn)，目前對許多信號通路與骨肉瘤生長、增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲等的調(diào)控機(jī)制已經(jīng)有了初步的認(rèn)識，諸多體內(nèi)、體外實驗亦已發(fā)現(xiàn)靶向藥物的巨大潛力，且不斷有新的調(diào)控機(jī)制及作用靶點被發(fā)現(xiàn)。然而，在骨肉瘤中各信號通路間相互作用的探究還比較缺乏，需要深入研究其關(guān)系，進(jìn)而為骨肉瘤患者帶來新的、有效的治療策略。