通過(guò)糞便標(biāo)本檢測(cè)診斷幽門(mén)螺桿菌感染的研究進(jìn)展

呂凱琪，岳 雷，沈玉欽，孫迎潮，劉 輝，胡偉玲，★

（1.紹興文理學(xué)院，浙江 紹興 312000；2.浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院，浙江 杭州 310000 ；3.南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330000）

幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp) 與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃黏膜淋巴瘤及胃癌的發(fā)生密切相關(guān), 它被WHO 列為Ⅰ類(lèi)致癌物質(zhì)[1-2]。最新的報(bào)道顯示，全球的Hp 平均感染率為44.3%，發(fā)達(dá)國(guó)家與發(fā)展中國(guó)家的Hp 平均感染率分別為34.7% 和50.8%。第五次全國(guó)幽門(mén)螺桿菌感染處理共識(shí)報(bào)告中提出，Hp陽(yáng)性患者需進(jìn)行Hp 根除治療。而準(zhǔn)確診斷Hp 感染是進(jìn)行Hp 根除治療的前提。目前，Hp 感染的診斷方法包括侵入性和非侵入性?xún)纱箢?lèi)。借助內(nèi)鏡的侵入性Hp 檢測(cè)會(huì)增加受檢者的痛苦，其臨床接受度較低，且存在適應(yīng)人群的限制，不適用于相關(guān)疾病的普查。常用的非侵入性檢查包括尿素呼吸試驗(yàn)(UBT)、血清學(xué)試驗(yàn)和對(duì)糞便、尿液、唾液等身體物質(zhì)成分進(jìn)行分析等。其中UBT、血清學(xué)試驗(yàn)等已得到廣泛應(yīng)用。但進(jìn)行UBT 需要使用質(zhì)譜儀、紅外光譜儀和閃爍計(jì)數(shù)器等儀器，并且需要受檢者停用質(zhì)子泵抑制劑2 ～4周，檢測(cè)前還需禁食。由于進(jìn)行Hp 根除治療后相關(guān)抗體水平仍會(huì)保持在較高的狀態(tài)，對(duì)接受Hp 根除治療后的患者進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)的結(jié)果并不能反映其Hp的感染狀態(tài)，故血清學(xué)試驗(yàn)不適用于Hp 根除治療后的復(fù)查。Hp 可經(jīng)由糞- 口或口- 口傳播, 它的某些蛋白能夠使其避免遭受胃酸的侵蝕并隨著胃黏膜上皮細(xì)胞的脫落與糞便一起排出體外。這使得通過(guò)糞便檢測(cè)Hp 成為可能。進(jìn)行糞便Hp 檢測(cè)前，受檢者無(wú)需口服藥物和禁食，且檢測(cè)結(jié)果不受質(zhì)子泵抑制劑的影響。該檢測(cè)方法具有操作便捷、費(fèi)用低、敏感度高等優(yōu)點(diǎn)，適用于大眾群體的篩查。在本文中，筆者主要是對(duì)通過(guò)糞便標(biāo)本檢測(cè)診斷Hp 感染的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 Hp 糞便抗原檢測(cè)

Hp 糞便抗原檢測(cè)(HpSA) 是目前臨床上應(yīng)用較為廣泛的糞便Hp 檢測(cè)方法。我國(guó)的多中心研究顯示，用Hp 糞便抗原檢測(cè)診斷Hp 感染的敏感度為93,5%,特異度為94.2%, 準(zhǔn)確率為93.3%。國(guó)外的薈萃分析顯示,用Hp 糞便抗原檢測(cè)診斷Hp 感染的總體敏感度、特異度分別為94%(95%CI:93-95) 和97%(95%CI:96-98)[3]。有研究者[4]采用受試者工作特征曲線(ROC) 分析了Hp 糞便抗原檢測(cè)在診斷Hp 感染中的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)果顯示，用Hp 糞便抗原檢測(cè)診斷Hp 感染的敏感度、特異度、準(zhǔn)確率分別為92.9%、90.5% 及92.2%，ROC 曲線下面積為(0.967±0.019)。這表明，Hp 糞便抗原檢測(cè)在診斷Hp 感染中的應(yīng)用價(jià)值較高。目前，對(duì)于糞便中Hp 抗原進(jìn)行檢測(cè)的方法已成為臨床上研究的熱點(diǎn)。

1.1 酶免疫法（EIA）

采用酶免疫法進(jìn)行Hp 糞便抗原檢測(cè)是一種操作簡(jiǎn)單方便、準(zhǔn)確度高、費(fèi)用低的非侵入性檢測(cè)方法。在一項(xiàng)評(píng)估用Hp 多克隆酶免疫分析糞便抗原檢測(cè)診斷Hp 感染效果的前瞻性研究中，研究者招募了555 例接受常規(guī)檢查的患者進(jìn)行研究。研究結(jié)果顯示，在最佳臨界值（光密度0.160）下，該檢測(cè)呈現(xiàn)出高水平的敏感度(93.1%)、特異度(94.6%) 和準(zhǔn)確率(93.8%)，且在萎縮性胃炎、腸上皮化生存在的情況下及40 歲以上患者中仍可顯示出良好的診斷性能[5]。基于多克隆抗體的酶免疫分析法是檢測(cè)糞便標(biāo)本中Hp 抗原的有效方法。在2005 年，Manes G 等[6]利用其新開(kāi)發(fā)出的一種單克隆酶免疫Hp 糞便抗原測(cè)定法（FemtoLab Hp Connex 法）對(duì)231 例接受標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)Hp 根除治療后4 ～8 周的患者進(jìn)行Hp 感染的診斷。結(jié)果顯示，用FemtoLab Hp Connex 法對(duì)接受標(biāo)準(zhǔn)三聯(lián)Hp 根除治療后4 ～8 周的患者進(jìn)行Hp 感染診斷的敏感度為88.3%，特異度為94.8%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值分別為87.4% 和95.2%。這表明，F(xiàn)emtoLab Hp Connex 法適合用于Hp 感染根除治療后的感染評(píng)估。一項(xiàng)系統(tǒng)評(píng)價(jià)和薈萃分析顯示，使用基于單克隆抗體的酶免疫Hp 糞便抗原檢測(cè)可有效診斷兒童Hp 感染[7]。日本研發(fā)的Testmate Pylori 抗原(TPAg EIA) 試劑盒和Testmate 快速幽門(mén)抗原(Rapid TPAg) 試劑盒均可用于診斷Hp 感染[8]。有研究顯示，用H. PYLORI QUIK CHEK ?試劑盒和H. PYLORI CHEK ?試劑盒診斷Hp 感染的敏感度分別為92% 和91%[9]。

1.2 免疫層析法

在2005 年，TrevisaniL 等[10]對(duì)105 例患者進(jìn)行了糞便中Hp 抗原的檢測(cè)，分別使用基于免疫層析法的快速免疫測(cè)定試劑盒(ImmunoCard STAT) 和基于酶免疫法的實(shí)驗(yàn)室酶免疫測(cè)定試劑盒(Hp StAR) 對(duì)其糞便標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示，用ImmunoCard STAT診斷Hp 感染的敏感度和特異度分別為85% 和93%，用Hp StAR 診斷Hp 感染的敏感度和特異度分別為88% 和100%。Kalach N 等[11]對(duì)158 例Hp 感 染 患兒進(jìn)行研究的結(jié)果顯示，基于免疫層析法的Hp 糞便抗原檢測(cè)是診斷兒童Hp 感染的可靠手段（診斷的敏感度為91.3%，特異度為97%）。有研究表明，用ImmunoCard 快速Hp 糞便抗原檢測(cè)診斷Hp 感染的準(zhǔn)確率可達(dá)到90% 以上[12-13]。

2 基于分子生物學(xué)的Hp 糞便檢測(cè)

在20 世紀(jì)90 年代初，有研究者開(kāi)始將PCR 技術(shù)用于Hp 的診斷。目前，Hp 的多種主要毒力基因〔如尿素酶(A.B.C.D) 基因、16srDNA 基因、空泡毒素基因(vacA) 及細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白(cagA) 基因〕都已被成功克隆。研究者根據(jù)Hp 的不同靶基因設(shè)計(jì)出了相對(duì)應(yīng)的引物，并建立了聚合酶鏈反應(yīng)(PCR) 體系來(lái)對(duì)Hp 進(jìn)行檢測(cè)[14]。PCR 具有極高的敏感度和特異度，能夠精確檢測(cè)到糞便標(biāo)本中極微量的Hp 特異性基因。有研究指出，用PCR 檢測(cè)消化道出血患者的Hp 感染也能得出準(zhǔn)確的結(jié)果，同時(shí)可對(duì)特定位點(diǎn)耐藥基因（如大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)和喹諾酮類(lèi)藥物、四環(huán)素、利福霉素、克拉霉素、阿莫西林及甲硝噠唑等藥物的耐藥基因）的突變進(jìn)行檢測(cè)[15]。

2.1 磁性免疫PCR 技術(shù)(Immunomagneticseparation，IMS-PCR)

有研究指出，與常規(guī)PCR 技術(shù)相比，用IMSPCR 進(jìn)行糞便Hp 基因檢測(cè)的敏感度較高。Enroth H等[16]的研究顯示，采用IMS-PCR 檢測(cè)糞便HpUreA基因的敏感度和特異度分別為61.4%、100%。MonteiroL 等[17]的 研 究 顯 示，采 用IMS-PCR 檢 測(cè)糞便HpUreA 基因的敏感度和特異度分別為80.9%、100%。在2019 年，陳麗麗等[18]開(kāi)發(fā)了一種基于免疫磁珠（IMBs）技術(shù)的新型糞便Hp 基因檢測(cè)方法。實(shí)踐表明，用該方法檢測(cè)糞便Hp 基因的敏感度非常高。

2.2 套式-PCR 技術(shù)(Nested-PCR)

Bamford KB 等[19]在進(jìn)行糞便標(biāo)本Hp 檢測(cè)時(shí)，采用Nested-PCR 進(jìn)行了2 次擴(kuò)增處理，這在提高了檢測(cè)敏感度的同時(shí)，又降低了檢測(cè)的假陰性率。GramleyWA 等[20]對(duì)22 例研究對(duì)象的冷凍糞便樣本進(jìn)行了DNA 提取，用16S rRNA 基因的通用引物進(jìn)行擴(kuò)增后對(duì)相同的糞便DNA 模板與Hp 16S rRNA 基因的特異性引物進(jìn)行二次擴(kuò)增和雜交，然后檢測(cè)Hp 基因。結(jié)果顯示，采用上述方法檢測(cè)糞便Hp 基因的敏感度和特異度分別為73% 和100%。?ELIGOVá B 等[21]為找到一種可靠的巢式PCRHp 檢測(cè)技術(shù)，使用針對(duì)16S 核糖體RNA(rRNA) 基因可變區(qū)的引物精心設(shè)計(jì)了巢式PCR，并用于檢測(cè)活檢組織、糞便和唾液中的Hp。隨后其將上述方法在來(lái)自同一個(gè)體的81 份臨床活檢組織、糞便和唾液樣本上進(jìn)行了驗(yàn)證。結(jié)果顯示，該巢式PCR 檢測(cè)可作為對(duì)具有基本設(shè)備實(shí)驗(yàn)室中爭(zhēng)議樣本（出血患者或服用質(zhì)子泵抑制劑患者的樣本）進(jìn)行Hp 檢測(cè)的輔助方法。雖然PCR 檢測(cè)能快速、精確地檢出Hp，但其具有費(fèi)用高、需使用特殊設(shè)備、不能區(qū)分活性生物體和死亡生物體（不能鑒別區(qū)分既往與現(xiàn)癥感染）等缺點(diǎn)。

3 基于培養(yǎng)法的Hp 糞便檢測(cè)

Hp 分離培養(yǎng)是最經(jīng)典、最可靠的診斷Hp 的方法之一。糞便是一種容易獲得的標(biāo)本, 臨床上很早就有對(duì)糞便中Hp 進(jìn)行分離培養(yǎng)的報(bào)道。1994 年英國(guó)的一項(xiàng)研究表明，能夠從Hp 陽(yáng)性患者的糞便中分離培養(yǎng)出Hp。這一發(fā)現(xiàn)意味著，Hp 感染可通過(guò)糞口途徑傳播[22]。1998 年加利福尼亞北部的一家醫(yī)院發(fā)現(xiàn)，從接受磷酸鈉導(dǎo)瀉前后的Hp 感染者的糞便中可分離培養(yǎng)出Hp[23]。這與DoreMP 等[24]的研究結(jié)果相符。但有研究指出，進(jìn)行Hp 分離培養(yǎng)存在以下缺點(diǎn)：1）耗時(shí)耗力，Hp 是一種挑剔難養(yǎng)的細(xì)菌，其培養(yǎng)結(jié)果與培養(yǎng)環(huán)境密切相關(guān)；2）Hp 分離的敏感性在不同實(shí)驗(yàn)室存在較大的差異；3）胃炎活動(dòng)度、消化道出血、飲酒習(xí)慣、H2 受體拮抗劑和質(zhì)子泵抑制劑的使用、抗菌藥物的使用等因素對(duì)培養(yǎng)結(jié)果均有影響[25]。

4 小結(jié)與展望

1996 年WHO 將Hp 列入人類(lèi)五大生物致癌因素之一。大量的研究表明，Hp 不僅與多種消化道疾病密切相關(guān)，而且還與高血壓、冠心病、營(yíng)養(yǎng)代謝相關(guān)疾病、皮膚病等有關(guān)。近年來(lái)，隨著臨床上對(duì)Hp 研究的不斷深入，Hp 感染與相關(guān)疾病的關(guān)系日益受到人們的重視[26]。準(zhǔn)確、快速地檢出Hp 對(duì)相關(guān)疾病的早期預(yù)防、正確治療和復(fù)發(fā)預(yù)防具有重要的意義。糞便標(biāo)本留取容易，相關(guān)Hp 檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、無(wú)創(chuàng)，適合在常規(guī)檢查中應(yīng)用，尤其適用于幼兒、孕婦、高齡患者Hp 感染的診斷及Hp 根除治療后的復(fù)查。筆者認(rèn)為，此類(lèi)檢測(cè)方法今后必將擁有更加廣闊的應(yīng)用前景。