羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用

張慶娥 李敏(通信作者) 周月云 董晶晶

224007 鹽城市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，江蘇鹽城

染色體病在臨床中較為常見，通常是先天性染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常(包括染色體片段缺失、重復(fù)和異位等)，新生兒發(fā)病后常伴多發(fā)畸形、智力低下等表現(xiàn)。染色體病會(huì)給胎兒及其家庭帶來較大影響，不利于胎兒健康和發(fā)育。通常染色體病可以通過產(chǎn)前檢查進(jìn)行篩查，避免新生兒出生后攜帶此病。研究發(fā)現(xiàn)，染色體病病情較輕時(shí)，胎兒沒有明顯表現(xiàn)，不易被發(fā)現(xiàn)，一旦病情發(fā)展嚴(yán)重，胎兒可能尚未娩出就會(huì)死亡，即使分娩成功，也會(huì)在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡[1-2]。染色體病篩查是產(chǎn)前檢查的重點(diǎn)內(nèi)容，臨床方法較多，如紅細(xì)胞滲透、血紅蛋白電泳等。染色體病的產(chǎn)前診斷是胎兒出生前，在子宮內(nèi)對(duì)胚胎的發(fā)育狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)診斷，分析染色體核型，辨別染色體病患兒[3-4]。羊膜穿刺術(shù)進(jìn)行染色體核型分析是預(yù)防和治療染色體疾病最經(jīng)濟(jì)可行的方法[5]。本研究探討羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用效果，報(bào)告如下。

資料與方法

選取2017年1月-2018年12月于鹽城市婦幼保健醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心進(jìn)行產(chǎn)前體檢孕婦503例為研究對(duì)象。初產(chǎn)婦383 例，經(jīng)產(chǎn)婦220 例；年齡20～46 歲，平均(31.46±1.87)歲；孕周18～24 周，平均(22.03±1.26)周；孕次1～4次，平均(1.38±0.31)次。本次研究通過醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①育齡期女性；②孕婦在接受檢查診斷和隨訪調(diào)查期間，意識(shí)清晰、自主配合；③孕婦均有產(chǎn)前診斷指征[6]；④孕婦臨床資料完整，無中途退出情況；⑤孕婦對(duì)本研究知情同意。

排除指標(biāo)：①合并惡性腫瘤者；②合并嚴(yán)重器質(zhì)性病變者；③依從性差者；④有羊膜腔穿刺禁忌證的高齡孕婦，如先兆流產(chǎn)、有感染征象、術(shù)前2次測(cè)量體溫(腋溫)＞37.2°C、有出血傾向(血小板≤70×109/L，凝血功能異常)、中央性前置胎盤、前置或低置胎盤有出血現(xiàn)象；⑤有妊娠合并癥及產(chǎn)科并發(fā)癥的孕婦[7]。

方法：①羊膜穿刺術(shù)前，完善孕婦基本情況，包括血常規(guī)、血型、凝血四項(xiàng)(凝血酶原時(shí)間、纖維蛋白原時(shí)間、活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶時(shí)間)、肝腎功能、乙肝兩對(duì)半檢查(乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒表面抗體、乙型肝炎病毒e 抗原、乙型肝炎病毒e抗體、乙型肝炎病毒核心抗體)、丙型肝炎抗體、艾滋病抗體、快速血清反應(yīng)素試驗(yàn)、梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)等多項(xiàng)檢查，結(jié)合產(chǎn)科超聲準(zhǔn)確了解孕齡、胎兒數(shù)量、羊水量、胎盤位置等，確保羊水穿刺成功。②對(duì)孕婦進(jìn)行羊水穿刺指導(dǎo)，指導(dǎo)孕婦排空膀胱，平躺于穿刺床上，雙手置于頭部?jī)蓚?cè)。彩色多普勒超聲常規(guī)檢查胎兒，確定穿刺部位、穿刺深度。確定針的角度和深度后，穿刺針以最快速度準(zhǔn)確穿過腹壁和子宮肌層進(jìn)入羊膜腔，拔出針芯。取羊水，控制量約2 mL，然后丟棄，另一注射器取羊水20 mL，并及時(shí)檢查。取針后，超聲再次觀察胎心率。抽取的羊水進(jìn)行離心，羊水中細(xì)胞進(jìn)行接種，按3∶1 的比例接種于Mc Coy's 5A 培養(yǎng)基和胎牛血清混合培養(yǎng)基中。③細(xì)胞原位培養(yǎng)，包括收集細(xì)胞、切片和G顯帶顯微鏡下核型分析。

觀察指標(biāo)：①觀察分析羊水細(xì)胞正常和異常核型，對(duì)異常核型進(jìn)行分類，主要包括染色體數(shù)目異常和染色體結(jié)構(gòu)異常。異常核型占比=異常核型例數(shù)/染色體結(jié)構(gòu)異常例數(shù)×100%。②觀察不同適應(yīng)證羊膜穿刺術(shù)染色體檢查結(jié)果，記錄唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)、無創(chuàng)胎兒DNA 高風(fēng)險(xiǎn)、高齡(預(yù)期年齡35歲)、B 超顯示多發(fā)畸形數(shù)目，陽性檢出率=不同適應(yīng)證羊膜穿刺術(shù)染色體異常例數(shù)/不同適應(yīng)證例數(shù)×100%。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件予以處理；計(jì)數(shù)資料以[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

羊水細(xì)胞異常染色體核型：對(duì)503 例孕婦進(jìn)行羊水穿刺，取足量羊水進(jìn)行羊水培養(yǎng)，檢出異常核型66例，染色體數(shù)目異常55 例，染色體結(jié)構(gòu)異常11 例。兩種異常類型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 羊水細(xì)胞異常染色體核型[n(%)]

不同適應(yīng)證羊膜穿刺術(shù)染色體檢查結(jié)果：唐氏篩查高風(fēng)險(xiǎn)70 例，異常4 例，陽性檢出率為5.71%；無創(chuàng)胎兒DNA 高風(fēng)險(xiǎn)85 例，異常例數(shù)38 例，陽性檢出率為44.71%；高齡171 例，異常例數(shù)12 例，陽性檢出率為7.02%；B 超異常45 例，異常例數(shù)4 例，陽性檢出率為8.89%；其他132 例，異常例數(shù)8 例，陽性檢出率為6.06%。見表2。

表2 不同適應(yīng)證羊膜穿刺術(shù)染色體檢查結(jié)果分析[n(%)]

討 論

新生兒缺陷是指新生兒出生時(shí)存在的缺陷，包括身體結(jié)構(gòu)和功能的異常。新生兒缺陷種類較多，如先天畸形、先天性代謝病、先天性智力低下等，誘發(fā)因素主要包括遺傳因素和環(huán)境因素，最常見的遺傳因素是染色體異常，積極采取有效措施預(yù)防和治療，才能實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育[8-9]。關(guān)于胎兒染色體病的檢查診斷是臨床研究中的重點(diǎn)內(nèi)容，針對(duì)孕婦進(jìn)行產(chǎn)前檢查，聯(lián)合應(yīng)用血紅蛋白電泳法、羊水穿刺等可以得到較為準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。有學(xué)者提出，聯(lián)合應(yīng)用核型分析檢查診斷，可有效分析胎兒染色體情況，檢測(cè)胎兒染色體是否存在異常，還可聯(lián)合影像學(xué)成像結(jié)果進(jìn)一步觀察，判斷胎兒是否存在染色體疾病[10-11]。

羊水穿刺術(shù)提取羊水細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析是產(chǎn)科中常見的優(yōu)生檢查方法，利用率相對(duì)較高，可以起到產(chǎn)前診斷的作用。羊水穿刺提取羊水細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析操作相對(duì)簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確率高，并發(fā)癥少[12]。在超聲穿刺的有效引導(dǎo)下，穿刺效果良好，無流產(chǎn)、感染、胎兒丟失等并發(fā)癥，充分保障了安全性。本研究結(jié)果顯示，共有66例胎兒屬于異常核型，異常率為13.12%，遠(yuǎn)高于相關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，可能與樣本選取數(shù)量、地區(qū)差異等因素有關(guān)，亦與無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)篩查后羊膜穿刺術(shù)提高陽性率有關(guān)[13]。無創(chuàng)產(chǎn)前DNA檢測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)、B超異常、高齡等產(chǎn)前診斷指征的孕婦更易出現(xiàn)羊水細(xì)胞染色體核型異常，應(yīng)加強(qiáng)上述產(chǎn)前診斷指征孕婦檢查，以便指導(dǎo)新生兒染色體病的防治工作。但無創(chuàng)產(chǎn)前DNA 檢測(cè)目前僅是接近于診斷的篩查，具有假陽性和假陰性。建議具有產(chǎn)前診斷指征的孕婦，需慎重考慮，行羊水穿刺胎兒染色體核型分析，避免胎兒異常漏診[14]。

核型分析是細(xì)胞遺傳學(xué)的金標(biāo)準(zhǔn)，在產(chǎn)前診斷中占有一定地位，但也有其不足之處。常規(guī)核型分析能檢查出＞10 Mb 的異常，目前的高分辨核型，可檢出＞5 Mb 的異常，需要培養(yǎng)、分析，報(bào)告周期長(zhǎng)，有培養(yǎng)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。產(chǎn)前診斷技術(shù)近年來發(fā)展迅猛，更新快，已從傳統(tǒng)的核型分析到染色體微陣列技術(shù)及全外顯子技術(shù)。染色體微陣列技術(shù)可在全基因組內(nèi)檢測(cè)100 Kb 的微重復(fù)和微缺失，不需要培養(yǎng)，出報(bào)告周期短，在產(chǎn)前診斷中應(yīng)用越來越重要，特別是B超提示胎兒異常等染色體微陣列技術(shù)尤為重要[15]。

綜上所述，羊水染色體核型分析在產(chǎn)前診斷中應(yīng)用，可有效降低缺陷兒的出生率，提高生育質(zhì)量，應(yīng)用價(jià)值較高。