多指標(biāo)綜合評(píng)分法優(yōu)選蘇木提取工藝

★ 周慧慧 韓康寧 劉云龍 劉文靜 歐濤 秦冰倩 王小平,2（.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 陜西 咸陽(yáng) 72046；2.陜西省中藥基礎(chǔ)與新藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 陜西 咸陽(yáng) 72046）

蘇木別名蘇枋木，始載于《唐本草》，為豆科云實(shí)屬植物蘇木Caesalpinia sappanL.的心材［1］，性平，味甘、咸，歸心、肝、脾經(jīng)，具有活血祛瘀、消腫止痛、舒筋通絡(luò)之功效［2-4］。有研究表明，原蘇木素B、巴西蘇木素是蘇木的有效成分，不僅具有活血化瘀、消炎止痛的作用，還對(duì)肺癌、乳腺癌、胃癌等多種惡性腫瘤具有顯著抑制作用［5-12］，故本實(shí)驗(yàn)選擇原蘇木素B、巴西蘇木素和出膏率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選蘇木的提取工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士Mettler Toledo）；戴安Ultimate 3000全自動(dòng)高效液相色譜儀（賽默飛世爾上海儀器有限公司）；101-2型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科維永興儀器有限公司）；Direct-Q 3UV 純化水機(jī)（默克密理博）；KQ-300VDE型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HH-2型電熱恒溫水浴鍋（北京科維永興儀器有限公司）。

1.2 藥材和試劑

蘇木藥材購(gòu)自陜西中醫(yī)藥大學(xué)校醫(yī)院，經(jīng)檢驗(yàn)為蘇木真品；巴西蘇木素對(duì)照品（批號(hào)：B20024，含量≥98%）、原蘇木素B對(duì)照品（批號(hào)：B21622，含量≥98%）均購(gòu)自上海源葉科技有限公司；甲醇、乙腈（色譜純）均購(gòu)自美國(guó)默克公司；超純水（自制）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝優(yōu)選

2.1.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)精密稱定蘇木藥材粗粉10 g，以溶劑用量、提取次數(shù)、溶劑濃度、提取時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，按照L9（34）正交試驗(yàn)安排表的因素水平組合進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平表見(jiàn)表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.1.2 多指標(biāo)綜合評(píng)分方法建立本實(shí)驗(yàn)以各成分的平均含量及出膏率作為權(quán)重系數(shù)為依據(jù)，將原蘇木素B、巴西蘇木素的權(quán)重系數(shù)分別設(shè)為0.4，出膏率的權(quán)重系數(shù)設(shè)為0.2。綜合評(píng)分=（原蘇木素B含量÷原蘇木素 B最高含量）×0.4×100+（各組合中巴西蘇木素含量÷巴西蘇木素最高含量）×0.4×100 +（各組合中出膏率÷出膏率最高值）×0.2×100［13-16］。

2.2 原蘇木素B、巴西蘇木素含量的測(cè)定

色譜柱為Thermo Hypersil GOLD C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（A）∶水（B），梯 度 洗 脫，0～5 min 80% B，5～25 min 80%～60% B，25～30 min 60%～80% B；柱溫25 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；流速1 mL/min，進(jìn)樣量10 μL。

分別精密稱取巴西蘇木素1.24 mg，原蘇木素B 2.54 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得儲(chǔ)備液。精密吸取上述貯備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液1，2，3，5，20 μL 注入高效液相色譜儀，記錄各色譜峰的峰面積，以進(jìn)樣量（ng）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。原蘇木素B、巴西蘇木素回歸方程分別為：Y= 0.006 5X-0.096 8，（r=0.999 8），Y= 0.007 8X-0.095 7，（r=0.999 8），表明兩成分分別在25.4～508. 0 ng、12.4～248.0 ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 浸出率的測(cè)定

精密移取提取液25 mL，置于恒重的蒸發(fā)皿中，水浴加熱，再置于105 ℃烘箱中干燥3 h，取出放至室溫，迅速精密稱定，計(jì)算浸出率（%）。

2.4 最佳工藝的確定

按正交試驗(yàn)安排表的因素水平組合進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行多指標(biāo)綜合評(píng)分。結(jié)果見(jiàn)表2、表3。

表2 蘇木正交試驗(yàn)安排與結(jié)果

表3 方差分析

2.4.1 結(jié)果分析通過(guò)對(duì)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行直觀分析，結(jié)果表明各因素對(duì)提取的影響程度為A＞C＞B＞D，即乙醇濃度＞提取次數(shù)＞料液比＞提取時(shí)間；方差分析結(jié)果表明，除D因素外，其余因素均具有顯著性。綜合分析初步選定提取工藝為A2B3C1D2，即以12倍量濃度為55%的乙醇回流提取1次，提取時(shí)間120 min。

鑒于正交實(shí)驗(yàn)中乙醇濃度設(shè)計(jì)參數(shù)過(guò)寬，因此根據(jù)結(jié)果進(jìn)一步對(duì)乙醇濃度進(jìn)行考察。

2.4.2 乙醇濃度的考察取蘇木10 g，精密稱定，分別以35%、55%和75%乙醇進(jìn)行回流提取，以12倍量乙醇提取1次，每次120 min。結(jié)果顯示當(dāng)乙醇濃度為35%時(shí)，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（14.55±0.08）mg/g、（5.43±0.03）mg/g，出 膏 率為（9.40±0.11）%；當(dāng)乙醇濃度為55%時(shí)，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（20.87±0.17）mg/g、（6.18±0.06）mg/g，出膏率為（12.35±0.03）%；當(dāng)乙醇濃度為75%時(shí)，原蘇木素B、巴西蘇木素的含量分別為（9.13±0.05）mg/g、（4.58±0.13）mg/g，出膏率為（9.95±0.07）%。因此，綜合分析選定最佳提取工藝為12倍量濃度為55%的乙醇回流提取1次，提取時(shí)間120 min。

3 討論

蘇木主要含有巴西蘇木素類、原蘇木素類、高異黃酮類以及査爾酮類等有效成分［17-21］，以單一指標(biāo)成分進(jìn)行工藝優(yōu)選與中藥多組分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)不相符合［22］，故本試驗(yàn)以原蘇木素B、巴西蘇木素的含量以及浸出率作為指標(biāo)，采用多指標(biāo)綜合評(píng)分進(jìn)行工藝優(yōu)選。在方差分析表中，為了估價(jià)試驗(yàn)誤差和方差分析，若無(wú)空白列，則選擇離差平方和中最小者做近似估計(jì)，雖然D項(xiàng)值略大，但是與其他各項(xiàng)水平值相比，還是有很大差異，故以D項(xiàng)（提取時(shí)間）做近似估計(jì)。權(quán)重系數(shù)的設(shè)定以各成分在質(zhì)量評(píng)價(jià)中出現(xiàn)的頻次以及藥理活性作為主要依據(jù)［23-26］。該提取工藝科學(xué)、簡(jiǎn)單、合理、可行，為后期蘇木藥材的開(kāi)發(fā)利用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。