煙草浸提液對番茄晚疫病菌的化感抑制效應(yīng)機理研究

劉嘉方，李 蕾，云興福

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝與植物保護學(xué)院，呼和浩特 010019；2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭師范學(xué)院，包頭 014030；3.滿洲里俄語職業(yè)學(xué)院，滿洲里 021400）

番茄晚疫病由致病疫霉Phytophthora infestans（Mont.）de Bary侵染所致，是番茄生產(chǎn)上的毀滅性病害[1]。致病疫霉屬卵菌綱 Oomycetes，主要侵染番茄的葉和莖，在潮濕、涼爽的環(huán)境條件下侵染速度極快，會加速病害發(fā)生，造成嚴(yán)重?fù)p失[2]。傳統(tǒng)生產(chǎn)上多采用化學(xué)農(nóng)藥對番茄晚疫病進(jìn)行防治，但農(nóng)藥的大量使用會對環(huán)境造成污染，目前需要尋找一種綠色環(huán)保、生態(tài)有效的防治方法。

化感作用（allelopathy）是植物通過釋放化學(xué)物質(zhì)進(jìn)而影響自身或其他微生物的生長發(fā)育[3]。利用植物化感作用可以有效防治蔬菜病害，如大蒜的根系提取物對番茄晚疫病菌[4]、辣椒疫霉菌Phytophthora capsici、番茄青枯病菌Ralstonia solanacearum和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea[5]等多種病原菌均有顯著抑制效果；韭菜揮發(fā)物[6]、西芹提取物[7]和蠶豆根系分泌物[8]能抑制枯萎病菌Fusariumspp.的菌絲生長和孢子萌發(fā)，降低病原菌的致病力。煙草Nicotiana tabacumL.是一種一年生或有限制性的多年生的草本植物，全株被細(xì)毛，基生稍木質(zhì)化，在夏天和秋天開花[9]。作為一種高敏感的化感植物，煙草的根系分泌物[10]、葉片浸提物[11]以及殘體腐解物[12]等不同部位均具有化感效應(yīng)。煙草中機酸類、煙堿類、酮類物質(zhì)及鉀元素等含量較高，可促進(jìn)作物生長，并有一定的抗病效果[13]。已有研究發(fā)現(xiàn)，低濃度的煙草浸提液對水稻[14]和萵苣[15]等作物的種子萌發(fā)和幼苗生長具有促進(jìn)作用；煙草化感物質(zhì)能提高植物的光合能力，對真菌、細(xì)菌和放線菌有明顯的抑制作用[16]，對蔬菜病蟲害也有較好的防治效果[17]。因此，煙草化感作用在番茄晚疫病防治方面具有較大潛力。

本研究通過菌絲生長和致病力測定探討煙草浸提液對番茄晚疫病菌的化感作用，并連續(xù)處理多代，直至獲得 1株符合疫霉菌弱毒評價標(biāo)準(zhǔn)的 PIAS-R菌株（番茄晚疫病菌弱毒菌株英文全稱Phytophthora infestansattenuated strain，PIAS）。并進(jìn)一步通過測定PIAS-R菌株的孢子萌發(fā)率、菌絲生物量和細(xì)胞壁降解酶活性，觀察菌絲體形態(tài)特征及其轉(zhuǎn)錄組分析比較，解析煙草浸提液對番茄晚疫病菌的化感抑制效應(yīng)機理，以期為利用煙草防治蔬菜病害或研制植物性抑菌劑提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料：干煙草由遼寧省朝陽煙草基地提供，品種為“大葉葵”；番茄晚疫病病原菌由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所提供；番茄種子購自內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科學(xué)院，品種為“粉紅918”。

菌種培養(yǎng)：試驗前期將保存的番茄晚疫病病原菌接種在PDA培養(yǎng)基上，于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，7 d后菌絲長滿整個培養(yǎng)皿，菌落形態(tài)完整，可進(jìn)一步擴繁備用。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂固體培養(yǎng)基（potato dextrose agar，PDA）：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂16 g、蒸餾水1 L；馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（potato dextrose，PD）：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 L；改良MS培養(yǎng)基（Murashige & Skoog，MS）：KNO32 g，KCl 0.5 g，F(xiàn)eSO40.01 g，K2HPO41 g，MgSO40.5 g，VB10.1 mg，L-天冬酰胺 0.5 g，羧甲基纖維素鈉鹽 10 g或柑橘果膠 10 g，蒸餾水1 L。

1.2 方法

1.2.1 煙草浸提液的制備 用天平稱取煙草根、葉6 g等量3份置于100 mL錐形瓶中，分別以1:10比例加入蒸餾水，25 ℃條件下?lián)u床振蕩浸提（240 r/min），1 d后取出置于超凈工作臺上，然后過濾，第1次用定性濾紙過濾除濾渣，第2次經(jīng)細(xì)菌過濾器（0.22 μm）過濾除菌2次，即得煙草根、葉浸提液母液，濃度為100 mg/mL；將煙草浸提液母液用無菌水稀釋2倍作為處理濃度（50 mg/mL），貯于冰箱（4 ℃）中備用。PI-R代表根浸提液處理，PI-L代表葉浸提液處理。

1.2.2 不同煙草浸提液每代處理后篩選番茄晚疫病菌弱毒菌株 煙草對番茄晚疫病菌的化感作用：在無菌條件下，用直徑為0.6 cm的打孔器打取番茄晚疫病病原菌株，用接種針將菌餅移入不同PDA培養(yǎng)基（121℃，30 min）中。以培養(yǎng)皿中添加2 mL各處理浸提液和18 mL培養(yǎng)基的平板為處理，以添加20 mL培養(yǎng)基的平板為對照（CK）。菌絲面向下，每皿取1塊放于中央，25 ℃恒溫培養(yǎng)，菌絲生長2 d后采用十字交叉法測量菌落直徑（cm）[18]。每隔1 d測1次，共測5次。持續(xù)培養(yǎng)6 d后長出的菌落為第1代。用打孔器分別打取第1代各處理和對照菌餅放入上述對應(yīng)不同培養(yǎng)基中，長出的菌落為第2代，依此類推，直至處理培養(yǎng)8代，測定每一代的菌落直徑，5次重復(fù)。菌落直徑（cm）=測量菌落直徑平均值－0.6 cm，化感效果（%）=（對照菌落直徑－處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100。

煙草對番茄晚疫病菌的抑制效果：取25 ℃條件下在PDA平板上培養(yǎng)6 d的每一代各處理番茄晚疫病菌，在平板中央加入適量預(yù)冷的無菌水，用涂布棒輕輕刮取菌絲表面，2層紗布過濾即得到孢子囊懸浮液，在顯微鏡下調(diào)整濃度為5.0×104cfu/mL，將配制好的懸浮液在4 ℃低溫箱靜置2～3 h，釋放的游動孢子用于接種。以接種番茄晚疫病病原菌的孢子囊懸浮液為對照（CK）。將露白的番茄種子播種在直徑為8 cm的塑料育苗缽中自然生長，每缽1株，待番茄植株長至6～8葉期時，用手持噴壺在植株葉片正反面分別均勻噴施不同處理的懸浮液，以葉面上有明顯小液滴為度。接種處理在下午 6－7點進(jìn)行并在噴施完扣上小棚保溫保濕，在接種21 d后依據(jù)病情分級標(biāo)準(zhǔn)[19]進(jìn)行番茄晚疫病調(diào)查并計算病情指數(shù)，每處理24株，3次重復(fù)。病情指數(shù)=Σ（各級病葉數(shù)×相對級數(shù)值）/（調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級數(shù)）×100。

第一，福建小學(xué)學(xué)校的數(shù)量和施教人數(shù)逐年增加?！岸拍旮闹浦?，設(shè)中心學(xué)校875校、國民學(xué)校3700校、私立小學(xué)586校、共4161校① 原文計算有誤，應(yīng)為5161校。，施教人數(shù)小學(xué)部514490人。三十年中心學(xué)校增為1164校、國民學(xué)校增為3782校、私立小學(xué)516校、共5462校、施教人數(shù)小學(xué)部648551人。三十一年中心學(xué)校增為1349校、國民學(xué)校增為4041校、私立小學(xué)468校、共5732校②原文計算有誤，應(yīng)為5858校。、施教人數(shù)小學(xué)部634562人。”［27］13三年間，小學(xué)學(xué)校的數(shù)量增長了1571所，施教人數(shù)僅小學(xué)部就增長了120072人。

1.2.3 PIAS-R生理指標(biāo)的測定 將1.2.2篩選到的番茄晚疫病菌弱毒菌株P(guān)IAS-R進(jìn)行生理指標(biāo)的測定，以番茄晚疫病病原菌株為對照（CK），5次重復(fù)。

孢子萌發(fā)率的測定：參照黃英菊等[20]的方法制備濃度為1×107cfu/mL的PIAS-R和CK菌株游動孢子懸浮液。將制備好的游動孢子懸浮液在黑暗10 ℃條件下放置3 h，刺激游動孢子萌發(fā)。每次鏡檢50個游動孢子，計算孢子萌發(fā)率（注：芽管長度達(dá)孢子直徑一半時認(rèn)為萌發(fā)），孢子萌發(fā)率（%）=孢子萌發(fā)數(shù)/孢子總數(shù)×100。

菌絲生物量的測定：在無菌條件下，用接種針將等齡PIAS-R和CK菌餅移入30 mL PD培養(yǎng)基中，25 ℃黑暗培養(yǎng)6 d后收集菌絲，蒸餾水洗滌、晾干，記錄菌絲生物量（g）[21]。

粗酶液的制備：無菌條件下，分別取等齡PIAS-R和CK菌落，移至事先滅菌的50 mL產(chǎn)酶培養(yǎng)基（改良MS和PD培養(yǎng)基）中，每個三角瓶接種直徑0.6 cm的5塊菌餅，并在26 ℃下恒溫振蕩培養(yǎng)6 d，將收集的培養(yǎng)液用3層紗布過濾，除去孢子和菌絲體，濾液在4 ℃下12000×g離心15 min，再次過濾后棄去沉淀，取上清液為粗酶液，將其保存在4 ℃下待測。測定各項細(xì)胞壁降解酶指標(biāo)。β-葡萄糖苷酶活性測定參照高曉敏[22]的方法；纖維素酶活性測定參照 Eveleigh等[23]方法；果膠酶活性測定參考姜立春等[24]方法；蛋白酶活性測定參照趙爽等[25]方法。

1.2.4 PIAS-R菌絲體形態(tài)觀察 用相機對1.2.2篩選到的番茄晚疫病菌弱毒菌株P(guān)IAS-R菌落進(jìn)行直接拍照，以番茄晚疫病病原菌株菌落為對照（CK）。同時從PDA平板上挑取菌絲用光學(xué)顯微鏡（Olympus BX53）以200倍放大倍數(shù)觀察菌株的形態(tài)結(jié)構(gòu)，選擇典型特征視野對菌絲進(jìn)行拍照和描述。

1.2.5 PIAS-R轉(zhuǎn)錄組測序 將1.2.2篩選到的番茄晚疫病菌弱毒菌株P(guān)IAS-R用無菌鑷子小心刮取菌絲體300 mg，放入提前標(biāo)記的凍存管中，液氮冷凍，-80 ℃超低溫冰箱保存，備用。以番茄晚疫病病原菌株菌絲體為對照（CK），3次重復(fù)。利用DNase提取樣品的總RNA；用1%瓊脂糖凝膠電泳和Agilent 2100 Bioanalyzer檢測總RNA的完整性、純度和濃度；文庫的構(gòu)建參照TruSeq Stranded mRNA LT Sample Prep Kit的說明進(jìn)行；使用Illumina HiSeqTM 2500平臺進(jìn)行無參轉(zhuǎn)錄組測序，由上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司完成。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用WPS（2019）軟件處理原始數(shù)據(jù)，SPSS（20.0）統(tǒng)計軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，T檢驗法（T-test）、最小顯著差異法（LSD）和Duncan法（SSR）多范圍檢驗各處理間的差異顯著性。轉(zhuǎn)錄測序中用eXpress[26]軟件分析基因FPKM[27]，用DESeq[28]軟件進(jìn)行基因的差異表達(dá)分析。篩選出P＜0.05且|log2fold change| ≥1的差異基因進(jìn)行GO和KEGG[29]富集分析，以判定差異基因主要影響的生物學(xué)功能或者通路。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草浸提液每代處理后番茄晚疫病菌弱毒菌株的篩選

表1 不同煙草浸提液對番茄晚疫病菌的化感作用Table 1 Allelopathy of different tobacco extracts on Phytophthora infestans

2.1.2 煙草浸提液對番茄晚疫病菌的抑制效果 在番茄植株6～8葉期，用每一代各處理菌株的懸浮液對番茄植株進(jìn)行人工接種。從接種后21 d開始調(diào)查不同菌株的病情指數(shù)（圖1）。隨接種代數(shù)的增加，每一代各處理的病情指數(shù)均始終低于CK且有顯著差異。在接種后21 d，每一代PI-R處理的病情指數(shù)較CK顯著降低37.31%、41.43%、47.88%、49.30%、60.97%、70.56%、76.63%和82.45%。接種后期PI-R處理的病情指數(shù)顯著低于PI-L處理。在連續(xù)處理8代后，煙草浸提液對番茄晚疫病菌有明顯的抑制效果，其中PI-R處理菌株在第7、8代的病情指數(shù)連續(xù)＜10，表明已經(jīng)由番茄晚疫病菌的強致病性菌株逐步變?yōu)槿踔虏⌒跃辏瑢⑦@株番茄晚疫病菌弱毒菌株命名為PIAS-R。此外，隨繼代培養(yǎng)代數(shù)的增加，CK菌株的病情指數(shù)總體表現(xiàn)為下降的趨勢，說明繼代培養(yǎng)對番茄晚疫病菌的致病力有一定的抑制作用。

圖1 不同煙草浸提液處理后番茄晚疫病菌致病力的變化Fig.1 Changes of pathogenicity of Phytophthora infestans after treatment with different tobacco extracts

2.2 PIAS-R孢子萌發(fā)、生物量和酶活性的變化

對PIAS-R和CK菌株的孢子萌發(fā)率、菌絲生物量和細(xì)胞壁降解酶活性進(jìn)行測定（表2）。PIAS-R菌株的孢子萌發(fā)率和生物量為31.4%和0.224 g，較CK菌株顯著降低55.01%和35.45%。PIAS-R菌株分泌的4種細(xì)胞壁降解酶活性均低于CK菌株且有顯著差異。β-葡萄糖苷酶、纖維素酶、果膠酶和蛋白酶活性較對照降低33.79%、51.11%、60.11%和37.63%；其中纖維素酶和果膠酶活性最低，為10.15 μ/(g·min)和110.52 U/mL。說明PIAS-R菌株分泌更低活性的纖維素酶和果膠酶，且分泌的果膠酶活性下降程度大于纖維素酶。

表2 PIAS-R的孢子萌發(fā)率、菌絲生物量和酶活性Table 2 Spore germination rate, mycelial biomass and enzymes activities of PIAS-R

2.3 PIAS-R菌絲體形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察

2.3.1 PIAS-R菌絲體形態(tài)比較 對25 ℃恒溫培養(yǎng)6 d后的PIAS-R和CK菌株進(jìn)行拍照觀察（圖2）。通過觀察菌株的生長狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)不同菌株的形態(tài)特征有較大差異（表3）。PDA平板透明光滑，菌絲都以接種塊為中心，生長成圓形或近圓形的絨毛狀或絮狀菌絲體。與CK菌株相比，PIAS-R菌株的菌落顏色和表型不同且生長速率減慢。

表3 PIAS-R的形態(tài)特征Table 3 Morphological characteristics of PIAS-R

圖2 PIAS-R在PDA培養(yǎng)基上生長6 d后的菌落狀態(tài)Fig.2 Colony status of PIAS-R after 6 d growth on PDA medium

2.3.2 PIAS-R菌絲體顯微結(jié)構(gòu)的觀察 從PDA平板上挑取PIAS-R和CK菌絲體，用光學(xué)顯微鏡觀察不同菌株的顯微結(jié)構(gòu)（圖3）。在放大200倍的顯微鏡視野下觀察PIAS-R菌絲體出現(xiàn)不同種類的畸形變化，包括菌絲分枝增多（圖3A），原生質(zhì)分布不均勻（圖3B），菌絲局部膨脹（圖3C）、變短（圖3D）、扭曲和透明（圖3E，F(xiàn)），菌絲相互纏繞（圖3G）且頂端膨大（圖3H）；而正常生長的CK菌絲體光滑順直、粗細(xì)均一、內(nèi)含物飽滿且原生質(zhì)分布均勻（圖3I-L）。

圖3 PIAS-R的微觀變化Fig.3 Microscopic changes of PIAS-R

2.4 PIAS-R轉(zhuǎn)錄組分析

2.4.1 總RNA質(zhì)量分析及差異表達(dá)基因的篩選 對6 個樣本進(jìn)行RNA-Seq測序后獲得總 RNA 質(zhì)量結(jié)果（表 4）。根據(jù)測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量統(tǒng)計，可進(jìn)行后續(xù)相關(guān)數(shù)據(jù)分析。將 RNA讀取映射到基因組中，分析PIAS-R和CK菌株的差異表達(dá)，繪制差異表達(dá)基因（differentially expressed genes，DEGs）統(tǒng)計圖（圖4），PIAS-R相對于CK有2651個基因（P＜0.05，|log2fold change| ≥1）在表達(dá)水平上存在顯著差異，其中1086個DEGs上調(diào)，1565個DEGs下調(diào)。

圖4 RNA差異表達(dá)基因?qū)Ρ葓DFig.4 RNA statistics and comparison plot of differently expressed genes (DEGs)

表4 總RNA的質(zhì)量統(tǒng)計Table 4 Quality results of total RNA

2.4.2 GO富集分析 對PIAS-R與CK之間的DEGs進(jìn)行GO 功能富集分析，選取富集最顯著的前30個分類條目，繪制GO富集柱狀圖（圖5）。在 GO 數(shù)據(jù)庫中，DEGs根據(jù)功能分為生物過程（biological process）、細(xì)胞組分（cellular component）和分子功能（molecular function）3 大類。根據(jù)已經(jīng)報道的與菌株生長發(fā)育和致病力相關(guān)的GO功能分類，生物過程中的內(nèi)吞標(biāo)志位點集合（eisosome assembly）、纖維素分解代謝過程（cellulose catabolic process）和脂質(zhì)轉(zhuǎn)運（lipid transport）均在上/下調(diào)DEGs富集最多的條目；細(xì)胞組分中內(nèi)吞標(biāo)志位點（eisosome）、脂滴（lipid droplet）和細(xì)胞壁（cell wall）均在上/下調(diào)DEGs富集最多的條目；分子功能中的纖維素結(jié)合（cellulose binding）、纖維素酶活性（cellulase activity）和單酚單加氧酶活性（monophenol monooxygenase activity）均在上/下調(diào)DEGs富集最多的條目。

圖5 差異表達(dá)基因GO分類注釋top 30Fig.5 Top 30 GO classification of DEGs

2.4.3 KEGG富集分析 對PIAS-R與CK之間的DEGs進(jìn)行KEGG 顯著性通路富集分析，如圖6所示。結(jié)果表明，DEGs主要集中在其他氨基酸代謝（metabolism of other amino acids）、脂質(zhì)代謝（lipid metabolism）、能量代謝（energy metabolism）、碳水化合物代謝（carbohydrate metabolism）和氨基酸代謝（amino acid metabolism）通路中。

圖6 差異表達(dá)基因KEGG富集通路Fig.6 Enriched KEGG pathways of DEGs

3 討論

煙草中的有機酸類[30]和生物堿類[31]物質(zhì)對常見的植物病原菌都有一定的抑制作用。病原菌弱毒菌株一般可通過自然分離法[32]、化學(xué)刺激法[33]和植物提取物化感法[34]等篩選獲得。在篩選番茄晚疫病菌的弱毒菌株時，根據(jù)疫霉菌致病力分類標(biāo)準(zhǔn)[35]把病情指數(shù)＜10的菌株認(rèn)定為弱致病性菌株。本研究中，煙草根、葉浸提液對番茄晚疫病菌的菌絲生長表現(xiàn)為化感抑制作用，且隨處理代數(shù)的增加抑制作用累積增強；培養(yǎng)后期PI-R處理的菌落直徑始終低于CK且有顯著差異。經(jīng)過連續(xù)8代處理，煙草浸提液對番茄晚疫病菌的抑制效果逐漸提高；接種后每一代各處理菌株的病情指數(shù)均始終低于CK且有顯著差異；其中，PI-R處理菌株在第7、8代的病情指數(shù)連續(xù)＜10，據(jù)此確定第8代PI-R處理的番茄晚疫病菌為番茄晚疫病菌弱毒菌株P(guān)IAS-R。另外，由于連續(xù)處理代數(shù)較多，本試驗僅僅利用人工接種對每一代不同處理的番茄晚疫病菌進(jìn)行致病力測定，而沒有對接種發(fā)病后各代番茄植株上的病原菌進(jìn)行重新分離，并再次接種測定其致病力的穩(wěn)定性，這在后續(xù)的試驗過程中會進(jìn)一步探討研究。

李楊等[36]觀察表明不同油茶炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides的致病力可能與其孢子萌發(fā)率存在一定關(guān)系。朱荷琴等[37]對棉花黃萎病菌Verticillium dahliae不同致病菌株的生物學(xué)特性進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)強致病菌株的生物量都高于弱致病菌株。Khaledi等[38]發(fā)現(xiàn)，鐮刀菌F.graminearum強致病力菌株產(chǎn)生的細(xì)胞壁降解酶活性水平明顯高于弱致病力菌株。王前前[39]研究發(fā)現(xiàn)核盤菌Sclerotinia sclerotiorum低毒菌株 SZ-150菌絲較細(xì)小，分枝較多，較為密集。黃娟等[40]研究表明核盤菌的致病力減弱和生長抑制與其菌絲結(jié)構(gòu)和形態(tài)變異有關(guān)，其弱致病型 Ep-1PN具有菌落擴展、菌絲頂端分枝異常、原生質(zhì)不均勻和內(nèi)部結(jié)構(gòu)不完整等特點。

番茄晚疫病菌以孢子或菌絲體形式在植株病殘體或土壤中存活，通過氣流或雨水侵染到番茄植株上[41]。本研究中，PIAS-R菌株的孢子萌發(fā)率、菌絲生物量和細(xì)胞壁降解酶活性均低于CK菌株且有顯著差異，菌絲體形態(tài)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)畸形變化（菌落變薄、顏色變淺，菌絲分枝增多、頂端膨大、變短、扭曲和透明，原生質(zhì)分布不均勻），推測煙草是通過抑制菌株的孢子萌發(fā)、菌絲生長和自身分泌的酶活性，破壞菌絲體形態(tài)結(jié)構(gòu)，影響對寄主的侵染能力，從而來發(fā)揮抑菌作用的。

內(nèi)吞標(biāo)志位點是一種大型蛋白復(fù)合體，可作為支架誘導(dǎo)膜皺紋或內(nèi)陷[42]。病原真菌的菌絲體生長受阻或形態(tài)發(fā)生畸變可能是細(xì)胞中的纖維素發(fā)生變化[43]。脂滴參與菌絲生長和致病力等表型[44]。本研究中，根據(jù)GO功能富集分析，內(nèi)吞標(biāo)志位點集合、內(nèi)吞標(biāo)志位點、纖維素分解代謝過程、纖維素結(jié)合、纖維素酶活性和脂滴均在上調(diào)DEGs主要富集的分類條目中。推測煙草通過調(diào)控菌體內(nèi)內(nèi)吞標(biāo)志位點、纖維素和脂滴相關(guān)編碼基因上調(diào)表達(dá)，進(jìn)而影響菌株的表型特征、菌絲生長和致病力等。

缺失脂質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白的突變體在生長、產(chǎn)孢和致病力等方面表現(xiàn)出了諸多缺陷[45]。致病真菌細(xì)胞壁對其毒力和致病力至關(guān)重要，可以保護菌株免受宿主防御機制的傷害[46]。單酚加氧酶是酪氨酸酶[47]，低活性的酪氨酸酶能降低菌株的褐變度[48]。酪氨酸酶是生物體中參與黑色素合成的關(guān)鍵酶[49]，缺乏黑色素生成的突變菌株喪失致病能力[50]。本研究中，根據(jù)GO功能富集分析，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運、細(xì)胞壁和單酚單加氧酶活性均在下調(diào)DEGs主要富集的分類條目中。推測煙草通過調(diào)控菌體內(nèi)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運、細(xì)胞壁和酪氨酸酶相關(guān)編碼基因下調(diào)表達(dá)，進(jìn)而影響菌株的孢子萌發(fā)、致病力和菌落顏色等。煙草具體調(diào)控哪些編碼基因差異表達(dá)來影響菌株的生長和致病力還需進(jìn)一步研究證實。

綜上所述，煙草浸提液對番茄晚疫病菌具有良好的化感抑制作用，其抑菌機理與干擾菌株生理生化代謝，破壞菌絲體形態(tài)結(jié)構(gòu)，影響菌體內(nèi)的基因表達(dá)有關(guān)。后續(xù)需進(jìn)一步明確煙草內(nèi)部抑菌活性物質(zhì)及差異基因的具體調(diào)控機制，最終開發(fā)出防治番茄晚疫病的有效植物源。