一種雞毒支原體凈化方案的建立*

來慶梅，王世濤，丁愛君，劉瑞，張承新，郭龍宗**

（1.山東益生種畜禽股份有限公司，山東 煙臺(tái) 265508；2.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)，山東 青島 266109）

雞毒支原體（MG）引發(fā)的雞毒支原體病是一種傳染性疾病，也曾被稱為雞慢性呼吸道?。–RD）。該病一年四季均可發(fā)生，但是在冬季、春初多發(fā)，主要表現(xiàn)為咳嗽、呼嚕、流鼻涕、甩鼻、面部腫脹、氣管炎和氣囊炎等呼吸道癥狀，剖檢可見鼻腔卡他性滲出，氣囊炎是其明顯癥狀。雞群隨著年齡的增長(zhǎng)，對(duì)支原體感染力增強(qiáng)，但雛雞感染后癥狀表現(xiàn)的比成年雞明顯。產(chǎn)蛋期雞群長(zhǎng)時(shí)間感染后可引起產(chǎn)蛋率下降、受精率和孵化率降低等臨床癥狀。單獨(dú)雞毒支原體感染，發(fā)病時(shí)間長(zhǎng)，死亡率不高，僅出現(xiàn)輕型癥狀，如鼻腔輕微炎癥、咳嗽等呼吸道癥狀；但并發(fā)感染對(duì)雞毒支原體影響很大，常因接種新城疫疫苗或傳染性支氣管炎疫苗使呈隱性感染的雞毒支原體暴發(fā)，導(dǎo)致機(jī)體表現(xiàn)出呼吸道黏膜出血，氣囊、氣管以及支氣管出現(xiàn)干酪樣滲出物，嚴(yán)重的會(huì)造成輸卵管炎癥，從而死亡率較高。

1 流行現(xiàn)狀

雞毒支原體主要引起禽類呼吸系統(tǒng)的病變，易感動(dòng)物主要有雞和火雞，其中4～8周齡的雞和5～16周齡的火雞更為敏感，成年雞通常呈隱性感染。雞毒支原體病的傳播方式主要為水平傳播、垂直傳播。水平傳播即病原通過飛沫、羽毛、排泄物及被污染的飼料、飲水、籠具等接觸性途徑進(jìn)行傳播；垂直傳播則主要通過陽性母雞（陽性公雞精液授精）經(jīng)種蛋傳給下一代。這樣就造成雞毒支原體在雞群間相互傳播，各代次間代代傳播，故雞群一旦感染后不易根除。1943年首次在被感染的病雞中分離到雞毒支原體，繼而在世界范圍內(nèi)迅速進(jìn)行傳播，目前很多國(guó)家都已經(jīng)有感染雞毒支原體病例的報(bào)道。中國(guó)國(guó)內(nèi)首次分離到MG是在1976 年，并在1984年之后造成了全國(guó)性傳播。目前，雞毒支原體在我國(guó)雞場(chǎng)中普遍存在，感染率很高、傳播的范圍也比較廣，同時(shí)凈化的難度較大。雞毒支原體的流行傳播造成全球養(yǎng)禽業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，也影響著養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前，我國(guó)部分地區(qū)雞群的雞毒支原體感染率為 50%～80%，而且呈現(xiàn)越來越高的趨勢(shì)。例如，青海省MG感染陽性率為51.08%，福建省MG感染陽性率達(dá)到47.22%，廣東省MG 平均感染陽性率為45%，上海地區(qū)蛋雞場(chǎng) MG 抗體平均陽性率也達(dá)到97.8%[1]。隨著家禽養(yǎng)殖業(yè)的不斷發(fā)展以及養(yǎng)殖設(shè)備設(shè)施自動(dòng)化、科技化、養(yǎng)殖規(guī)模擴(kuò)大化的不斷推進(jìn)，各養(yǎng)殖企業(yè)的雞群?jiǎn)挝幻娣e內(nèi)的飼養(yǎng)密度不斷提高，雞毒支原體引起雛雞慢性呼吸道疾病的發(fā)病率也越來越高，還會(huì)影響商品代的成活率、料肉比以及種雞的成活率、產(chǎn)蛋量、孵化性能等，對(duì)家禽業(yè)的發(fā)展危害更加突出。

目前針對(duì)雞毒支原體的防控體系主要為預(yù)防為主、防治結(jié)合的原則，對(duì)家禽養(yǎng)殖行業(yè)中的高代次種雞公司來說，如何完成MG的凈化工作、形成并維持陰性雞群是他們亟需解決的問題。隨著家禽業(yè)的不斷發(fā)展以及雞毒支原體病發(fā)病率的不斷升高，雞毒支原體的凈化工作對(duì)于禽業(yè)公司來說愈發(fā)重要與迫切。

2 雞毒支原體的凈化工作

因?yàn)殡u毒支原體病的傳播特性，感染雞群后會(huì)代代傳播、不易根除。對(duì)于高代次雞群，如純系、曾祖代、祖代雞群來說，MG的感染意味著數(shù)以千萬計(jì)的商品代雛雞可能存在MG污染。但是因?yàn)楦叽畏N雞的特殊性，完全進(jìn)行淘汰意味著種源與經(jīng)濟(jì)的高額損失，所以對(duì)污染雞群的凈化工作是現(xiàn)在家禽種業(yè)公司面臨的重大課題。MG的凈化工作可以從種蛋處理、孵化階段處理、育雛育成期階段篩選、建立全程生物安全體系進(jìn)行，從而獲得全陰性雞群。

2.1 種蛋的處理

2.1.1 種蛋熏蒸消毒 種蛋生產(chǎn)場(chǎng)區(qū)執(zhí)行嚴(yán)格熏蒸程序（3倍量熏蒸：42 mL甲醛+21 g高錳酸鉀，時(shí)間30 min）。

2.1.2 種蛋高溫處理 指將熏蒸好的種蛋使用孵化器進(jìn)行高溫處理，蛋內(nèi)溫度46 ℃，30 min。

高溫處理前準(zhǔn)備工作：首先，校準(zhǔn)孵化器溫濕度探頭，然后將蛋盤一一進(jìn)行百毒殺浸泡消毒，孵化機(jī)、蛋車以及孵化間進(jìn)行徹底沖刷，包括機(jī)器頂部、機(jī)器左右機(jī)器板都擦拭干凈，清水沖刷結(jié)束后用百毒殺或者立潔進(jìn)行沖刷消毒，沖刷結(jié)束后用高錳酸鉀和福爾馬林熏蒸消毒，空機(jī)3倍量，帶蛋1倍量?？諜C(jī)消毒，高：福=360 g：720 mL；帶蛋消毒，高：福=126 g：252 mL。

種蛋高溫處理過程：①將裝好種蛋的孵化蛋盤放置于蛋車上，推入蛋車準(zhǔn)備高溫處理，同時(shí)安排人對(duì)陰性蛋庫進(jìn)行噴霧消毒；②設(shè)定溫度為蛋內(nèi)溫度46 ℃進(jìn)行高溫處理；③待孵化器內(nèi)環(huán)境溫度達(dá)到30 ℃時(shí)，用盆放入孵化器內(nèi)適量甲醛+高錳酸鉀1倍量帶蛋熏蒸消毒25 min，完成熏蒸后將容器取出；④處理完畢后取出放置于消毒后的蛋庫（設(shè)置20 ℃），進(jìn)行冷卻備用。

2.2 孵化階段處理

將冷卻好的種蛋放入孵化器內(nèi)，面板調(diào)溫度為38 ℃，濕度60%，風(fēng)門為0，同樣在孵化器內(nèi)空氣溫度30 ℃時(shí)進(jìn)行帶蛋消毒（1倍量）；孵化過程按照常規(guī)孵化流程進(jìn)行管理控制即可；注意上孵、落盤、出雛過程管理：①盡量減少與其它品系種蛋、雛雞接觸，避免交叉污染；②出雛過程注意環(huán)境降塵，可間斷性噴灑對(duì)人沒有危害的消毒液，如衛(wèi)可（1：200）。

2.3 育雛育成場(chǎng)區(qū)凈化工作

2.3.1 空舍準(zhǔn)備工作 做好飼養(yǎng)場(chǎng)區(qū)的沖刷消毒工作，按部就班完成相關(guān)工作。

2.3.2 消毒工作 全場(chǎng)雞舍、功能間甲醛熏蒸消毒、大環(huán)境消毒液噴灑消毒后進(jìn)行采樣（舍內(nèi)外），確定MG是否殺滅徹底。

2.3.3 籠位安排 養(yǎng)殖場(chǎng)區(qū)根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)實(shí)際籠位數(shù)量與計(jì)劃接雛數(shù)量，接雞前提前完成雞舍籠號(hào)編碼安排?；\位安排原則：盡可能降低單籠飼養(yǎng)量。

2.3.4 藥物禁用 飼養(yǎng)過程中嚴(yán)禁使用對(duì)支原體有凈化作用的藥物。

2.3.5 日常飼養(yǎng)管理 為避免籠位間可能出現(xiàn)交叉污染，禁止進(jìn)行分群與調(diào)籠位工作。

2.3.6 采樣工作

2.3.6.1 材料準(zhǔn)備 棉簽（4周之前使用小棉簽）、離心管、標(biāo)簽紙、10 kg水桶（裝有配好的消毒藥）。

2.3.6.2 采樣方法 ①準(zhǔn)備好離心管與棉簽（小頭）；②每只雞一個(gè)棉簽頭，一人一手保定雞只，另一只手固定頭部并借力打開口腔，另一人用滅菌棉拭子在咽喉部上腭裂采樣，反復(fù)旋轉(zhuǎn)至少3圈，蘸取分泌物后立即放入離心管中，剪去露出的拭子桿部，蓋緊離心管蓋，做好標(biāo)記冷藏，盡快送檢。

2.3.6.3 注意事項(xiàng) ①根據(jù)每個(gè)籠飼養(yǎng)雞數(shù)制定合樣量（合樣檢測(cè)是為了加速檢測(cè)，一般3個(gè)合一個(gè)樣或5個(gè)合一個(gè)樣），先對(duì)籠具做好順序編號(hào)，比如1號(hào)籠8只雞，可以分2個(gè)離心管（1-1，1-2）放置采好樣的棉簽頭，同時(shí)做好標(biāo)記；②采樣過程中做好消毒工作，每個(gè)籠采樣結(jié)束需要對(duì)采集人員的手臂+手在消毒桶進(jìn)行浸泡消毒，注意消毒過程中避免消毒液沾染棉簽；③采樣對(duì)象雛雞周齡較小，動(dòng)作要輕柔。

2.3.6.4 樣品保存方法 冰柜零下20 ℃保存；樣品盡可能在24 h內(nèi)轉(zhuǎn)送研究院檢測(cè)。

2.3.6.5 異常情況（發(fā)現(xiàn)陽性）處理措施 ①異常雞只所在籠位的雞只全籠淘汰，淘汰雞只出舍前要全部處死，浸泡1：500百毒殺消毒，然后焚燒處理；②對(duì)陽性籠進(jìn)行百毒殺1：500全方位噴灑消毒，同時(shí)對(duì)該陽性籠具上下左右的籠具全部雞只再次采樣送檢，同時(shí)對(duì)籠具與雞只進(jìn)行百毒殺噴灑消毒；③在整個(gè)淘汰、采樣以及消毒過程中，操作人員要做好個(gè)人手與手臂的消毒工作，一籠一消毒。

2.3.6.6 浸泡焚燒流程 ①舍內(nèi)準(zhǔn)備直徑40～50 cm塑料桶用作浸泡消毒，將陽性雞浸入消毒液，然后裝入已消毒好的塑料袋扎口密封，每袋數(shù)量不宜過多，以剛好能進(jìn)入焚燒爐焚燒為準(zhǔn)；②焚燒：使用供暖期的鍋爐進(jìn)行直接焚燒（鍋爐工操作），禁止將已封口的塑料袋打開再焚燒，完畢后將涉及到的地面使用消毒液噴灑。若用場(chǎng)內(nèi)焚燒爐進(jìn)行焚燒，要避免死亡雞只暴露而造成污染。

2.3.7 場(chǎng)區(qū)日常防護(hù)消毒措施

2.3.7.1 入舍人員必須更換工作服，同時(shí)內(nèi)勤人員對(duì)工作服進(jìn)行集中浸泡消毒、清洗，每周2次并做好記錄，一般消毒選擇百毒殺（1：500）與衛(wèi)可（1：200）交替使用。

2.3.7.2 鑒于場(chǎng)區(qū)硬件條件有限，員工宿舍在養(yǎng)殖樓內(nèi)，進(jìn)入雞舍的人員必須再次腳踏消毒盆，手噴灑酒精消毒，同時(shí)更換舍內(nèi)工作服。

2.3.7.3 帶雞消毒可選用的消毒劑：衛(wèi)可（1：200）與百毒殺（1：500）交替使用；消毒頻率：隔天一次，另外在淘汰后當(dāng)天進(jìn)行全群帶雞消毒；包括消毒區(qū)域5層樓（4品系）全舍籠具、地面、墻壁、料槽以及雞群；消毒水量選擇：雞只消毒，1～12周使用500～600 mL/1000羽；其它區(qū)域正常消毒噴灑即可；糞盤要隔一天一換，并清洗、消毒。

2.3.7.4 場(chǎng)區(qū)做好日常生物安全工作，提升場(chǎng)區(qū)的生物安全等級(jí)，大環(huán)境每周消毒3次（立潔1：1 000，百毒殺1：500）；同時(shí)嚴(yán)格遵守常規(guī)隔離場(chǎng)區(qū)防疫控制制度，做好場(chǎng)區(qū)有害生物控制、進(jìn)出物資和人員的消毒工作等。

2.4 產(chǎn)蛋場(chǎng)凈化隔離工作

2.4.1 新轉(zhuǎn)入產(chǎn)蛋場(chǎng)的雞群進(jìn)行全群咽喉拭子檢測(cè)，做好個(gè)體記錄，對(duì)于異常的雞群及時(shí)進(jìn)行淘汰處理，異常雞處理注意事項(xiàng)參見育雛育成場(chǎng)處理注意事項(xiàng)，一般來說轉(zhuǎn)入產(chǎn)蛋場(chǎng)的雞群已完成MG凈化工作。

2.4.2 檢測(cè)無異常的雞群按照正常采樣程序進(jìn)行采樣即可，異常的雞群需要繼續(xù)進(jìn)行凈化工作。

2.4.3 日常工作按照常規(guī)生物安全防控工作要求執(zhí)行。

2.5 相關(guān)監(jiān)測(cè)工作

熒光定量PCR（Real-Time PCR），是一種使用熒光定量 PCR 擴(kuò)增裝置實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并進(jìn)行分析的方法。養(yǎng)殖企業(yè)可以通過對(duì)咽喉拭子進(jìn)行熒光定量PCR同時(shí)配合血清 ELISA抗體檢測(cè)監(jiān)控雞群健康狀態(tài)，對(duì)陽性感染的個(gè)體及時(shí)進(jìn)行清理，從而達(dá)到預(yù)警與篩選的目的。

2.6 MG凈化工作具體實(shí)例

某養(yǎng)殖企業(yè)高代次種雞建立陰性雞群過程淘汰比例以及采樣輪次見表1。

表1 某企業(yè)高代次種雞MG凈化淘汰情況

該批次經(jīng)過8輪采樣凈化后確認(rèn)達(dá)到全部陰性狀態(tài)，轉(zhuǎn)入產(chǎn)蛋場(chǎng)區(qū)進(jìn)行繼代生產(chǎn)后，后代經(jīng)過監(jiān)測(cè)全部為MG陰性，方可視為MG凈化成功。

2.7 凈化狀態(tài)的維持

凈化狀態(tài)的維持需要以高效完善的生物安全體系為基礎(chǔ)。需要場(chǎng)區(qū)加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，科學(xué)合理選擇相關(guān)疫苗建立抗體屏障；同時(shí)需要在孵化場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)、轉(zhuǎn)運(yùn)種蛋過程執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施，多部門形成“五位一體”聯(lián)合防疫體系，防止疾病在種蛋生產(chǎn)、運(yùn)輸、存放、孵化等各個(gè)環(huán)節(jié)中的傳播，同時(shí)做好場(chǎng)區(qū)雞群的凈化維持相關(guān)工作，從而達(dá)到維持雞群全陰性狀態(tài)。