綠豆蛋白水解物對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)小鼠免疫活性的影響

胡錦瑞，劉 欣，刁靜靜，王長(zhǎng)遠(yuǎn)，

（1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 食品學(xué)院，黑龍江 大慶 163319；2.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué) 國(guó)家雜糧工程技術(shù)研究中心，黑龍江 大慶 163319）

綠豆含有豐富的蛋白質(zhì)[1]、多糖[2]、多酚和生物堿[3]等活性物質(zhì)，是一種具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的豆類作物?！侗静菥V目》中記載了綠豆具有清熱解毒、消暑利尿的作用。有研究表明，綠豆還具有抗腫瘤作用[4]。目前，綠豆在我國(guó)和其他亞洲國(guó)家常用來(lái)制作粥和豆芽，在食品工業(yè)中，綠豆被用來(lái)生產(chǎn)淀粉和粉絲[5-6]。但是綠豆淀粉加工副產(chǎn)物卻很少被高值化利用，綠豆淀粉副產(chǎn)物中含有約20%的蛋白質(zhì)，且必需氨基酸比例較為全面[7]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)食源性蛋白水解物具有多種生物活性功能，可提高機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)能力[8-10]、抗氧化能力[11]、降血壓能力[12]等。調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力是預(yù)防感染、癌癥等多種疾病的重要措施之一，有研究表明，乳蛋白水解物、酪蛋白水解物等動(dòng)物源蛋白肽具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力的作用[13-14]，近年來(lái)的研究還發(fā)現(xiàn)，大豆、玉米等植物源蛋白肽也可改善機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)能力[15-17]。黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院糧食、油脂及植物蛋白工程課題組前期從細(xì)胞水平探討了綠豆肽的免疫調(diào)節(jié)作用，但綠豆肽在機(jī)體中對(duì)免疫低下的小鼠是否具有調(diào)節(jié)免疫功能的作用及其機(jī)制還不甚清楚。

本研究以綠豆淀粉加工副產(chǎn)物為原料，采用生物酶法制備綠豆蛋白水解物（MBPH），分析綠豆蛋白水解物對(duì)環(huán)磷酰胺免疫低下小鼠的免疫器官、脾臟病理學(xué)狀態(tài)、乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶活性、細(xì)胞因子等指標(biāo)的影響，以闡明綠豆蛋白水解物對(duì)免疫低下小鼠機(jī)體的保護(hù)作用。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

綠豆蛋白（蛋白含量80.02%），購(gòu)于山東招遠(yuǎn)溫記食品有限公司；Alcalase 2.4 L，丹麥諾維信公司；環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CY），購(gòu)于山西保通藥業(yè)有限公司；鹽酸左旋咪唑（Levamisole hydrochloride,LH），山東仁和堂制藥有限公司；白介素-10（Interleukin-10，IL-10）、白介素-6（IL-6）、TNF-α、干擾素γ（Interferon gamma，IFN-γ）、IgM（Immunoglobulin M）、IgG（Immunoglobulin G）、乳酸脫氫酶（LDH）商品試劑盒、酸性磷酸酶（ACP）試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量（22±2）g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供。將所有小鼠置于實(shí)驗(yàn)飼養(yǎng)室條件（（24±1）℃，50%～60%濕度，正常晝夜循環(huán)），自由飲水。

1.3 試驗(yàn)儀器

細(xì)胞培養(yǎng)箱，上海璽恒實(shí)業(yè)有限公司；紫外分光光度計(jì)，美國(guó)Thermo公司；超凈工作臺(tái)，鄭州宏朗儀器設(shè)備有限公司；超速冷凍離心機(jī)，湖南湘儀有限公司；電子顯微鏡，深圳市博視達(dá)光學(xué)儀器有限公司；高效液相色譜分析儀，美國(guó)Agilent公司；超聲波破碎儀，美國(guó)Sonics & Materials Inc.公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 MBPH的制備及分子量分布參照刁靜靜等[18]的方法制備綠豆蛋白水解物，綠豆蛋白（10%，W/W）經(jīng)堿性蛋白酶水解3 h，酶底物比為2∶100。堿性蛋白酶的水解條件為：pH值9.0，50℃。

MBPH分子量分布采用刁靜靜等[18]的研究方法。采用高效液相色譜儀進(jìn)行MBPH分子量分布分析。色譜分析條件為：色譜柱TSKgel 2000SWXL（300.0 mm×7.8 mm），流動(dòng)相為乙腈/水/三氟乙酸（45∶55∶0.1，V/V），洗脫流速0.5 mL/min，柱溫恒定為30℃。以細(xì)胞色素（MW12 500 u）、抑肽酶（MW6 500 u）、桿菌肽（MW1 450 u）、乙氨酰氨-乙氨酰氨-精氨酸（MW451 u）和乙氨酰氨-乙氨酰氨-乙氨酸（MW189 u）為標(biāo)準(zhǔn)品作相對(duì)分子質(zhì)量的校正曲線，得到保留時(shí)間、峰面積、高度和含量，利用回歸方程計(jì)算MBPH的相對(duì)分子質(zhì)量分布。

1.4.2 動(dòng)物分組及樣本的采集72只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，隨機(jī)分成6組，分別為正常組（空白對(duì)照組，NC）、免疫抑制組（模型組，MC）、綠豆蛋白（mung bean protein，MBP）處理組（對(duì)照組）、100 mg/kg MBPH處理組、300 mg/kg MBPH處理組、500 mg/kg MBPH處理組。實(shí)驗(yàn)小鼠12只/籠，飼養(yǎng)于SPF級(jí)動(dòng)物房，12 h/12 h晝夜循環(huán)光照，保持飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生。分組后，每2 d測(cè)量1次小鼠體質(zhì)量，記錄各組小鼠體質(zhì)量變化情況。前3 d，除正常組外，其余各組每隔1 d注射40 mg/kg體質(zhì)量的CY，正常組注射等劑量的生理鹽水。在4～21 d，正常組和模型組口服給予40 mg/kg體質(zhì)量的蒸餾水，其余4組分別口服給予300 mg/kg MBP和100、300、500 mg/kg MBPH。末次處理24 h后，稱質(zhì)量，頸椎脫臼處死小鼠。

1.4.3 MBPH對(duì)小鼠免疫器官的影響參照WANG等[19]的研究方法，頸椎脫臼處死小鼠，取脾臟、胸腺等免疫器官，稱其濕質(zhì)量，并按照公式（1）計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)。

1.4.4 脾臟組織蘇木精-伊紅（H&E）染色取10%甲醛溶液固定后的小鼠脾臟組織塊（約0.5 cm×0.5 cm×0.3 cm），經(jīng)脫水、石蠟包埋后，用冷凍切片機(jī)將脾臟組織切成5 μm厚的塊，然后進(jìn)行H&E染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察。

1.4.5 MBPH對(duì)小鼠血液指標(biāo)的影響小鼠在末次處理24 h后，以乙二胺四乙酸鈉為抗凝劑，于處死當(dāng)日經(jīng)眼眶采血50 μL。采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀測(cè)定紅細(xì)胞（red blood cell，RBC）、白細(xì)胞（white blood cell，WBC）和血小板（patelet，PLT）等指標(biāo)。

1.4.6 MBPH對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率的影響采用LI等[20]的研究方法進(jìn)行測(cè)定。末次給藥處理后，向各處理組小鼠腹腔注射1 mL 20%雞紅細(xì)胞，并輕揉腹部。用2 mL預(yù)冷PBS沖洗腹腔，得到小鼠腹腔巨噬細(xì)胞。然后將1 mL富含腹膜細(xì)胞的灌洗液涂于載玻片上，37℃孵育30 min。隨后用PBS洗滌載玻片，采用丙酮和甲醇溶液（1∶1，V/V）固定，4% Giemsa染色10 min。計(jì)算100個(gè)巨噬細(xì)胞消耗的雞紅細(xì)胞數(shù)，按下式計(jì)算吞噬率。

1.4.7 MBPH對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖率的影響脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)參照WANG等[19]的方法。無(wú)菌環(huán)境下取出小鼠脾臟，置于冷磷酸鹽緩沖液中，剪碎后過(guò)0.074 mm醫(yī)用紗布，收集得到脾細(xì)胞懸液，1 000 r/min離心5 min，取細(xì)胞沉淀，加4 mL紅細(xì)胞裂解液吹打均勻，室溫靜置5 min后，1 000 r/min離心5 min，取沉淀采用4 mL PBS洗滌3遍，重懸于含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h，去除貼壁細(xì)胞，懸浮的細(xì)胞為脾淋巴細(xì)胞，然后按5.0×106個(gè)/孔接種于6孔板進(jìn)行培養(yǎng)。將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的脾細(xì)胞按照1.0×104個(gè)/孔密度接種于96孔板，按照試驗(yàn)分組進(jìn)行培養(yǎng)12 h后，采用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞增殖，將各組細(xì)胞加入20 μL WST-1溶液，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育2 h后，將96孔板置于搖床上搖動(dòng)1 min，以充分混勻待檢測(cè)體系，在波長(zhǎng)450 nm處測(cè)定吸光值，計(jì)算脾淋巴細(xì)胞增殖率。

1.4.8 MBPH對(duì) 脾 臟LDH和ACPase活 性 的 影響按照1.4.7處理方法無(wú)菌取出小鼠脾臟，用聚四氟乙烯玻璃勻漿器勻漿，制成脾臟勻漿液，然后離心10 min，收集上清液，分別采用ELISA試劑盒測(cè)定脾臟組織勻漿中的ACPase和LDH含量。

1.4.9 MBPH對(duì)小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ和免疫球蛋白的影響血清TNF-α、IL-6、IL-10、IFN-γ和IgM、IgG采用 酶聯(lián)免 疫吸附 試驗(yàn)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。各處理組小鼠經(jīng)眼眶采血，3 000 r/min離心10 min，4℃吸取上層血清，使用酶標(biāo)儀在490 nm處測(cè)定吸光度。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

采用Statistix 8（分析軟件，St Paul，MN）進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，平均數(shù)之間顯著性差異（P＜0.05）通過(guò)Turkey HSD進(jìn)行多重比較分析。并采用SigmaPlot 13.0作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 MBPH分子量分布

根據(jù)分子量標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間和分子量繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）得出，＜3 000 u的MBPH約占96.64%。分子量＞3 000 u肽段約占3.36%。LI等[20]研究發(fā)現(xiàn)，低分子量的肽段具有較高的細(xì)胞增殖能力；REN等[21]研究表明，低分子量的水解物對(duì)小鼠具有較好的免疫調(diào)節(jié)作用。前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小分子MBPH在體外可顯著提高細(xì)胞的免疫活性。因此，MBPH在體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)作用將采用＜3 000 u肽段進(jìn)行研究。

圖1 MBPH分子量分布Fig.1 Molecular weight distribution of MBPH

2.2 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠體質(zhì)量及免疫器官的影響

MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠體質(zhì)量的影響如圖2所示。

圖2 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠體質(zhì)量的影響Fig.2 Effect of MBPH on body weight in immunosuppressive mice

由圖2可知，各處理組小鼠的初體質(zhì)量差異不顯著，終體質(zhì)量、體質(zhì)量增長(zhǎng)率變化差異顯著，模型組體質(zhì)量增長(zhǎng)率顯著低于其他處理組（P＜0.05）。與模型組相比，MBPH低、中、高劑量組的小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率有不同幅度增長(zhǎng)，且均高于模型組（P＜0.05）。YU等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物模型試驗(yàn)中，采用CY具有一定的免疫抑制作用，會(huì)引起機(jī)體體質(zhì)量、免疫器官指數(shù)等指標(biāo)的下降。MBPH低劑量組與MBP處理組差異不顯著，本研究結(jié)果表明，MBPH可改善免疫抑制小鼠的體質(zhì)量。

胸腺和脾臟是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，免疫器官指標(biāo)可在一定程度上反映機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)水平。從圖3可以看出，與對(duì)照組相比，模型組的免疫器官指數(shù)顯著降低（P＜0.05）。不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)MBPH處理組的胸腺和脾臟指數(shù)較模型組均發(fā)生了顯著改善（P＜0.05）。MBP處理組與MBPH高劑量組相比，差異顯著（P＜0.05）。目前已有研究證實(shí)，油茶籽粕蛋白、麥麩蛋白、大豆蛋白等食源性蛋白質(zhì)來(lái)源的蛋白肽具有促進(jìn)免疫器官發(fā)育的作用。而且WANG等[19]研究發(fā)現(xiàn)，牡蠣蛋白水解物能呈劑量性提高脾臟和胸腺指數(shù)，這與本研究結(jié)果一致。以上研究結(jié)果表明MBPH可通過(guò)修復(fù)CY誘導(dǎo)的免疫器官損傷來(lái)改善免疫功能。

圖3 MBPH對(duì)免疫功能抑制小鼠免疫器官指數(shù)的影響Fig.3 Effects of MBPH on organ coefficients andmorphologies in immunosuppressive mice

2.3 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠脾臟組織結(jié)構(gòu)變化的影響

BPH對(duì)CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠脾臟組織病理學(xué)影響如圖4所示。

圖4 MBPH對(duì)CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠脾臟組織病理學(xué)影響Fig.4 Histopathological effects of MBPH on spleen in immunosuppressive mice

由圖4可知，正常組小鼠脾臟紅、白髓邊緣界限清楚，脾索網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)良好；模型組小鼠脾臟紅髓與白髓邊界模糊。這與SALVA等[23]研究一致，環(huán)磷酰胺會(huì)引起脾臟病理性變化。MBPH處理組小鼠脾臟對(duì)CY誘導(dǎo)小鼠的脾臟病理狀態(tài)有了較好的改善，隨著劑量的增加，小鼠脾臟紅髓和白髓之間的邊緣逐漸清晰，中、高劑量組脾臟與NC組差異不顯著。這與YAO等[24]和SAINT-SAUVEUR等[25]研究結(jié)果一致，免疫活性肽可提高免疫系統(tǒng)器官指數(shù)，修復(fù)脾臟的病理組織結(jié)構(gòu)。

2.4 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠血液指標(biāo)的影響

表1是MBPH對(duì)CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠血液指標(biāo)的影響。血液中包含大量的免疫細(xì)胞，是免疫應(yīng)答發(fā)生的重要場(chǎng)所之一。血液中的免疫細(xì)胞和免疫活性物質(zhì)共同構(gòu)成機(jī)體的血液免疫屏障，在機(jī)體防御外界病原體入侵和發(fā)揮免疫防御方面發(fā)揮著重要的作用。由表1可知，模型組小鼠血液中RBCs、WBCs、PLTs均顯著下降（P＜0.05）。RBCs和WBCs均被證實(shí)與機(jī)體的免疫功能相關(guān)，RBC數(shù)目下降會(huì)影響免疫器官的功能，WBC是觀察、診斷免疫低下疾病和急性感染性疾病的重要指標(biāo)。PLT具有介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、激活機(jī)體免疫系統(tǒng)、促進(jìn)傷口愈合的作用，因此，模型組的結(jié)果表明CY可引起機(jī)體血液屏障的損害，降低機(jī)體免疫防御能力；MBPH處理組可顯著提升血液指標(biāo)中RBCs、WBCs、PLTs和Hb水平（P＜0.05），且RBCs和Hb水平和正常組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，MBPH對(duì)CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠的免疫功能具有顯著改善作用。

表1 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠血液指標(biāo)的影響Tab.1 Effect of MBPH on blood indexes in immunosuppressive mice

2.5 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率的影響

MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響如圖5所示。

圖5 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率的影響Fig.5 Effect of MBPH on macrophage phagocytosis in immunosuppressive mice

巨噬細(xì)胞是一種來(lái)源于單核細(xì)胞的吞噬細(xì)胞，它既參與非特異性免疫，又參與特異性免疫。外源刺激可激活巨噬細(xì)胞，從而引起宿主的免疫反應(yīng)。與NC組比較，CY誘導(dǎo)組腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率受到顯著抑制；MBPH組則顯著提高了CY誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率（P＜0.05），尤其是高劑量MBPH組的吞噬率與NC組差異不顯著（P＞0.05）。這與YU等[22]研究結(jié)果一致，低分子量蛋白水解物可通過(guò)增加小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率來(lái)提高巨噬細(xì)胞的功能，其具有免疫增強(qiáng)性。

2.6 MBPH對(duì)免疫低下小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力的影響

MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖率的影響如圖6所示。

圖6 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖率的影響Fig.6 Effect of MBPH on the proliferation of splenic lymphocytes in immunosuppressive mice

脾臟淋巴細(xì)胞增殖是評(píng)價(jià)免疫增強(qiáng)的重要指標(biāo)。由圖6可知，與NC組相比，CY誘導(dǎo)組的脾臟淋巴細(xì)胞增殖顯著減少（P＜0.05），MBPH組的細(xì)胞增殖率則呈劑量性增加，高劑量組的細(xì)胞增殖率與NC組差異不顯著（P＞0.05）。SHIMIZU等[26]研究結(jié)果表明，低分子量的小肽具有促進(jìn)脾細(xì)胞增殖的作用。本研究結(jié)果表明，MBPH可能是通過(guò)增強(qiáng)脾臟淋巴細(xì)胞增殖，恢復(fù)細(xì)胞免疫功能，從而緩解CY誘導(dǎo)的小鼠免疫器官損傷，最終恢復(fù)細(xì)胞免疫功能。

2.7 MBPH對(duì)脾臟勻漿中ACPase和LDH活性的影響

ACPase活性反映巨噬細(xì)胞的活化程度。MBPH對(duì)脾臟ACPase活性的影響如圖7所示，模型組脾臟ACPase水平明顯低于正常組小鼠（P＜0.05）。MBPH處理組小鼠脾臟ACPase水平呈劑量依賴性升高（P＜0.05）。ACPase活性與機(jī)體的自然免疫能力密切相關(guān)，說(shuō)明MBPH能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)外源性病原體的吞噬和細(xì)胞內(nèi)降解能力。模型組小鼠脾臟LDH活性明顯低于正常對(duì)照組小鼠（P＜0.05）。本研究發(fā)現(xiàn)，CY能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡，降低巨噬細(xì)胞活力，抑制巨噬細(xì)胞的防御功能，導(dǎo)致免疫活性物質(zhì)LDH和ACPase降低。MBPH處理可顯著升高脾臟LDH水平。MBPH-H組與正常組LDH水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05），該結(jié)果與MA等[27]研究結(jié)論 一 致。CHALAMAIAH等[28]研 究也發(fā)現(xiàn)，免疫活性肽可提高機(jī)體的LDH和ACPase水平?；谝陨辖Y(jié)果，MBPH可增強(qiáng)免疫抑制小鼠的免疫活性。

圖7 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠脾臟ACPase和LDH活性的影響Fig.7 Effect of MBPH on the ACPase and LDH activities of the spleens in immunosuppressive mice

2.8 MBPH對(duì)免疫抑制小鼠細(xì)胞因子的影響

MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠血清細(xì)胞因子的影響如圖8所示。

圖8 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠血清細(xì)胞因子的影響Fig.8 Effect of MBPH on serum cytokines in immunosuppressive mice

從圖8可以看出，模型組的IL-10、IL-6、TNFα和IFN-γ等細(xì)胞因子水平均顯著低于正常組和其他處理組（P＜0.05），表明CY可顯著抑制機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。MBPH-M、MBPH-H組可顯著提高小鼠血清中TNF-α水平（P＜0.05），且與正常組差異不顯著（P＞0.05）。TNF-α可調(diào)控機(jī)體的多個(gè)系統(tǒng)，尤其在免疫和炎癥反應(yīng)及機(jī)體生長(zhǎng)代謝方面有著不可或缺的功能，本研究結(jié)果表明，MBPH可顯著改善CY誘導(dǎo)免疫低下小鼠的免疫和炎癥反應(yīng)。IL-10和IL-6具有刺激T、B淋巴細(xì)胞增殖、分化、成熟的生物學(xué)效應(yīng)，還具有促進(jìn)造血肝細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等增殖和活性增強(qiáng)等作用。從圖8可以看出，與正常組相比，模型組的IL-10和IL-6水平顯著下降（P＜0.05），MBPH-M、MBPH-H組可顯著提升IL-10和IL-6水平（P＜0.05）。IFN-γ是特異性免疫的調(diào)節(jié)劑，能誘導(dǎo)Th0型細(xì)胞分化成Th1型細(xì)胞，并且能激活巨噬細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞和清除胞內(nèi)病原體。與正常組相比，模型組的IFN-γ水平顯著下降（P＜0.05），這表明CY可以顯著抑制機(jī)體IFN-γ的分泌和表達(dá)；與模型組相比較，MBPH-M、MBPH-H組可顯著提高免疫低下小鼠的IFN-γ水平（P＜0.05），且和正常組無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。以上結(jié)果表明，MBPH中高劑量組可顯著改善CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠機(jī)體的細(xì)胞因子水平，提高機(jī)體的免疫活性。

2.9 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠IgM和IgG的影響

圖9反映的是MBPH對(duì)免疫抑制小鼠抗體水平的影響。IgM是機(jī)體初次免疫應(yīng)答中分泌最早的抗體，在抵御原發(fā)性感染的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。IgG是體液免疫應(yīng)答所產(chǎn)生的主要抗體，約占血清中抗體總量的80%，具有抗菌、中和病毒及免疫調(diào)節(jié)等生物活性。當(dāng)機(jī)體抗原部位處有足夠多的IgG分子，就能以適當(dāng)構(gòu)型聚集在抗原表面進(jìn)行激活補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)，進(jìn)一步增強(qiáng)IgG的免疫效能。由圖9可知，與正常組相比，模型組的IgM、IgG水平顯著下降（P＜0.05），這表明CY能顯著抑制機(jī)體IgM和IgG抗體的分泌和表達(dá)；與模型組相比，MBPH組可呈劑量依賴性改善免疫抑制小鼠的抗體水平，且差異顯著，其中MBPH-M、MBPH-H組顯著提高機(jī)體血清的IgM和IgG水平（P＜0.05），且IgG水平與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。這表明MBPH可顯著改善CY誘導(dǎo)免疫抑制小鼠機(jī)體的炎癥反應(yīng)，提高機(jī)體的免疫應(yīng)答能力。

圖9 MBPH對(duì)免疫能力抑制小鼠抗體水平的影響Fig.9 Effect of MBPH on antibody levels in immunosuppressive mice

3 結(jié)論與討論

本研究表明，低分子量MBPH可改善免疫抑制小鼠的體質(zhì)量，促進(jìn)免疫器官指數(shù)和脾臟狀態(tài)的恢復(fù)；MBPH還可通過(guò)改善免疫抑制小鼠的脾臟淋巴細(xì)胞增殖、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力，增強(qiáng)機(jī)體的免疫活性；通過(guò)血液細(xì)胞分析得出，MBPH能顯著改善免疫抑制小鼠的白細(xì)胞水平；MBPH還可提高血清中TNF-α、IFN-γ、IgM、IgG等水平，提高體液免疫活性。低分子量MBPH可作為功能性營(yíng)養(yǎng)成分應(yīng)用于食品領(lǐng)域。本文僅研究了綠豆蛋白水解物對(duì)機(jī)體免疫活性的影響，但MBPH是通過(guò)何種途徑提高機(jī)體免疫活性的作用機(jī)制還不清楚，今后需要開(kāi)展這方面的研究。