抗核糖體P蛋白抗體、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達(dá)及臨床意義

郭駿戈，董玉琳，曹向紅，高 輝，王勝虎，許麗虹，王 萍

(昆明市延安醫(yī)院，云南 昆明 650051)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡屬于自身免疫性疾病的一種，常可造成多系統(tǒng)損害，最常累及的器官為腎臟及皮膚，且常易同其他類型的結(jié)締組織疾病重疊或并發(fā)惡性腫瘤[1]。目前對于該疾病的病因、機(jī)制尚不明確，但大部分學(xué)者認(rèn)為該疾病的發(fā)病與遺傳、內(nèi)分泌、感染、免疫異常等因素有關(guān)，是在多種因素的作用下，造成的T淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能降低，引起B(yǎng)細(xì)胞的增生，從而使機(jī)體產(chǎn)生大量的自身抗體，與抗原結(jié)合沉積于皮膚、關(guān)節(jié)、小血管、腎小球等部位，繼而導(dǎo)致的一系列臨床癥狀[2，3]。但由于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的特異性缺乏，因此，臨床早發(fā)現(xiàn)、早診斷較為困難[4]。近年來，有研究顯示抗核糖體P蛋白抗體(anti-ribosomal phosphoportein antibodies，ARPA)、抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(antineut rophil cytoplasmic antibodies，ANCA)與自身免疫性疾病有關(guān)[5，6]。本研究就ARPA、ANCA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中的表達(dá)及臨床意義進(jìn)行研究，旨在為臨床工作提供參考新思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年1月至2021年12月我院收治的系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者126例作為研究組，納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]；②所有患者的臨床資料均完整；③所有患者及家屬均知曉本研究并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在其他免疫系統(tǒng)疾病者；②已使用糖皮質(zhì)激素或免疫抑制劑治療者；③藥物依賴史者。126例患者中男24例，女102例；年齡30～60歲[(42.08±7.92)歲]；通過系統(tǒng)性紅斑狼瘡疾病活動指數(shù)(systemiclupus erythematosus disease activity index，SLEDAI)標(biāo)準(zhǔn)對患者是否處于活動期進(jìn)行評估[7]，其中活動期40例(SLEDAI>9)，非活動期86例(SLEDAI≤9)。另選取同時間段健康體檢人群82例作為對照組，其中男20例，女62例，年齡29～58歲[(41.73±8.25)歲]。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法抽取所有受檢者空腹肘靜脈血5 ml，離心(3500 r/min，5 min，r=8 cm)后取分離血清，ARPA、ANCA采用INOVA Diagnostics,Inc.依諾瓦診斷公司抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(間接免疫熒光法)與歐蒙醫(yī)學(xué)實驗診斷股份公司印跡法自動操作儀進(jìn)行檢測采用間接熒光免疫法(indirect immuno fluorescence，IIF)檢測所有研究對象的血清ARPA、ANCA，采用滴定平板TM技術(shù)和生物薄片馬賽克技術(shù)進(jìn)行檢測；加做系統(tǒng)性紅斑狼瘡陰性對照、胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(c-ARPA、c-ANCA)陽性對照和核周型抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(c-ARPA、p-ANCA)陽性對照。檢測結(jié)果診斷：根據(jù)乙醇固定的中性粒細(xì)胞基質(zhì)片，可區(qū)分兩種不同抗體的熒光模型。c-ARPA、c-ANCA顯示均勻分布的顆粒型熒光，其中胞核無熒光。c-ARPA、p-ANCA顯示帶狀熒光。而陰性無特殊熒光模型顯示。

1.3 觀察指標(biāo)①比較研究組與健康組ARPA、ANCA的表達(dá)。②比較活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA的表達(dá)。③統(tǒng)計系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害的發(fā)生情況，腎損害的評定標(biāo)準(zhǔn)，滿足以下一項即可：出現(xiàn)血尿或蛋白尿，尿蛋白定量(24 h)超過0.5 g，或定性呈(+ + +)及以上，尿鏡檢可見每高倍鏡視野下紅細(xì)胞數(shù)超過5 個或者存在細(xì)胞管型；經(jīng)腎活檢確認(rèn)。分析影響患者腎損害發(fā)生的危險因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，比較采用t檢驗或方差檢驗；計數(shù)資料以例(百分比)的形式表示，比較采用χ2檢驗；多元Logistic回歸分析影響系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害發(fā)生的危險因素。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對照組ARPA、ANCA表達(dá)比較研究組ARPA、ANCA陽性表達(dá)率均高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 研究組與對照組ARPA、ANCA表達(dá)比較 (n)。見表1.

2.2 活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA表達(dá)的比較活動組ARPA、ANCA陽性表達(dá)率高于非活動組(P<0.05)。見表2 。

表2 活動期與非活動期期患者ARPA、ANCA表達(dá)的比較 (n)

2.3 腎損害組與非腎損害組患者臨床資料比較126例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中發(fā)生腎損害67例，發(fā)生率為53.17%。腎損害患者中疾病活動期占比、抗dsDNA抗體陽性占比、ARPA及ANCA表達(dá)水平與非腎損害患者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 腎損害組與非腎損害組患者臨床資料比較 [n(%)]

2.4 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害發(fā)生的影響因素分析疾病活動期、抗dsDNA抗體陽性、ARPA陽性、ANCA陽性為影響系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害發(fā)生的獨立危險因素(P<0.05)，見表4。

表4 系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害發(fā)生的影響因素分析

3 討論

系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種以多系統(tǒng)損害且伴有多種自身抗體為特征的免疫性疾病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜，病情遷延，難以治愈，部分系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者可自行緩解，或呈“一過性”發(fā)作后，病癥經(jīng)數(shù)月可完全消失[9，10]。大多數(shù)患者可出現(xiàn)不同程度的皮膚和黏膜損害，骨骼、心臟、呼吸系統(tǒng)、腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等受累，嚴(yán)重者可致充血性心力衰竭、肺栓塞等[11]。本病病因至今尚未肯定，考慮與遺傳、免疫異常、性激素、環(huán)境等均有一定的關(guān)系[12]。多種因素相互作用可致使系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞減少、降低T抑制細(xì)胞功能，大量的自身抗體產(chǎn)生，與相應(yīng)抗原結(jié)合后形成免疫復(fù)合物，在皮膚、關(guān)節(jié)、小血管、腎小球等部位沉積而產(chǎn)生各種病理現(xiàn)象[13，14]。

既往研究指出，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中有免疫特異性抗細(xì)胞漿抗體的存在，其靶抗原主要為核糖體60S亞基中的P0、P1以及P2三種磷蛋白[15]。臨床將這些磷蛋白抗體命名為ARPA，當(dāng)血清中的ARPA為陽性表達(dá)時，可阻斷延長因子EF-α及EF-2與核糖體之間的相互作用[16]。且有研究往培養(yǎng)的人細(xì)胞株中注射微量的ARPA后發(fā)現(xiàn)，其能對蛋白的合成造成抑制，并說明磷蛋白上的抗體所識別的決定簇同ARPA結(jié)合后能對蛋白合成發(fā)揮抑制作用[17]。本研究通過對比健康人群與系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的ARPA水平發(fā)現(xiàn)，研究組ARPA陽性表達(dá)率高于對照組。盡管ARPA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清中陽性表達(dá)率不如其他系統(tǒng)性紅斑狼瘡的標(biāo)志性抗體高，但由于ARPA對系統(tǒng)性紅斑狼瘡的有著較高的特異性，因此檢測 ARPA對判斷系統(tǒng)性紅斑狼瘡仍具有可行性。且活動組ARPA陽性表達(dá)率高于非活動組，證實ARPA參與了系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生、發(fā)展過程。

ANCA為針對單核與中性粒細(xì)胞胞漿的一種成分：為溶菌酶、蛋白酶3、乳鐵蛋白、髓過氧化物酶、通透性殺菌蛋白以及人白細(xì)胞彈性蛋白酶組織蛋白酶等自身抗體的總稱[18]。研究指出，ANCA對于診斷原發(fā)性小血管炎有著一定的應(yīng)用價值，先已被廣泛用在多種血管炎的診斷中，而原發(fā)性血管炎為系統(tǒng)性紅斑狼瘡的病理特征之一，故推測ANCA可用于系統(tǒng)性紅斑狼瘡的判斷[19]。本研究中，與正常健康人群相比，系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者的ANCA陽性表達(dá)率明顯更高。且活動組ANCA陽性表達(dá)率高于非活動組，這可能是由于ANCA擴(kuò)大并維持了白細(xì)胞的局部吸引和通過激活中性粒細(xì)胞導(dǎo)致中性粒細(xì)胞脫顆粒、出現(xiàn)反應(yīng)性氧分子、釋放蛋白溶解酶等過程，使局部血管受到損害。故推測ANCA可能參與了系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生、發(fā)展過程。研究指出，腎臟是系統(tǒng)性紅斑狼瘡的主要靶器官，而腎損害是其常見的并發(fā)癥[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，疾病活動期、抗dsDNA抗體、ARPA、ANCA皆為影響系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害發(fā)生的獨立危險因素，但具體效應(yīng)還待予以進(jìn)一步研究證實。而通過對ARPA、ANCA進(jìn)行監(jiān)測可有效降低系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者腎損害的發(fā)生風(fēng)險，為臨床盡早實施針對性治療提供幫助，以阻礙患者病情進(jìn)展，從而有利于患者預(yù)后的改善。但由于本研究樣本含量較小，研究時間較短，針對狼瘡腎損害相關(guān)的ANCA的亞型，如MPO、PR3等的分析缺乏一定的隨訪數(shù)據(jù)，故后續(xù)可加大樣本含量，延長研究時間，進(jìn)一步針對狼瘡腎損害相關(guān)的ANCA的亞型分析進(jìn)行更深入的前瞻性研究，為臨床診治提供更好的參考依據(jù)。

綜上，ARPA、ANCA在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者中呈陽性表達(dá)，是影響系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎損害發(fā)生的危險因素，提示ARPA、ANCA可能參患者病情發(fā)生、進(jìn)展，臨床需重視檢測該兩指標(biāo)，為制定診療工作提供參考資料。