• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    ALKBH5對紫外線誘導(dǎo)的晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷模型中DNA損傷修復(fù)的影響△

    2022-11-20 13:00:12李鵬飛鮑思潔王從玉王思文孫誠浩康麗華管懷進(jìn)
    眼科新進(jìn)展 2022年11期
    關(guān)鍵詞:甲基化酶晶狀體誘導(dǎo)

    李鵬飛 鮑思潔 王從玉 王思文 孫誠浩 康麗華 管懷進(jìn)

    已有研究發(fā)現(xiàn),在紫外線照射引起的DNA損傷位點(diǎn)處發(fā)生N6-甲基腺苷(m6A)修飾的聚集,通過多種機(jī)制促進(jìn)DNA修復(fù),對抗紫外線照射引起的損傷[8-9]。m6A是真核生物mRNA中最豐富的內(nèi)部表觀遺傳學(xué)修飾,參與mRNA代謝全部環(huán)節(jié),通過調(diào)節(jié)RNA穩(wěn)定性和翻譯調(diào)節(jié)基因表達(dá),在各種生物過程中發(fā)揮重要作用[10-12]。m6A修飾過程受到m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(MTC)、去甲基化酶和m6A識別酶的動態(tài)調(diào)控[13-14]。其中,ALKBH5作為去甲基化酶,在氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)中發(fā)揮重要作用[15-16]。雖然已有研究發(fā)現(xiàn),ALKBH5在皮質(zhì)型ARC的LEC中的表達(dá)顯著上調(diào),但是其在ARC發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制尚不清楚[17]。

    本研究中,我們通過對LEC進(jìn)行紫外線B(UVB)照射構(gòu)建氧化損傷模型,探究m6A去甲基化酶ALKBH5在氧化損傷模型中對損傷性DNA修復(fù)的影響,為ARC的防治提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料選取2021年4月至10月在南通大學(xué)附屬醫(yī)院眼科住院并行超聲乳化白內(nèi)障吸除術(shù)的ARC患者8例8眼為ARC組,選擇同期住院并接受透明晶狀體摘除術(shù)的黃斑前膜患者8例8眼為對照組,收集所有患者的臨床資料及晶狀體前囊膜,所有患者的晶狀體混濁程度均根據(jù)LOCSⅢ分級系統(tǒng)進(jìn)行分級。ARC組患者排除標(biāo)準(zhǔn):(1)并發(fā)性、外傷性、代謝性、藥物及中毒性白內(nèi)障等其他類型的白內(nèi)障;(2)雙眼中有一眼為無晶狀體眼;(3)合并高血壓、糖尿病或自身免疫病。對照組患者排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并高度近視、葡萄膜炎或青光眼等眼部疾?。?2)合并高血壓、糖尿病或其他全身性疾病。ARC組患者男5例、女3例,年齡為50~80(66.1±3.4)歲,對照組患者男4例、女4例,年齡為50~80(65.6±2.7)歲,兩組患者間性別和年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.94、0.18)。本研究通過南通大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會審批(倫理審查批號:2021-L091),所有患者均簽署知情同意書。

    1.2 材料人LEC細(xì)胞系SRA01/04細(xì)胞購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究所。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶均購自美國Gibco公司;手持式紫外線檢測燈購自中國光豪分析儀器公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自美國Thermo Scientific公司,Trizol試劑盒購自美國Invitrogen公司,引物購自上海生工生物工程股份有限公司;靶向ALKBH5設(shè)計(jì)的siRNAs購自中國銳博生物科技有限公司;CCK-8試劑盒購自日本同仁化學(xué)研究所;15A3抗體購自英國Abcam公司;GAPDH抗體、熒光二抗(辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔和山羊抗鼠IgG)均購自中國ABclonal公司。

    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和UVB處理將SRA01/04細(xì)胞復(fù)蘇后,加入完全培養(yǎng)基(含體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清和10 g·L-1青鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基),并置于 37 ℃、含體積分?jǐn)?shù)5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞融合度達(dá)80%左右時(shí),用Hanks液清洗細(xì)胞2次,加入適量的無菌PBS,置于手持式紫外線檢測燈(波長為275~400 nm ,峰值為310 nm )下30 cm處照射。UVB照射時(shí)間梯度為0 min、10 min、15 min、30 min、45 min。照射后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.4 qRT-PCR檢測根據(jù)Trizol試劑盒的步驟提取ARC組(n=3)和對照組(n=3)患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中的總RNA。按照說明書行qRT-PCR檢測,以GAPDH為內(nèi)參,使用2-△△Ct分析,實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。GAPDH上游引物為5’-TGAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGT-3’,下游引物為5’-CATGTGGGCCATGAGGTCC ACCAC-3’。ALKBH5上游引物為5’-CCCGAGGGCTTCGTCAACA-3’,下游引物為5’-CGACACCCGAATAGGCTTGA-3’。同樣方法檢測經(jīng)不同方法處理后SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和11個(gè)DNA氧化損傷修復(fù)基因(ODRGs)的表達(dá),其中11個(gè)ODRGs的引物序列見表1。

    表1 11個(gè)ODRGs的引物序列

    1.5 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測取ARC組(n=5)和對照組(n=5)患者的晶狀體前囊膜,提取上皮細(xì)胞,加入蛋白裂解液冰上裂解,提取蛋白上清,于125 g·L-1的凝膠上進(jìn)行電泳(電壓80 V轉(zhuǎn)120 V)分離蛋白;采用濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜(電流250 mA,2 h);采用5 g·L-1脫脂奶粉室溫下封閉2 h;參照說明書將稀釋好的目的一抗(ALKBH5稀釋度為11000;GAPDH稀釋度為16000)加入PVDF膜中,置于4 ℃冰箱孵育過夜;次日,用TBST漂洗,然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔(二抗)IgG在室溫下孵育2 h;最后,TBST洗滌后加入顯影劑,置于暗室內(nèi)曝光顯影。以GAPDH為內(nèi)參。同樣方法檢測經(jīng)不同方法處理后SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá)。

    1.6 細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染檢測siALKBH5轉(zhuǎn)染效率時(shí),實(shí)驗(yàn)分為轉(zhuǎn)染siALKBH5組(針對ALKBH5 mRNA的三個(gè)不同區(qū)域設(shè)計(jì)靶向敲低ALKBH5的siRNA,命名為siALKBH5#1、siALKBH5#2和siALKBH5#3)、轉(zhuǎn)染對照siNC組(轉(zhuǎn)染對照siNC)和Control組(未經(jīng)任何處理)。檢測ALKBH5在細(xì)胞氧化損傷模型中的功能時(shí),實(shí)驗(yàn)分為Control組(未經(jīng)任何處理)、UVB組(采用UVB照射)、UVB+siNC組(轉(zhuǎn)染對照siNC,同時(shí)采用UVB照射處理)以及UVB+siALKBH5#3組(轉(zhuǎn)染siALKBH5#3,同時(shí)采用UVB照射處理)。轉(zhuǎn)染方法:6孔板每孔中加入Lipofectamine 3000和siRNA充分混勻后室溫孵育15 min,之后,置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h后,進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    那什么時(shí)間是最佳時(shí)間段呢?根據(jù)數(shù)據(jù)分析顯示,這一類客戶他們通常在晚上7~8點(diǎn)鐘是比較閑的,因?yàn)樗麄冊诿β档墓ぷ骱蠼K于可以在家放松緊張了一天的神經(jīng)。這時(shí)候如果你給他們電話,他們都會和你用心交談。

    1.7 CCK-8法檢測細(xì)胞活力CCK-8法檢測Control組、UVB組、UVB+siNC組以及UVB+siALKBH5#3組細(xì)胞活力,具體方法為:將SRA01/04細(xì)胞以每孔1×104個(gè)的密度接種于96孔板,每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔,培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h;分組處理后棄培養(yǎng)基,向每孔加入100 μL完全培養(yǎng)基和10 μL CCK-8溶液;繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中孵育1~2 h(操作過程中注意避光);使用酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度。

    1.8 免疫熒光染色檢測DNA氧化損傷UVB+siNC組和UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞分組處理后,PBS清洗,40 g·L-1多聚甲醛室溫固定30 min,加入30 g·L-1牛血清白蛋白和體積分?jǐn)?shù)0.5% Triton X-100溶液,室溫封閉2 h;依據(jù)15A3抗體(15A3抗體可檢測到發(fā)生損傷DNA的標(biāo)志物8-oxoG,而8-oxoG為ALKBH5修復(fù)損傷DNA的結(jié)合底物[8])說明書,使用10 g·L-1牛血清白蛋白配一抗反應(yīng)液,4 ℃孵育過夜;次日取出洗滌后,加入熒光二抗,室溫下孵育2 h(操作過程中注意避光);之后,Hoechst(110 000)孵育8 min染細(xì)胞核(操作過程中注意避光),熒光顯微鏡下避光觀察、拍照。

    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Graphpad prism 8統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。多組間比較均采用單因素方差分析,兩樣本間比較采用t檢驗(yàn)。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。檢驗(yàn)水準(zhǔn):α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 ARC患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)qRT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,ARC組患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)(圖1)。

    圖1 ARC組和對照組患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中ALKBH5的mRNA和蛋白表達(dá) A:qRT-PCR檢測ALKBH5 mRNA表達(dá);B:免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測ALKBH5蛋白表達(dá)。與對照組相比,****P<0.000 1。

    2.2 UVB照射對LEC中ALKBH5表達(dá)的影響

    2.2.1 UVB照射對LEC中ALKBH5 mRNA表達(dá)的影響qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與UVB照射0 min時(shí)相比,SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA表達(dá)量在UVB照射10 min時(shí)上升,在UVB照射30 min和45 min時(shí)下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05);UVB照射15 min與0 min時(shí)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中,UVB照射10 min時(shí)ALKBH5 mRNA的表達(dá)量最高(圖2)。

    圖2 qRT-PCR檢測UVB照射不同時(shí)間SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA表達(dá) 與照射0 min時(shí)相比,*P<0.05,****P<0.000 1。

    2.2.2 UVB照射對LEC中ALKBH5蛋白表達(dá)的影響免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示,在UVB以時(shí)間梯度照射SRA01/04細(xì)胞后,SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5的蛋白表達(dá)量呈上升后下降趨勢。與UVB照射0 min時(shí)相比,SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá)量在UVB照射10 min時(shí)和15 min時(shí)上升,在UVB照射45 min時(shí)下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05);UVB照射30 min與照射0 min時(shí)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。其中,UVB照射10 min時(shí)ALKBH5的蛋白表達(dá)量升高最明顯(圖3)。因此,本實(shí)驗(yàn)細(xì)胞UVB照射氧化損傷模型的構(gòu)建均采用輻射強(qiáng)度為0.09 mW·cm-2的手持式紫外線檢測燈照射SRA01/04細(xì)胞10 min。

    圖3 免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測UVB照射不同時(shí)間SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5蛋白表達(dá) 與照射0 min時(shí)相比,**P<0.01,***P<0.001。

    2.3 ALKBH5敲降模型驗(yàn)證qRT-PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比,轉(zhuǎn)染siALKBH5#3后,SRA01/04細(xì)胞中ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)均顯著降低(均為P<0.001)(圖4)。因此,選取siALKBH5#3用于后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)的ALKBH5敲降模型。

    圖4 不同siALKBH5轉(zhuǎn)染SRA01/04細(xì)胞后mRNA和蛋白水平的敲降效率驗(yàn)證 與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比,***P<0.001,****P<0.000 1。

    2.4 敲降A(chǔ)LKBH5對LEC狀態(tài)的影響

    2.4.1 ALKBH5轉(zhuǎn)染后細(xì)胞活力檢測CCK-8法檢測結(jié)果顯示,與Control組相比,UVB和UVB+siNC組SRA01/04細(xì)胞活力均明顯降低(均為P<0.000 1);與UVB+ siNC組和UVB組相比,UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞活力明顯降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.000 1)(圖5)。

    圖5 siALKBH5#3轉(zhuǎn)染對SRA01/04細(xì)胞活力的影響 與Control組相比,****P<0.000 1;與UVB組和UVB+siNC組相比,####P<0.000 1。

    2.4.2 ALKBH5敲降后細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷程度變化免疫熒光染色檢測結(jié)果顯示,與UVB+siNC組(熒光強(qiáng)度為33.8±2.7)相比,UVB+siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞的15A3染色(熒光強(qiáng)度為68.0±6.0)明顯增多,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.39,P<0.000 1)(圖6)。

    圖6 siALKBH5#3轉(zhuǎn)染對SRA01/04細(xì)胞DNA氧化損傷的影響

    2.5 敲降A(chǔ)LKBH5對LEC的ODRGs表達(dá)的影響qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比,轉(zhuǎn)染siALKBH5#3組SRA01/04細(xì)胞中TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6mRNA的表達(dá)均顯著升高,DCLRE1AmRNA的表達(dá)顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.01);兩組間MGMT和MRE11AmRNA的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)(圖7)。

    圖7 敲降A(chǔ)LKBH5對SRA01/04細(xì)胞ODRGs表達(dá)的影響 與轉(zhuǎn)染對照siNC組相比,**P<0.01,****P<0.000 1。

    3 討論

    LEC是晶狀體中唯一的細(xì)胞類型,在維持晶狀體內(nèi)部環(huán)境的穩(wěn)態(tài)以及維持晶狀體光學(xué)透明度方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[18]。LEC內(nèi)的氧化應(yīng)激誘發(fā)因素主要包括外源性紫外線和內(nèi)源性的線粒體呼吸鏈所產(chǎn)生的活性氧(ROS),當(dāng)ROS的產(chǎn)生超過細(xì)胞自身生理性的抗氧化防御機(jī)制時(shí),就會導(dǎo)致氧化和抗氧化失衡,從而引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)[19-21]。有研究顯示,氧化應(yīng)激可導(dǎo)致每個(gè)生物體每天大約104個(gè)DNA發(fā)生氧化損傷[22]。氧化損傷往往是不可避免的,因此,在機(jī)制方面針對DNA損傷修復(fù)調(diào)控的研究在ARC的防治中具有重要意義。

    m6A是發(fā)生在腺苷N6位的甲基化,在真核生物的mRNA中廣泛分布,調(diào)控多種生物活動過程,包括轉(zhuǎn)錄、翻譯、干細(xì)胞的維持和分化以及腫瘤的惡化等[23-25]。也有研究發(fā)現(xiàn),在氧化應(yīng)激條件下可以通過多種機(jī)制調(diào)節(jié)m6A修飾水平,促進(jìn)DNA修復(fù),維持基因穩(wěn)定性[8,16]。Xiang等[8]研究發(fā)現(xiàn),紫外線誘導(dǎo)的DNA損傷能特異性觸發(fā)m6A甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3在DNA損傷位點(diǎn)的瞬時(shí)募集,促進(jìn)m6A RNA水平全面升高,進(jìn)而誘導(dǎo)與核苷酸切除修復(fù)和跨損傷合成有關(guān)的 DNA 聚合酶κ(Pol κ)定位DNA損傷位點(diǎn),參與損傷DNA的修復(fù)。Yu等[16]研究發(fā)現(xiàn),在ROS誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激過程中,ROS通過激活ERK/JNK信號通路促進(jìn)m6A去甲基化酶ALKBH5 SUMO化,抑制ALKBH5活性,誘導(dǎo)mRNA m6A修飾,從而提高氧化修復(fù)基因的穩(wěn)定性,促進(jìn)DNA修復(fù)過程。所以,m6A可以通過響應(yīng)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的DNA損傷來調(diào)節(jié)DNA修復(fù),在此過程中m6A調(diào)節(jié)酶起到了重要的調(diào)控作用。

    m6A調(diào)節(jié)酶可分為3種類型,共同參與m6A動態(tài)可逆的調(diào)控過程,即m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物(MTC),包括METTL3、METTL14、WTAP等,負(fù)責(zé)催化m6A;m6A去甲基化酶,包括FTO、ALKBH5,負(fù)責(zé)將m6A刪除;m6A識別酶,包括 YT521-B 同源域蛋白家族(YTHDF1/2/3 和 YTHDC1/2)等[21],負(fù)責(zé)特異性識別m6A修飾位點(diǎn)并與之結(jié)合[26]。本研究通過對比ARC組和對照組患者晶狀體前囊膜樣本,發(fā)現(xiàn)m6A去甲基化酶ALKBH5在ARC患者晶狀體前囊膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)顯著升高,這也一定程度上提示了m6A水平的改變。另外,在采用UVB以時(shí)間梯度照射LEC構(gòu)建的氧化損傷模型中,發(fā)現(xiàn)在UVB照射10 min后,ALKBH5 mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著上升。因此,我們推測m6A去甲基化酶ALKBH5在LEC的氧化損傷過程中可能發(fā)揮著重要調(diào)控作用。

    為了進(jìn)一步探究ALKBH5在UVB誘導(dǎo)的LEC氧化損傷模型中的功能,本研究首先利用靶向ALKBH5的小干擾RNA(siRNA)對其進(jìn)行了敲降實(shí)驗(yàn),然后比較了各組中的細(xì)胞活力改變和DNA損傷情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),同樣經(jīng)過UVB照射10 min,敲降A(chǔ)LKBH5的LEC與未處理組和干擾組相比細(xì)胞活力更差;15A3熒光染色結(jié)果也同樣提示,遭受相同程度的UVB照射,敲降A(chǔ)LKBH5的細(xì)胞更易發(fā)生DNA損傷。因此,我們可以確定ALKBH5在LEC響應(yīng)氧化應(yīng)激損傷的過程中起到了保護(hù)作用,可對抗由UVB照射誘導(dǎo)的DNA損傷,具體機(jī)制尚不明確,仍然有待深入研究。

    在DNA損傷修復(fù)過程中,首先檢查點(diǎn)激酶CHK1和CHK2被激活,然后啟動細(xì)胞周期檢查點(diǎn),從而引起細(xì)胞周期停滯和DNA修復(fù)[27]。DNA修復(fù)主要包括直接修復(fù)、堿基切除修復(fù)、核苷酸切除修復(fù)、錯(cuò)配修復(fù)、單鏈斷裂修復(fù)以及雙鏈斷裂修復(fù)等途徑[28]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),ALKBH5能調(diào)控ODRGs的表達(dá)[16,29-30]。課題組前期通過微陣列分析篩選和qRT-PCR檢測驗(yàn)證了96個(gè)ODRGs,發(fā)現(xiàn)了在ARC和對照患者樣本中顯著差異表達(dá)的11個(gè)ODRGs,這些差異表達(dá)的ODRGs在DNA修復(fù)途徑中發(fā)揮不同功能,促進(jìn)DNA的損傷修復(fù)——LIG1、MGMT、SMUG1參與堿基切除修復(fù),DCLRE1A、RPA2參與核苷酸切除修復(fù),TREX1、MSH2、MSH3參與錯(cuò)配修復(fù),F(xiàn)ANCD2參與同源重組,MRE11A、XRCC6參與雙鏈斷裂修復(fù)[31]。對此,我們在LEC中靶向ALKBH5進(jìn)行敲低,觀察這些ODRGs的表達(dá)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn),TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6mRNA的表達(dá)在ALKBH5敲降后均顯著升高,而DCLRE1A mRNA的表達(dá)顯著降低,MGMT和MRE11AmRNA的表達(dá)則未見明顯差異,表明敲降A(chǔ)LKBH5后,細(xì)胞內(nèi)ODRGs的表達(dá)明顯改變。其中,表達(dá)升高最為顯著的FANCD2,在DNA損傷反應(yīng)的早期階段可發(fā)揮信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用被ATM磷酸化,從而觸發(fā)細(xì)胞周期停滯[32],同時(shí)還作為與其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路協(xié)同作用的檢查點(diǎn)機(jī)制的中心,在及時(shí)修復(fù)受損DNA中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[33]。此外,作為哺乳動物細(xì)胞中重要的3’-5’ DNA核酸外切酶,TREX1除了能優(yōu)先選擇錯(cuò)配的核苷酸,參與錯(cuò)配修復(fù)外[34],還可通過降解細(xì)胞周期S期出現(xiàn)的單鏈DNA,阻止慢性ATM依賴性檢查點(diǎn)的激活[35],多階段促進(jìn)DNA損傷修復(fù)。

    綜上所述,ALKBH5在ARC患者以及UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷模型中表達(dá)升高。在UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化損傷模型中靶向敲降A(chǔ)LKBH5,可導(dǎo)致細(xì)胞活力下降以及DNA損傷程度加重,同時(shí)ODRGs表達(dá)升高,促進(jìn)DNA損傷修復(fù)。而在ARC患者中,ALKBH5表達(dá)的顯著升高也意味著ODRGs的表達(dá)受到抑制,從而無法對LEC中長期累積的DNA損傷進(jìn)行及時(shí)修復(fù),最終導(dǎo)致ARC的發(fā)生。因此,我們的結(jié)果證實(shí)了m6A去甲基化酶ALKBH5在UVB誘導(dǎo)的LEC氧化損傷模型中誘導(dǎo)性表達(dá)上升,敲降A(chǔ)LKBH5可影響細(xì)胞內(nèi)ODRGs表達(dá)變化,參與調(diào)控LEC內(nèi)損傷DNA的修復(fù),阻止ARC的發(fā)生。

    猜你喜歡
    甲基化酶晶狀體誘導(dǎo)
    齊次核誘導(dǎo)的p進(jìn)制積分算子及其應(yīng)用
    外傷性晶狀體半脫位的CT 表現(xiàn)
    同角三角函數(shù)關(guān)系及誘導(dǎo)公式
    玻璃體切除聯(lián)合晶狀體超聲粉碎在合并晶狀體脫位眼外傷中的應(yīng)用
    過表達(dá)H3K9me3去甲基化酶對豬克隆胚胎體外發(fā)育效率的影響(內(nèi)文第 96 ~ 101 頁)圖版
    續(xù)斷水提液誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞的凋亡
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:52
    大型誘導(dǎo)標(biāo)在隧道夜間照明中的應(yīng)用
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    人工晶狀體鞏膜縫線固定術(shù)矯正兒童玻璃體切割術(shù)后無晶狀體眼療效分析
    有晶狀體眼ICL植入矯正高度近視
    亚洲五月天丁香| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲人成电影免费在线| h日本视频在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 成人无遮挡网站| 欧美乱妇无乱码| 桃色一区二区三区在线观看| 日本在线视频免费播放| 久久久久免费精品人妻一区二区| 波野结衣二区三区在线 | 亚洲av免费在线观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 老司机福利观看| 人人妻人人看人人澡| 国产视频一区二区在线看| 亚洲真实伦在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 国产精华一区二区三区| 亚洲不卡免费看| 9191精品国产免费久久| 波多野结衣高清无吗| 欧美午夜高清在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 99riav亚洲国产免费| 免费搜索国产男女视频| 女人被狂操c到高潮| 久99久视频精品免费| 欧美一级毛片孕妇| 欧美激情久久久久久爽电影| ponron亚洲| 男女午夜视频在线观看| 极品教师在线免费播放| bbb黄色大片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 又紧又爽又黄一区二区| 村上凉子中文字幕在线| 国产一区二区激情短视频| 亚洲五月天丁香| 91麻豆av在线| 国产毛片a区久久久久| 97碰自拍视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 免费搜索国产男女视频| 日本在线视频免费播放| 国产免费男女视频| 日本与韩国留学比较| 淫秽高清视频在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产成人av激情在线播放| 国产熟女xx| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 丁香六月欧美| h日本视频在线播放| 无限看片的www在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 在线观看一区二区三区| 在线国产一区二区在线| 91麻豆av在线| e午夜精品久久久久久久| 午夜精品久久久久久毛片777| 黄色片一级片一级黄色片| 欧美色视频一区免费| 十八禁人妻一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 麻豆成人午夜福利视频| www.www免费av| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久久久大精品| 在线观看免费午夜福利视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 1000部很黄的大片| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产成+人综合+亚洲专区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 乱人视频在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 色老头精品视频在线观看| 亚洲国产精品999在线| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲欧美日韩高清专用| av专区在线播放| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 欧美性感艳星| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 一级毛片高清免费大全| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品免费久久久久久久清纯| svipshipincom国产片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 久久中文看片网| 成人无遮挡网站| www.熟女人妻精品国产| 一个人看的www免费观看视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产97色在线日韩免费| 欧美精品啪啪一区二区三区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美大码av| 又紧又爽又黄一区二区| 国产成人福利小说| 精品无人区乱码1区二区| 国产激情偷乱视频一区二区| 最好的美女福利视频网| 亚洲黑人精品在线| 国产色爽女视频免费观看| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 99在线视频只有这里精品首页| 一级毛片高清免费大全| 欧美在线黄色| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 日本五十路高清| 黄色视频,在线免费观看| 国产单亲对白刺激| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久国产a免费观看| 国产成人av教育| 国产熟女xx| 亚洲精品成人久久久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品 欧美亚洲| 一级黄色大片毛片| 久久久国产精品麻豆| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产熟女xx| av国产免费在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 99久久成人亚洲精品观看| 国产老妇女一区| 88av欧美| 在线观看免费午夜福利视频| 成年版毛片免费区| 变态另类丝袜制服| 精品日产1卡2卡| 久久香蕉精品热| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| x7x7x7水蜜桃| 成年版毛片免费区| 久久中文看片网| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美+日韩+精品| 久久这里只有精品中国| 禁无遮挡网站| 特级一级黄色大片| www.999成人在线观看| 国产成人av教育| 亚洲欧美日韩东京热| 黄色女人牲交| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲熟妇熟女久久| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美性猛交黑人性爽| av片东京热男人的天堂| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲专区中文字幕在线| 69人妻影院| 久久人妻av系列| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲av熟女| 午夜久久久久精精品| 免费在线观看影片大全网站| 男女之事视频高清在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产成人a区在线观看| 中文字幕av成人在线电影| а√天堂www在线а√下载| 日本在线视频免费播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 中文在线观看免费www的网站| 久久久久久九九精品二区国产| 国产成年人精品一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 网址你懂的国产日韩在线| 免费电影在线观看免费观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美日韩精品网址| 欧美性感艳星| 欧美一级a爱片免费观看看| 大型黄色视频在线免费观看| 欧美黑人巨大hd| 精品久久久久久成人av| 又黄又粗又硬又大视频| 天美传媒精品一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲五月婷婷丁香| 精品久久久久久久久久免费视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 麻豆久久精品国产亚洲av| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久亚洲真实| 老司机福利观看| 国产亚洲精品一区二区www| 悠悠久久av| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久久久久中文| 精品人妻偷拍中文字幕| 天堂√8在线中文| 毛片女人毛片| xxx96com| 麻豆成人av在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲人与动物交配视频| 窝窝影院91人妻| 午夜福利高清视频| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产色片| 女人被狂操c到高潮| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品久久久久久,| 久久香蕉国产精品| 最近在线观看免费完整版| 亚洲第一电影网av| 老司机午夜十八禁免费视频| 俄罗斯特黄特色一大片| 男女之事视频高清在线观看| www.熟女人妻精品国产| 久久国产精品影院| 午夜福利18| 18禁在线播放成人免费| 欧美色欧美亚洲另类二区| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲av五月六月丁香网| 国产主播在线观看一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 欧美日韩福利视频一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 18禁国产床啪视频网站| 最近在线观看免费完整版| 级片在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 美女黄网站色视频| 午夜免费激情av| 怎么达到女性高潮| 波多野结衣高清无吗| 高清日韩中文字幕在线| 日本免费a在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产综合懂色| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 精华霜和精华液先用哪个| 国产伦人伦偷精品视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产探花极品一区二区| 国产不卡一卡二| 天美传媒精品一区二区| 窝窝影院91人妻| 91麻豆精品激情在线观看国产| 国产69精品久久久久777片| 成年女人看的毛片在线观看| 69av精品久久久久久| 18+在线观看网站| 国产91精品成人一区二区三区| 一级作爱视频免费观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲国产欧美网| 亚洲18禁久久av| 欧美一级毛片孕妇| 97碰自拍视频| 亚洲人成电影免费在线| 成人av一区二区三区在线看| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av电影在线进入| 男女那种视频在线观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 午夜福利视频1000在线观看| 在线观看66精品国产| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产成人a区在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 熟女人妻精品中文字幕| 日本黄色视频三级网站网址| 日日干狠狠操夜夜爽| 在线国产一区二区在线| 欧美性猛交黑人性爽| 久久人妻av系列| 亚洲精品日韩av片在线观看 | 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 脱女人内裤的视频| 美女黄网站色视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 桃色一区二区三区在线观看| 男女午夜视频在线观看| 国产美女午夜福利| 欧美最新免费一区二区三区 | a在线观看视频网站| 日韩国内少妇激情av| 成年女人永久免费观看视频| 免费在线观看日本一区| 黄片小视频在线播放| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲国产精品999在线| 热99re8久久精品国产| 日本黄大片高清| 一区二区三区免费毛片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式 | 国产精品 欧美亚洲| 色在线成人网| 精品无人区乱码1区二区| 国产高清视频在线播放一区| av女优亚洲男人天堂| 搞女人的毛片| 亚洲av一区综合| 中文字幕高清在线视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产久久久一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 最好的美女福利视频网| 国产成人欧美在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 午夜福利视频1000在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 老鸭窝网址在线观看| 高清在线国产一区| 精品福利观看| 波多野结衣高清作品| 最新在线观看一区二区三区| 欧美激情久久久久久爽电影| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 成人欧美大片| 久久亚洲精品不卡| 国产成人aa在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产欧美日韩一区二区三| 俺也久久电影网| 99久久99久久久精品蜜桃| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲成av人片免费观看| 中文资源天堂在线| 精品国产美女av久久久久小说| 国产真实乱freesex| 成人永久免费在线观看视频| 男女床上黄色一级片免费看| 免费在线观看亚洲国产| 老司机在亚洲福利影院| 久久久久久久午夜电影| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91久久精品电影网| 亚洲精品粉嫩美女一区| 国产单亲对白刺激| 在线天堂最新版资源| 亚洲性夜色夜夜综合| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 淫妇啪啪啪对白视频| 一a级毛片在线观看| 成人av在线播放网站| 亚洲色图av天堂| 久久久久久久午夜电影| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 午夜免费成人在线视频| 黄片大片在线免费观看| 无限看片的www在线观看| 哪里可以看免费的av片| 99热这里只有精品一区| 国产乱人视频| 国内精品久久久久久久电影| 免费看a级黄色片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品亚洲一区二区| 色视频www国产| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 精品久久久久久,| www国产在线视频色| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品99久久久久久久久| 国产av在哪里看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久久久九九精品影院| 亚洲五月天丁香| 成人鲁丝片一二三区免费| 色哟哟哟哟哟哟| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产色婷婷99| 日本 av在线| 午夜激情福利司机影院| 小说图片视频综合网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲乱码一区二区免费版| 俺也久久电影网| 国产毛片a区久久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 草草在线视频免费看| 欧美国产日韩亚洲一区| 丰满人妻一区二区三区视频av | 中文字幕人成人乱码亚洲影| 特大巨黑吊av在线直播| 国产免费av片在线观看野外av| www.熟女人妻精品国产| 久久中文看片网| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 天堂影院成人在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 日韩大尺度精品在线看网址| 有码 亚洲区| 在线观看舔阴道视频| 天美传媒精品一区二区| 亚洲av二区三区四区| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产精品久久久久久久电影 | 国产乱人视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美bdsm另类| 真实男女啪啪啪动态图| 哪里可以看免费的av片| 国产成+人综合+亚洲专区| а√天堂www在线а√下载| 欧美日韩精品网址| 国产伦一二天堂av在线观看| 观看美女的网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品久久国产高清桃花| 一区二区三区高清视频在线| 女人被狂操c到高潮| av国产免费在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 宅男免费午夜| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 88av欧美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 性色av乱码一区二区三区2| 一个人看的www免费观看视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲专区中文字幕在线| 老司机福利观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产色婷婷99| 欧美性感艳星| 婷婷精品国产亚洲av| 1024手机看黄色片| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 免费av毛片视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 99在线人妻在线中文字幕| 免费av观看视频| 亚洲七黄色美女视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲五月婷婷丁香| 成人国产一区最新在线观看| 91麻豆av在线| 天堂动漫精品| 一区二区三区国产精品乱码| 两个人视频免费观看高清| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线观看66精品国产| 成人av在线播放网站| av中文乱码字幕在线| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 免费电影在线观看免费观看| netflix在线观看网站| 性色av乱码一区二区三区2| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美黑人巨大hd| 日韩欧美 国产精品| 欧美黄色淫秽网站| 嫩草影视91久久| 成人性生交大片免费视频hd| 老司机午夜福利在线观看视频| 免费看光身美女| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 人妻久久中文字幕网| 1000部很黄的大片| 久久九九热精品免费| 国产一级毛片七仙女欲春2| 日韩亚洲欧美综合| 国产一区二区三区视频了| 一区二区三区免费毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 日韩欧美免费精品| 久久精品国产综合久久久| 久久久国产精品麻豆| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲内射少妇av| 免费观看精品视频网站| 宅男免费午夜| 精品日产1卡2卡| 最好的美女福利视频网| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品91蜜桃| 午夜免费激情av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 日本一二三区视频观看| 国产精品亚洲一级av第二区| www.www免费av| 手机成人av网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 特级一级黄色大片| 亚洲av熟女| 白带黄色成豆腐渣| 丝袜美腿在线中文| 国产精品99久久99久久久不卡| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美日韩精品网址| 久久久久久久精品吃奶| 岛国在线观看网站| 黄色视频,在线免费观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 深爱激情五月婷婷| 欧美乱色亚洲激情| 天美传媒精品一区二区| 成年版毛片免费区| 欧美激情在线99| 老司机在亚洲福利影院| 成人无遮挡网站| 全区人妻精品视频| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品99久久99久久久不卡| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品久久久久久久电影 | 国产免费男女视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品久久久久久久久免 | 又爽又黄无遮挡网站| 日韩人妻高清精品专区| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品人妻少妇| 国产视频内射| 丁香欧美五月| 欧美中文综合在线视频| www.色视频.com| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 午夜免费观看网址| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 青草久久国产| 午夜福利18| 免费在线观看日本一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产极品精品免费视频能看的| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲av免费在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 一本一本综合久久| avwww免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | 国产精品久久久久久久久免 | 最近最新中文字幕大全免费视频| 1000部很黄的大片| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲无线在线观看| 亚洲电影在线观看av| 成年女人毛片免费观看观看9| 亚洲av免费在线观看| 91九色精品人成在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲av二区三区四区| 精品无人区乱码1区二区| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美日韩国产亚洲二区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日本 av在线| 亚洲成av人片在线播放无| 黄片大片在线免费观看| 国产一区二区在线观看日韩 | 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲人成伊人成综合网2020| 久久中文看片网| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲国产色片| 欧美午夜高清在线| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 午夜精品久久久久久毛片777| 他把我摸到了高潮在线观看| 欧美+日韩+精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美午夜高清在线| 老司机深夜福利视频在线观看| 在线观看免费午夜福利视频|