細胞角蛋白19血清片段211、丙酮酸脫氫酶復合物E1α亞單位在非小細胞肺癌患者中的表達及意義

姚啟濤，魯馮洋，陳淑芳，陳玲玲

(安徽省臨泉縣人民醫(yī)院，安徽 阜陽 236400)

非小細胞肺癌(NSCLC)在我國發(fā)病率較高，且多數(shù)確診已為晚期[1]，而放化療是延長晚期NSCLC類患者生存時間的首選治療方案[2]。隨著分子生物學研究的不斷深入，目前找尋時效性、準確性較高的靶向分子標志物來準確預測患者病情及預后是指導臨床治療及改善NSCLC患者預后的關鍵[3]。有研究顯示，細胞角蛋白19片段211(Cyfra211)是在多種惡性病變的臨床診斷中起著重要作用[4]。既往文獻報道，丙酮酸脫氫酶復合物E1α亞單位(PDHA1)可調節(jié)細胞代謝過程，增強腫瘤細胞的遷移能力，提高化療藥物的耐藥性[5]，但其在NSCLC中的表達及作用機制研究較少。本研究旨在分析Cyfra211、PDHA1在NSCLC患者中的表達及臨床意義，為NSCLC患者臨床治療指導及預后評估提供更好的臨床參考價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2017年3月至2020年3月我院收治的139例NSCLC患者癌組織標本(癌組織組)及遠離癌組織3 cm的癌旁正常組織(對照組)。納入標準：①符合《中國非小細胞肺癌免疫檢查點抑制劑治療專家共識(2019年版)》中NSCLC診斷標準[6]；②納入研究前1個月內(nèi)均未接受放化療治療，未服用過影響激素水平的藥物；③術后石蠟標本保存完善，并且待測組織范圍足夠。排除標準：①除NSCLC外存在其他癌病者；②存在精神障礙者；③資料不完整或中途失訪者；④并發(fā)嚴重心律失常、心肌梗死、腦梗死。139例患者中男87例，女52例；年齡52～81歲[(61.11±5.49)歲]；病程0.8～2.2年[(1.35±0.33)年]。

1.2 方法Cyfra211、PDHA1檢測方法：蠟塊通過切片機連續(xù)切片，組織厚度 4 μm，分別做Cyfra211、PDHA1免疫組化染色。均經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋，載玻片泡酸，高溫滅菌PBS 緩沖液洗滌、及多聚賴氨酸涂片等處理，再經(jīng)DAB顯色，蘇木精復染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。最后在顯微鏡下觀察Cyfra211、PDHA1表達情況，并拍片保存。

1.3 判定標準根據(jù)細胞核著色進行評分，評分標準由染色強度和染色細胞百分比綜合評定[7]。0、1、2、3、4分所對應陽性細胞比例分別為≤5%，5%～25%，25%～50%，50%～75%，75%以上；染色強度評分：0、1、2、3分對應的染色程度分別是未染色、淡黃色、棕黃色及棕褐色。染色指數(shù)=上述兩項評分之和，>3分為陽性，≤3分為陰性。

1.4 隨訪通過門診復查+電話隨訪記錄患者2年預后情況。

1.5 統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標準差描述，比較采用t檢驗；計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；采用ROC曲線分析對預后的預測價值。檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同組織中Cyfra211、PDHA1表達情況癌組織Cyfra211陽性表達率及PDHA1陰性表達率高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中Cyfra211、PDHA1表達情況比較 [n(%)]

2.2 不同臨床特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表達低分化、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移NSCLC患者Cyfra211陽性率及PDHA1陰性率均更高(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征NSCLC患者Cyfra211、PDHA1表達 [n(%)]

2.3 Cyfra211、PDHA1陽性及陰性表達NSCLC患者2年預后分析139例患者中死亡84例，生存55例。死亡患者Cyfra211陽性率、PDHA1陰性率均高于生存患者(P<0.05)。見表3。

表3 Cyfra211、PDHA1陽性及陰性表達的患者2年預后分析 [n(%)]

2.4 患者預后預測價值分析Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測AUC、靈敏度、特異度均顯著高于Cyfra211、PDHA1任一項單一檢測(P<0.0.5)。見表4、圖1。

表4 患者預后預測價值分析

圖1 Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測NSCLC患者2年預后的ROC曲線

3 討論

NSCLC是呼吸系統(tǒng)常見腫瘤，5年生存率極低[8]。相關調查研究資料表明，吸煙等不良生活習慣與NSCLC的發(fā)生有著密不可分的關系，故盡早診斷、及時指導治療改善患者預后是臨床研究熱點及關鍵[9]?，F(xiàn)臨床多依據(jù)分子生物標志物來預測患者的生存率，并對患者實施針對性治療方案，以延長患者生存期。

Cyfra211主要高表達于鱗癌中，且其表達水平升高則提示疾病進展，或是存在預后不良的可能[10，11]。PDHA1是位于Xp22.12的基因之一，全長17.5kb，其關鍵作用在于調控限速酶PDHc的活性，減緩細胞生長、增殖等過程[12，13]。既往相關文獻報道，NSCLC患者血清中Cyfra211的表達濃度與疾病進展成正相關[14～16]。研究指出，PDHA1在多種疾病中下調，其可作為一個惡性腫瘤的保護因子，在組織中表達下降，則與患者病情進展、預后不良有著密切聯(lián)系[17]。本次研究中，癌組織Cyfra211陽性表達率及PDHA1陰性表達率高于對照組，由此提示，Cyfra211表達上調及PDHA1的表達下調可能與NSCLC疾病的發(fā)生有著密切聯(lián)系。且對比不同病理特征患者數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，低分化、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結轉移NSCLC患者Cyfra211陽性率，PDHA1陰性率均更高，認為Cyfra211表達過高、PDHA1表達過低對腫瘤細胞的增殖分化有著促進作用，加速了疾病的進展，增加了癌變的惡性程度，進一步證實了Cyfra211、PDHA1與NSCLC疾病發(fā)生、進展的密切性。

深入分析隨訪資料可知，139例患者中有84例死亡，55例生存，且預后死亡的NSCLC患者Cyfra211陽性率、PDHA1陰性率均高于預后生存患者，可見Cyfra211陽性表達及PDHA1陰性表達的患者死亡的風險更大。分析其原因：Cyfra211表達上調及PDHA1表達降低，細胞內(nèi)的活性氧水平也會隨之下降，影響Akt激酶信號通路，使得細胞的生長周期及細胞凋亡速度加快，促進腫瘤發(fā)生發(fā)展[18～20]。進一步ROC曲線分析示：Cyfra211、PDHA1聯(lián)合檢測靈敏度、特異度均顯著高于單一檢測，再次證實了Cyfra211、PDHA1在NSCLC患者病情、預后評估中的重要作用。

綜上所述，Cyfra211、PDHA1C聯(lián)合檢測在NSCLC病情、預后評估中的作用更佳，可為NSCLC患者臨床治療指導及預后評估提供更好的參考依據(jù)。