離心條件和溶血對高敏肌鈣蛋白檢測結(jié)果的影響

張永華，黃勇翔，張成磊

近年來，高敏肌鈣蛋白(hs-cTn)以其更高的敏感性、更低的檢測限，有效提高了臨床檢測精確度，在心肌梗死(MI)、急性冠狀動脈綜合征(ACS)等一系列心血管事件的診斷和危險(xiǎn)分級中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。此外，在大多數(shù)健康人群中可以檢測到hs-cTn濃度，因此，hs-cTn在心血管疾病高危人群的定期監(jiān)測、潛在疾病的早期發(fā)現(xiàn)中也扮演著重要角色[1-2]。目前，hs-cTn檢測已經(jīng)在國內(nèi)外各大臨床檢驗(yàn)中心大范圍應(yīng)用，檢測的準(zhǔn)確性和可靠性直接影響臨床診斷和治療措施。檢測結(jié)果受檢驗(yàn)程序如離心時間、溶血等多種因素的影響，易導(dǎo)致hs-cTn檢測結(jié)果準(zhǔn)確度下降，影響疾病的診斷和治療。本研究旨在分析檢驗(yàn)程序的多種因素對hs-cTnI檢測結(jié)果的影響，以期為hs-cTnI檢測的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 病例選擇與分組：選取2020年3月至2020年12月在我院就診的胸痛患者280例作為研究對象。清晨患者空腹采集靜脈血5.0 mL，檢測hs-cTnI(3 000 r/min，5 min)結(jié)果，根據(jù)結(jié)果分為低濃度組(0～30 pg/mL)80例、中濃度組(1 000 pg/mL～5 000 pg/mL)80例、高濃度組(10 000 pg/mL～20 000 pg/mL)80例。另外選擇高濃度的hs-cTnI標(biāo)本40例，用于不同溶血程度實(shí)驗(yàn)。

1.2 儀器與試劑：采用美國雅培I4000SR全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測hs-cTnI，試劑為原裝配套試劑。離心儀器為湖南賽特湘儀離心機(jī)公司生產(chǎn)的DDL-5M型低速冷凍離心機(jī)。檢測步驟和儀器操作均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行。

1.3 方法

1.3.1 不同離心時間和速度實(shí)驗(yàn)：所有標(biāo)本采集后立即用1.5 mL Eppendorf管分裝4支，其中3支在DDL-5M型低速冷凍離心機(jī)上以3 000 r/min的速度進(jìn)行離心，離心時間分別為5、10、15 min。另外1支標(biāo)本以4 000 r/min的速度離心5 min，分別檢測其中的hs-cTnI水平并進(jìn)行比較。

1.3.2 不同溶血程度實(shí)驗(yàn)：選擇使用真空促凝采血管采集的不同程度的溶血標(biāo)本，與已知高濃度的hs-cTnI標(biāo)本混合，調(diào)配混合血清中hs-cTnI的最終濃度為H(10 000 pg/mL)、M(1 000 pg/mL)、L(100 pg/mL)3個水平，血紅蛋白濃度分別為0 g/L、2 g/L、4 g/L、6 g/L、8 g/L、10 g/L，每個條件下標(biāo)本數(shù)為10例，檢測不同混合血清中hs-cTnI水平。

2 結(jié)果

2.1 不同離心速度、時間對結(jié)果的影響：低濃度組標(biāo)本經(jīng)5、10、15 min離心后，結(jié)果偏移分別是13.51%和15.48%，大于中濃度組(5.78%和10.17%)和高濃度組(1.88%和4.28%)。低濃度組中3 000 r/min離心5 min與其他條件相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，中濃度組中3 000 r/min離心5 min與15 min的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 不同溶血程度對結(jié)果的影響：在不同溶血程度條件下，檢測結(jié)果均呈現(xiàn)不同程度的增高(P<0.05)。L組結(jié)果增高幅度最大，6 g/L、8 g/L、10 g/L時結(jié)果偏移分別是10.57%、15.45%和20.65%；而M組僅在8 g/L和10 g/L時偏移大于10%(10.72%和16.29%)；H組偏倚很小，不超過1%。另外，L組中各結(jié)果間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；M組中除2 g/L外，其它各組結(jié)果與0 g/L相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

全球心血管疾病死亡人數(shù)與日俱增，預(yù)計(jì)到2025年，全球死亡人數(shù)將超過500萬[3]。在我國心血管疾病死亡率高居首位，急性心肌梗死(AMI)死亡率逐年劇增[4]。hs-cTn是診斷急性冠脈綜合征(ACS)的首選標(biāo)志物，敏感性是傳統(tǒng)cTn的100倍[5]，目前已被作為Ⅰ～Ⅴ型心肌梗死(MI)的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[6]。近年來針對hs-cTn的研究主要集中在檢測標(biāo)準(zhǔn)和臨床應(yīng)用方面。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方面包括敏感度、陽性率的復(fù)核，不同廠家檢測方法的比較，第99百分位參考上限以及性別特異性[7-9]。臨床應(yīng)用方面主要是hs-cTn與各類疾病的相關(guān)性研究，包括ACS、Takotsubo綜合征、瓣膜性心臟病、心律失常以及腎臟疾病、系統(tǒng)性硬化癥等非心血管疾病[10-14]。隨著hs-cTn研究和應(yīng)用的廣泛深入，作為研究和應(yīng)用的前提，hs-cTn的檢測準(zhǔn)確性不容忽視，應(yīng)當(dāng)將其提高到同等重要的地位予以重視。

作為醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的基礎(chǔ)和關(guān)鍵環(huán)節(jié)，檢驗(yàn)前、中、后程序中的各種因素直接影響著檢測結(jié)果，準(zhǔn)確、可靠的檢測結(jié)果來源于對分析前、中、后的質(zhì)量控制。在本研究納入的3個因素中，離心速度和時間屬于檢驗(yàn)中程序，由醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室把控，相對容易改進(jìn)和優(yōu)化；溶血則屬于檢驗(yàn)前程序，多由采血操作不當(dāng)或運(yùn)送不規(guī)范等原因?qū)е拢鄬Σ蝗菀装芽兀浅Ｒ姷臋z測結(jié)果影響因素。有研究發(fā)現(xiàn)60%左右的檢驗(yàn)誤差發(fā)生在檢驗(yàn)前，標(biāo)本采集和運(yùn)送是質(zhì)量控制的第一環(huán)，也是基礎(chǔ)的一環(huán)。

本研究中各組標(biāo)本經(jīng)3 000 r/min離心后，低濃度組各時間點(diǎn)之間偏移較大，高濃度組偏倚較小，提示離心時間對檢測結(jié)果的影響與hs-cTn濃度相關(guān)，低濃度的hs-cTn應(yīng)堅(jiān)決保證離心時間，減小檢測誤差。除此之外，本研究設(shè)定4 000 r/min、5 min離心條件，增加離心速度減少離心時間，與常規(guī)離心條件進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，在中、高濃度組中，4 000 r/min、5 min離心條件下的檢測結(jié)果與其他結(jié)果均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。眾所周知，對于ACS患者尤其是AMI患者，時間就是生命，時間與并發(fā)癥、預(yù)后直接相關(guān)。因此，本研究可以得出以下結(jié)論：對于ACS患者，可以用4 000 r/min、5 min條件代替常規(guī)的3 000 r/min、10 min條件，能縮短標(biāo)本檢測時間，更快獲得檢測結(jié)果。

溶血是常見的檢測結(jié)果影響因素，與采血、運(yùn)送等環(huán)節(jié)有關(guān)。紅細(xì)胞破裂導(dǎo)致血紅蛋白等成分溢出，通過影響吸光度最終導(dǎo)致檢測誤差的出現(xiàn)。本研究結(jié)果顯示，隨著溶血程度的增加，各組的檢測均有上升，偏倚逐漸增大，最大偏倚甚至超過20%。通過不同溶血程度間的差異分析可以看出，hs-cTn結(jié)果較高時(H組)，輕度溶血對檢測結(jié)果不會產(chǎn)生影響；只有當(dāng)血紅蛋白≥10 g/L時，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。同時可以看到，M組中血紅蛋白≥4 g/L會使結(jié)果產(chǎn)生明顯差異，而L組的不同溶血程度間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，對于任何標(biāo)本，都應(yīng)當(dāng)強(qiáng)調(diào)檢驗(yàn)前程序中的規(guī)范化操作，并持續(xù)追蹤改進(jìn)，以避免標(biāo)本溶血的發(fā)生。