• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    微小RNA-200c在胰腺癌中的研究進(jìn)展

    2022-11-24 07:36:45康鵬東
    臨床肝膽病雜志 2022年4期
    關(guān)鍵詞:胰腺癌甲基化靶向

    張 堯, 張 鍇, 康鵬東, 馬 超

    鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院 肝膽胰外科, 鄭州 450008

    胰腺癌是一種侵襲性高、死亡率高的惡性腫瘤。由于早期確診難、侵襲轉(zhuǎn)移早、放化療抵抗及缺乏有效的靶向治療方案,預(yù)后較差[1]。因此,胰腺癌治療的研究探索中,尋找可靠的生物標(biāo)志物和分子靶標(biāo)至關(guān)重要。近年來,隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展,微小RNA(miRNA,miR)逐漸成為研究熱點(diǎn),為胰腺癌研究提供新思路和方向[2]。

    miRNA是一種廣泛參與機(jī)體多種生物學(xué)功能的非編碼RNA,主要與靶RNA的3′端非翻譯區(qū)(untranslated regin,UTR)結(jié)合,導(dǎo)致靶RNA的降解或翻譯終止[3]。研究[4]證實(shí),多種miRNA在腫瘤中發(fā)揮癌基因或抑癌基因作用,并影響腫瘤的生物學(xué)行為。其中,miR-200家族與腫瘤的關(guān)系是近年來的研究重點(diǎn)[5],目前相關(guān)研究[6-7]表明,miR-200c與胰腺癌的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移、預(yù)后等諸多方面有密切關(guān)系。本文即對(duì)miR-200c在胰腺癌中的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

    1 miR-200c概述及在胰腺癌中的表達(dá)情況

    miR-200家族由miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-419組成。其中miR-200c、miR-141位于染色體12p13.31,其余位于染色體1p36.33[5]。有研究[8]表明,miR-200c作為抑癌基因,在乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌等多種癌癥中發(fā)揮作用,且通常經(jīng)由阻斷癌細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition,EMT)而表現(xiàn)出抑癌行為。在不同腫瘤細(xì)胞系及組織中,miR-200c的表達(dá)并不完全相同。

    1.1 在胰腺癌組織中的表達(dá) miR-200c已被證實(shí)在肺癌[9]、卵巢癌[10]、肝癌等多種癌組織中低表達(dá)。Ali等[11]應(yīng)用細(xì)針穿刺活檢術(shù)抽取29例胰腺癌組織及15例正常胰腺組織,應(yīng)用微陣列數(shù)據(jù)分析檢測(cè)發(fā)現(xiàn)胰腺癌組織中超過228個(gè)miRNA存在異常,對(duì)前7個(gè)miRNA應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(qRT-PCR)進(jìn)一步驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí)大部分胰腺癌組織中l(wèi)et-7c、let-7f和miR-200c表達(dá)降低,所有胰腺癌組織中miR-486-5p和miR-451表達(dá)顯著升高,let-7d和miR-423-5p表達(dá)具備個(gè)體化差異。

    Pan等[12]應(yīng)用qRT-PCR 對(duì)胰腺癌組織及癌旁組織中的miR-200c表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn),miR-200c在胰腺癌組織中表達(dá)水平顯著低于癌旁組織。為進(jìn)一步探索miR-200c表達(dá)下調(diào)的機(jī)制,其應(yīng)用時(shí)間飛行質(zhì)譜技術(shù)對(duì)miR-200c啟動(dòng)子甲基化水平進(jìn)行定量測(cè)定,結(jié)果顯示miR-200c啟動(dòng)子高甲基化,且其甲基化水平與miR-200c表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)性。應(yīng)用DNA去甲基化劑5-Aza-dC處理胰腺癌細(xì)胞后,miR-200c啟動(dòng)子甲基化水平降低,miR-200c表達(dá)恢復(fù)。在胰腺癌中,miR-200c低表達(dá),且其表達(dá)的下調(diào)與啟動(dòng)子的高甲基化有關(guān)。

    1.2 在胰腺癌干細(xì)胞中的表達(dá) 胰腺癌干細(xì)胞具有自我更新的能力,可能是胰腺癌發(fā)生發(fā)展的啟動(dòng)因子,影響胰腺癌的耐藥和轉(zhuǎn)移[13]。Ma等[14]以CD24+CD44+ESA+作為標(biāo)志物在人胰腺癌細(xì)胞株(PANC-1)中分選出胰腺癌干細(xì)胞,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RFQ-PCR)法檢測(cè)miR-200c表達(dá),發(fā)現(xiàn)miR-200c在胰腺癌干細(xì)胞中的表達(dá)明顯低于PANC-1。轉(zhuǎn)染miR-200c前體片段至胰腺癌干細(xì)胞中,高表達(dá)miR-200c后,胰腺癌干細(xì)胞體外侵襲能力明顯降低。miR-200c胰腺癌干細(xì)胞中低表達(dá)并可抑制胰腺癌干細(xì)胞的侵襲能力。

    1.3 在血清中的表達(dá) 循環(huán)miRNA正在成為一種有用的工具,用于各種癌癥的非侵入性診斷和預(yù)后評(píng)估,Gablo等[15]前瞻性納入112例計(jì)劃進(jìn)行手術(shù)切除的胰腺癌患者,把總生存期(OS)<16個(gè)月的患者歸類為預(yù)后不良,OS>20個(gè)月患者歸類為預(yù)后良好,qRT-PCR法檢測(cè)術(shù)前血漿標(biāo)本中miRNA的表達(dá),結(jié)果顯示,多種miRNA在預(yù)后不良與預(yù)后良好病例的血漿樣本中存在差異化表達(dá),其中,預(yù)后不良病例的血漿樣本中,miR-200c顯著高表達(dá)。miR-200c在血清中的差異化表達(dá),提示其在胰腺癌的診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)中具備巨大潛能和廣闊應(yīng)用前景。

    2 miR-200c與胰腺癌的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移

    EMT使有極性的上皮細(xì)胞經(jīng)過一系列變化失去細(xì)胞間聯(lián)系轉(zhuǎn)化為無極性的間質(zhì)細(xì)胞,從而獲得侵襲性和轉(zhuǎn)移能力,是腫瘤早期轉(zhuǎn)移的重要步驟[16]。EMT過程中伴隨多種細(xì)胞分子標(biāo)志物改變,包括細(xì)胞黏附蛋白E-鈣黏蛋白(E-cadherin)和γ-連環(huán)蛋白等的表達(dá)下調(diào),而間葉細(xì)胞的標(biāo)記分子如纖維連接蛋白、波形蛋白(vimentin)和N-鈣黏蛋白等的表達(dá)上調(diào),其中E-cadherin的丟失為EMT的重要特點(diǎn)[17]。EMT在腫瘤及腫瘤干細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[18-20]。多項(xiàng)研究[21-22]表明,miR-200c可通過抑制EMT進(jìn)程發(fā)揮抑癌基因作用。

    胰腺癌中,miR-200c同樣參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞EMT進(jìn)程,Burk等[23]過表達(dá)胰腺癌細(xì)胞中miR-200c后,E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào),而轉(zhuǎn)染miR-200c抑制劑沉默其表達(dá)后,E-cadherin表達(dá)明顯下調(diào)。說明miR-200c直接調(diào)節(jié)E-cadherin來調(diào)控腫瘤細(xì)胞EMT。進(jìn)一步研究[24]證實(shí),miR-200c可直接靶向作用于E-cadherin轉(zhuǎn)錄抑制因子:ZEB1/2,SNAI1/2,Twist1/2以及EMT激活劑TGFβ來抑制EMT進(jìn)程。同時(shí),ZEB1也反過來抑制miR-200c表達(dá)[25],miR-200c和ZEB1的相互抑制形成了一個(gè)雙向負(fù)反饋回路[26]共同調(diào)節(jié)腫瘤的遷徙和轉(zhuǎn)移。靶向ZEB1-miR-200c負(fù)反饋通路有望成為治療胰腺癌的基礎(chǔ)[27]。近年來隨著腫瘤干細(xì)胞研究進(jìn)展,有研究[28]發(fā)現(xiàn),miR-200c也參與了胰腺癌干細(xì)胞EMT過程的調(diào)控,轉(zhuǎn)染前體物質(zhì)使胰腺癌干細(xì)胞中miR-200c高表達(dá)后,胰腺癌干細(xì)胞中E-cadherin表達(dá)明顯上調(diào),vimentin、ZEB1表達(dá)明顯下調(diào),Transwell遷徙實(shí)驗(yàn)證實(shí)高表達(dá)miR-200c后,胰腺癌干細(xì)胞侵襲能力較前降低。

    此外,除了調(diào)節(jié)EMT蛋白,miR-200c還影響胰腺癌細(xì)胞表面黏蛋白的表達(dá)。miR-200c直接靶向胰腺癌細(xì)胞中的黏蛋白4(MUC4)和黏蛋白16(MUC16)的mRNA來抑制MUC4、MUC16蛋白的表達(dá)[29],從而逆轉(zhuǎn)胰腺癌細(xì)胞的侵襲。miR-200c還通過其他通路調(diào)控胰腺癌細(xì)胞的浸潤轉(zhuǎn)移。Huang等[30]應(yīng)用TargetScan數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)出Notch1是miR-200c的作用靶點(diǎn),而Notch1被證實(shí)參與了胰腺的胚胎發(fā)育與分化[31],在胰腺癌中起重要作用。轉(zhuǎn)染miR-200c使其在胰腺癌干細(xì)胞中高表達(dá)后,Notch1免疫熒光強(qiáng)度降低,胰腺癌干細(xì)胞的干細(xì)胞樣特性和轉(zhuǎn)移潛能被抑制。miR-200c作用于Notch1的3′UTR,下調(diào)其mRNA及蛋白的表達(dá)。

    也有研究[32]指出,miR-200c是轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄本1(matastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)的直接靶點(diǎn)。Zhuo等[33]應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)胰腺癌組織中MALAT1和miR-200c的表達(dá),轉(zhuǎn)染MALAT-1使其高表達(dá)后,胰腺癌組織中miR-200c表達(dá)較前明顯降低,同樣,miR-200c高表達(dá)后,MALAT-1表達(dá)明顯降低。二者表達(dá)相互抑制,可能形成一個(gè)新的反饋回路。進(jìn)一步分析表明,胰腺癌組織中MALAT-1與ZEB1的表達(dá)呈正相關(guān),miR-200c與MALAT-1、ZEB1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。這一方面是因?yàn)镸ALAT-1可以作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA抑制miR-200c的表達(dá),另一方面因?yàn)閙iR-200c與靶RNA的3′UTR結(jié)合,沉默靶基因抑制MALAT-1表達(dá)。Transwell遷徙實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),MALAT-1促進(jìn)胰腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移,miR-200c則起抑制作用,當(dāng)同時(shí)沉默MALAT-1和miR-200c時(shí),對(duì)比單獨(dú)沉默MALAT-1,腫瘤細(xì)胞侵襲性升高,miR-200c的抑制部分逆轉(zhuǎn)了侵襲性降低。

    3 miR-200c與胰腺癌診斷及預(yù)后

    胰腺癌因早期癥狀不典型、缺乏特異性診斷標(biāo)志物從而難以實(shí)現(xiàn)早期診斷,進(jìn)而導(dǎo)致預(yù)后不佳。如何提高胰腺癌高危人群早期篩查確診率一直是臨床工作中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。目前,雖然miR-200c等因子在胰腺癌患者血清中的表達(dá)變化已有相關(guān)研究報(bào)道,提示與患者預(yù)后相關(guān),但miR-200c在胰腺癌中的診斷價(jià)值仍需進(jìn)一步大樣本研究。miR-200c等因子與血清腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè),多指標(biāo)共同診斷或能提高胰腺癌的診斷準(zhǔn)確度。

    miR-200c在胰腺癌組織中及患者血清中的表達(dá)均提示與預(yù)后相關(guān)。Soubani等[34]從99例施行胰十二指腸切除術(shù)的患者中獲得胰腺癌組織,qRT-PCR法檢測(cè)miR-200c表達(dá)并分為高表達(dá)組和低表達(dá)組,分析其與預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示,miR-200c的低表達(dá)與胰腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、血管浸潤(陰性或陽性)顯著相關(guān);高表達(dá)miR-200c組OS更長(zhǎng)。一項(xiàng)關(guān)于miRNA與胰腺癌預(yù)后的Meta分析顯示[35],miR-200c低表達(dá)患者生存期明顯縮短,提示miR-200c低表達(dá)是手術(shù)切除后患者預(yù)后不良的重要預(yù)測(cè)。Gablo等[15]的前瞻性臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)循環(huán)miR-200c的表達(dá)與患者OS相關(guān),提示血漿中miR-200c可能作為生物標(biāo)志物來監(jiān)測(cè)腫瘤動(dòng)態(tài)和預(yù)測(cè)胰腺癌患者預(yù)后。因此,組織miR-200c的低表達(dá)一定程度上可以提示癌癥患者的不良預(yù)后,然而,晚期癌癥患者中,循環(huán)miR-200c的高表達(dá)則提示患者的預(yù)后不良。

    4 miR-200c與胰腺癌治療

    miR-200c與化療耐藥密切相關(guān),Li等[36]將胰腺癌細(xì)胞分為吉西他濱敏感和吉西他濱耐藥,檢測(cè)兩組胰腺癌細(xì)胞中miRNA的表達(dá),發(fā)現(xiàn)吉西他濱耐藥細(xì)胞中miR-200b、miR-200c、let-7b、let-7c、let-7d和let-7e的表達(dá)顯著下調(diào),而E-cadherin、vimentin、ZEB1等蛋白高表達(dá)。研究[37]發(fā)現(xiàn),ZEB1和其他EMT調(diào)控因子可能維持人胰腺癌細(xì)胞的耐藥,進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí),miR-200c靶向沉默ZEB1,不僅上調(diào)了E-cadherin的表達(dá),還增加了其他上皮標(biāo)志物,如EVA1和MAL2的表達(dá),恢復(fù)了胰腺癌細(xì)胞對(duì)吉西他濱、5-氟尿嘧啶、順鉑等藥物的敏感性。探索miRNA與胰腺癌傳統(tǒng)治療的相互關(guān)系,可以為胰腺癌的治療打開新的突破口。miRNA與化療藥物的聯(lián)合治療也是一個(gè)潛在的、有前景的研究方向,既可以利用miRNA的優(yōu)勢(shì)靶向多個(gè)信號(hào)通路,又可以發(fā)揮抗癌藥物的細(xì)胞毒性作用、減少胰腺癌細(xì)胞的化療耐藥性[38-39]。

    隨著技術(shù)手段的不斷進(jìn)步,許多臨床研究開始探索miRNA在臨床治療中的應(yīng)用。miRNA應(yīng)用于腫瘤治療,主要依靠直接或間接下調(diào)原癌miRNA的表達(dá)或上調(diào)抑癌miRNA的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)[2]。治療性miRNA必須通過多重生物屏障,包括全身血液環(huán)境、腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞微環(huán)境等[40],靶向調(diào)節(jié)目標(biāo)miRNA的表達(dá)。在這個(gè)過程中,為提高miRNA的生物穩(wěn)定性和靶向治療性,常借助脂質(zhì)載體、細(xì)胞外囊泡、miR-納米顆粒結(jié)合物、miR海綿等各種運(yùn)載工具[41]。抑癌性miRNA如miR-200c再表達(dá)具有廣泛的應(yīng)用前景和臨床意義,但需要進(jìn)一步研究相應(yīng)的模擬劑和發(fā)現(xiàn)更有效的運(yùn)載系統(tǒng),從而得以應(yīng)用于臨床治療。

    5 小結(jié)與展望

    近年來,胰腺癌發(fā)病率呈不斷攀升趨勢(shì),對(duì)于胰腺癌的發(fā)病機(jī)制、診斷、治療的研究仍未取得突破性進(jìn)展。miRNA作為備受關(guān)注的研究熱點(diǎn),已經(jīng)證實(shí)在多種腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中起到相關(guān)作用。miR-200c在胰腺癌中發(fā)揮著抑癌基因作用,通過靶向調(diào)控下游基因及調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路來抑制胰腺癌的浸潤與轉(zhuǎn)移,并可作為評(píng)估預(yù)后的有效分子標(biāo)志物,輔助臨床診斷。

    隨著技術(shù)手段的不斷提高,對(duì)miRNA的研究也逐漸從基礎(chǔ)方向至臨床應(yīng)用方向轉(zhuǎn)化,越來越多的研究關(guān)注到非病毒載體介導(dǎo)的miRNA運(yùn)載在胰腺癌治療中的應(yīng)用。但是,miR-200c是否可以作為腫瘤治療劑仍需進(jìn)一步體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床試驗(yàn)證實(shí)。miR-200c與傳統(tǒng)腫瘤治療手段的關(guān)系及與其他miRNA間的相互作用關(guān)系或成為下一步臨床研究的重點(diǎn)。

    利益沖突聲明:所有作者均聲明不存在利益沖突。

    作者貢獻(xiàn)聲明:張堯負(fù)責(zé)文獻(xiàn)整理,撰寫論文;張鍇、康鵬東參與查閱文獻(xiàn),修改論文;馬超負(fù)責(zé)擬定寫作方向,指導(dǎo)撰寫文章并最終定稿。

    猜你喜歡
    胰腺癌甲基化靶向
    胰腺癌治療為什么這么難
    如何判斷靶向治療耐藥
    MUC1靶向性載紫杉醇超聲造影劑的制備及體外靶向?qū)嶒?yàn)
    毛必靜:靶向治療,你了解多少?
    肝博士(2020年5期)2021-01-18 02:50:18
    STAT1和MMP-2在胰腺癌中表達(dá)的意義
    早診早治趕走胰腺癌
    靶向超聲造影劑在冠心病中的應(yīng)用
    鼻咽癌組織中SYK基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化分析
    胃癌DNA甲基化研究進(jìn)展
    中西醫(yī)結(jié)合護(hù)理晚期胰腺癌46例
    久久久国产欧美日韩av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美变态另类bdsm刘玥| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 一区二区三区精品91| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲美女黄片视频| 国产日韩欧美视频二区| 搡老乐熟女国产| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| a级毛片在线看网站| 国产男女超爽视频在线观看| 两个人免费观看高清视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久网色| 国产av国产精品国产| 午夜激情久久久久久久| 最黄视频免费看| 天天添夜夜摸| 亚洲av美国av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 18禁观看日本| a级毛片黄视频| 777米奇影视久久| 99热国产这里只有精品6| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 最新在线观看一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 另类亚洲欧美激情| 91成人精品电影| 热re99久久精品国产66热6| 女性被躁到高潮视频| av国产精品久久久久影院| 美女扒开内裤让男人捅视频| 女警被强在线播放| 中国美女看黄片| 丝袜美腿诱惑在线| 久久国产精品大桥未久av| 9色porny在线观看| 女人精品久久久久毛片| 中国美女看黄片| 91av网站免费观看| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 手机成人av网站| 中文字幕高清在线视频| 色尼玛亚洲综合影院| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲五月婷婷丁香| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 无限看片的www在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 后天国语完整版免费观看| 久久99一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 老熟女久久久| 亚洲精品国产区一区二| 亚洲色图av天堂| 午夜日韩欧美国产| 久久影院123| 久久久久视频综合| 国产欧美日韩一区二区精品| 交换朋友夫妻互换小说| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 老熟女久久久| 飞空精品影院首页| av免费在线观看网站| 午夜91福利影院| 国产精品国产高清国产av | 欧美成人免费av一区二区三区 | 欧美黑人欧美精品刺激| 国产xxxxx性猛交| 午夜视频精品福利| 国产亚洲av高清不卡| 又黄又粗又硬又大视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲第一欧美日韩一区二区三区 | 两个人看的免费小视频| 中文字幕色久视频| 国产一区二区在线观看av| 久久性视频一级片| 久久亚洲真实| 久久中文字幕一级| 性高湖久久久久久久久免费观看| 另类亚洲欧美激情| 日韩视频在线欧美| 十八禁高潮呻吟视频| 国产高清视频在线播放一区| 欧美精品亚洲一区二区| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| av国产精品久久久久影院| 国产人伦9x9x在线观看| 欧美成人免费av一区二区三区 | 午夜福利在线观看吧| 精品熟女少妇八av免费久了| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看免费午夜福利视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲成国产人片在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产在线精品亚洲第一网站| 中文字幕高清在线视频| 又黄又粗又硬又大视频| 老司机亚洲免费影院| 一级黄色大片毛片| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品国产高清国产av | 国产av国产精品国产| av天堂久久9| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲精品av麻豆狂野| 在线观看免费高清a一片| 亚洲午夜理论影院| av不卡在线播放| 91九色精品人成在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av片天天在线观看| 在线看a的网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久免费观看电影| 69av精品久久久久久 | 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品久久久精品久久久| 精品少妇久久久久久888优播| 国产成人精品久久二区二区免费| 一本综合久久免费| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品久久久久成人av| 下体分泌物呈黄色| 成人特级黄色片久久久久久久 | 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜福利,免费看| 啦啦啦 在线观看视频| 久久国产精品大桥未久av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 免费高清在线观看日韩| 欧美在线一区亚洲| 亚洲av国产av综合av卡| 两性夫妻黄色片| 青草久久国产| 一级,二级,三级黄色视频| 久久久久国内视频| 视频区图区小说| 国产单亲对白刺激| 婷婷丁香在线五月| av天堂久久9| 怎么达到女性高潮| 亚洲成人手机| 成人永久免费在线观看视频 | 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美激情高清一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 欧美日韩成人在线一区二区| 免费人妻精品一区二区三区视频| www.999成人在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黑丝袜美女国产一区| 黄片大片在线免费观看| 女警被强在线播放| 人妻久久中文字幕网| 久久久国产一区二区| 青青草视频在线视频观看| 无限看片的www在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲专区字幕在线| 又紧又爽又黄一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| h视频一区二区三区| 一进一出好大好爽视频| 十八禁网站免费在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲av日韩在线播放| 嫁个100分男人电影在线观看| 久9热在线精品视频| 夜夜夜夜夜久久久久| 大片电影免费在线观看免费| 亚洲精品国产色婷婷电影| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 免费av中文字幕在线| 99久久99久久久精品蜜桃| av不卡在线播放| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲全国av大片| av在线播放免费不卡| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲av日韩在线播放| 老鸭窝网址在线观看| 免费看十八禁软件| 日本av免费视频播放| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品 欧美亚洲| 日日夜夜操网爽| 热99国产精品久久久久久7| 国产日韩欧美视频二区| 久久久久久人人人人人| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久热这里只有精品99| 国产午夜精品久久久久久| 一夜夜www| 久久午夜亚洲精品久久| 一本色道久久久久久精品综合| 成年人黄色毛片网站| 欧美日韩一级在线毛片| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲黑人精品在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产精品国产av在线观看| 国产欧美亚洲国产| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美日韩视频精品一区| 色综合欧美亚洲国产小说| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 18在线观看网站| 久久这里只有精品19| 亚洲情色 制服丝袜| 午夜91福利影院| 午夜两性在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产精品免费一区二区三区在线 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人欧美| 午夜免费成人在线视频| 一区福利在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 中亚洲国语对白在线视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 人妻一区二区av| 成在线人永久免费视频| 国产精品 国内视频| 免费观看a级毛片全部| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成人免费无遮挡视频| 激情在线观看视频在线高清 | 好男人电影高清在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 性色av乱码一区二区三区2| 久久午夜亚洲精品久久| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产一区二区三区视频了| 热99久久久久精品小说推荐| 91成年电影在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜久久久在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费在线观看完整版高清| 一级片免费观看大全| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产精品影院久久| 男女床上黄色一级片免费看| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 午夜福利一区二区在线看| 国产精品.久久久| 一区二区三区精品91| 国产亚洲欧美精品永久| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 色综合婷婷激情| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 好男人电影高清在线观看| 国产一卡二卡三卡精品| 大型av网站在线播放| 99热国产这里只有精品6| 欧美成人免费av一区二区三区 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 男人操女人黄网站| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲午夜理论影院| 不卡一级毛片| 成年动漫av网址| 久久中文字幕一级| 在线观看免费午夜福利视频| 两个人看的免费小视频| 一本久久精品| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 国产精品免费一区二区三区在线 | 午夜免费成人在线视频| 国产欧美亚洲国产| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品乱久久久久久| 美女福利国产在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美激情高清一区二区三区| 国产麻豆69| 色播在线永久视频| 亚洲 国产 在线| 亚洲熟妇熟女久久| 18在线观看网站| 大码成人一级视频| 久久精品国产综合久久久| 乱人伦中国视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 青青草视频在线视频观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲专区字幕在线| 亚洲美女黄片视频| 国产有黄有色有爽视频| 美女主播在线视频| 精品少妇久久久久久888优播| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 十八禁网站网址无遮挡| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲综合色网址| 美女福利国产在线| 成人国产一区最新在线观看| 黄色视频不卡| 在线观看免费午夜福利视频| 日日夜夜操网爽| 午夜精品国产一区二区电影| www.999成人在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| av国产精品久久久久影院| 老汉色∧v一级毛片| 十八禁网站免费在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 青青草视频在线视频观看| 精品国产亚洲在线| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲天堂av无毛| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲专区中文字幕在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 三级毛片av免费| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲专区中文字幕在线| 精品免费久久久久久久清纯 | 国产99久久九九免费精品| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 香蕉国产在线看| 女性被躁到高潮视频| 成人亚洲精品一区在线观看| av网站在线播放免费| 无限看片的www在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费观看人在逋| 亚洲伊人久久精品综合| 成人永久免费在线观看视频 | 两性夫妻黄色片| 午夜福利视频精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国产精品偷伦视频观看了| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 免费观看av网站的网址| 国产片内射在线| 亚洲精品国产区一区二| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人欧美在线观看 | 国产高清国产精品国产三级| 亚洲精品国产区一区二| 国产在线视频一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成人影院久久| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲欧洲日产国产| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲五月婷婷丁香| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产一区二区三区综合在线观看| av网站在线播放免费| 超碰97精品在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产高清videossex| 新久久久久国产一级毛片| 欧美成狂野欧美在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 日韩欧美三级三区| 久久这里只有精品19| 国产精品久久久久成人av| 久久狼人影院| 高清毛片免费观看视频网站 | 欧美日韩黄片免| 久久久国产精品麻豆| 中文字幕色久视频| 一级a爱视频在线免费观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 99热国产这里只有精品6| 99久久99久久久精品蜜桃| 韩国精品一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 2018国产大陆天天弄谢| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 99国产精品免费福利视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美黑人精品巨大| 99香蕉大伊视频| 亚洲av成人一区二区三| tube8黄色片| 久久免费观看电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久精品国产a三级三级三级| 精品免费久久久久久久清纯 | 桃花免费在线播放| 成年版毛片免费区| 人妻一区二区av| 日本wwww免费看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲天堂av无毛| 成人三级做爰电影| 亚洲成人手机| 亚洲精品在线美女| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美在线一区亚洲| 99久久精品国产亚洲精品| 91老司机精品| 国产精品国产高清国产av | 午夜激情久久久久久久| 看免费av毛片| 亚洲专区国产一区二区| 精品亚洲成a人片在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 韩国精品一区二区三区| 国产精品免费一区二区三区在线 | svipshipincom国产片| 超碰成人久久| 老熟女久久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品一区二区在线不卡| 18禁观看日本| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久热在线av| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲精华国产精华精| 青青草视频在线视频观看| 涩涩av久久男人的天堂| 一级,二级,三级黄色视频| 久久99热这里只频精品6学生| 国产野战对白在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 中文字幕av电影在线播放| 国产在线观看jvid| 成人手机av| 一本久久精品| 国产精品免费一区二区三区在线 | 高清视频免费观看一区二区| 操美女的视频在线观看| 在线观看66精品国产| 国产精品九九99| 国产精品久久电影中文字幕 | 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产a三级三级三级| 色精品久久人妻99蜜桃| 美女福利国产在线| av视频免费观看在线观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一级黄色大片毛片| aaaaa片日本免费| 免费日韩欧美在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 狂野欧美激情性xxxx| 不卡一级毛片| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日本av手机在线免费观看| 国产在线观看jvid| 免费观看a级毛片全部| 757午夜福利合集在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 777米奇影视久久| 少妇粗大呻吟视频| 天天操日日干夜夜撸| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜久久久在线观看| 99久久人妻综合| 99国产精品一区二区蜜桃av | 国产成人免费观看mmmm| 亚洲欧美激情在线| 香蕉丝袜av| 日日夜夜操网爽| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日本vs欧美在线观看视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产一区有黄有色的免费视频| 波多野结衣一区麻豆| 水蜜桃什么品种好| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产麻豆69| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产午夜精品久久久久久| 在线播放国产精品三级| 91成人精品电影| 99精品久久久久人妻精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 51午夜福利影视在线观看| 一级毛片精品| 久久中文看片网| 大片电影免费在线观看免费| 成人国产一区最新在线观看| 黄片大片在线免费观看| 色老头精品视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 天堂8中文在线网| 天天影视国产精品| 无人区码免费观看不卡 | 99精国产麻豆久久婷婷| 黄色怎么调成土黄色| 午夜福利一区二区在线看| 成人国产av品久久久| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 超碰97精品在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 99国产精品免费福利视频| √禁漫天堂资源中文www| 精品亚洲成国产av| 一进一出抽搐动态| 蜜桃国产av成人99| av超薄肉色丝袜交足视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产麻豆69| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产男靠女视频免费网站| 午夜激情久久久久久久| 精品人妻在线不人妻| 人人澡人人妻人| 18禁国产床啪视频网站| 淫妇啪啪啪对白视频| 女人久久www免费人成看片| 久久精品国产综合久久久| 亚洲性夜色夜夜综合| 久久国产亚洲av麻豆专区| 深夜精品福利| 欧美大码av| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 女性被躁到高潮视频| 中文字幕人妻丝袜制服| 丰满少妇做爰视频| 亚洲av电影在线进入| 国产1区2区3区精品| 亚洲精品美女久久av网站| 黄片播放在线免费| 欧美黄色片欧美黄色片| 一级毛片电影观看| 考比视频在线观看| 一级片'在线观看视频| 国产日韩欧美在线精品| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 免费看a级黄色片| 亚洲国产av影院在线观看| 成人国产一区最新在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 国产欧美日韩一区二区精品| 蜜桃国产av成人99| 波多野结衣一区麻豆| 丝袜在线中文字幕| 一区在线观看完整版| 99国产精品一区二区蜜桃av | 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产精品久久久av美女十八| 国产成人欧美在线观看 | 丝袜在线中文字幕| 后天国语完整版免费观看| 国产一区二区三区视频了| 两性夫妻黄色片| 黄色 视频免费看| 久久久国产成人免费| 超碰97精品在线观看| 成年人黄色毛片网站| 美女视频免费永久观看网站| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲全国av大片| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲成人免费av在线播放| 日韩中文字幕视频在线看片| 免费少妇av软件| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产主播在线观看一区二区| 黄色丝袜av网址大全| 日韩欧美三级三区| 日本av手机在线免费观看|