• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    華西牛胴體性狀GWAS 分析

    2022-11-17 03:52:46王澤昭李宏偉安炳星李海鵬徐凌洋蔡文濤張路培高會江李俊雅
    中國畜牧雜志 2022年11期
    關鍵詞:華西胴體表型

    高 翰,葛 菲,王澤昭,李宏偉,安炳星,李海鵬,徐凌洋,朱 波,蔡文濤,張路培,高 雪,高會江,陳 燕,李俊雅

    (中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所,北京 100193)

    我國是肉牛生產(chǎn)大國,也是牛肉消費大國[1]。隨著居民生活水平的提高,消費者對牛肉的需求持續(xù)增長,供需缺口呈擴大趨勢[2]。胴體性狀作為肉牛生產(chǎn)實踐中最重要的經(jīng)濟性狀之一,是典型的由多基因調(diào)控的數(shù)量性狀,遺傳調(diào)控機制復雜[3-4]。Risch 于1996 年首次提出全基因組關聯(lián)分析(Genome-Wide Association Study,GWAS)的應用[5],隨著測序技術的不斷發(fā)展和測序成本的降低,GWAS 被廣泛應用于研究家畜數(shù)量性狀的研究中[6-10]。利用GWAS,在肉牛中鑒定出了PLAG1[11]、IGF2[12]、MTPN[13]等影響胴體性狀的重要基因。大部分GWAS 都是基于單一性狀與SNPs 的關聯(lián)分析,即使同時分析多個相關表型,也只是逐個性狀分別進行單一性狀GWAS[14-15]。Bolormaa 等[16]研究指出,對于具有高估計育種值(Estimated Breeding Value,EBV)準確性的性狀,多性狀GWAS 的效力至少會與單性狀GWAS 的效力一樣高。如果性狀間高度相關,則多性狀分析相較于單性狀分析更具有優(yōu)勢。因為多性狀GWAS 只進行一次統(tǒng)計檢驗,同時考慮多個性狀的性狀內(nèi)和性狀間方差組分[17],降低了多重檢驗造成的誤差[18],提高了檢驗功效[19-20]和參數(shù)估計的精度[21]。因此,與逐個性狀與遺傳位點間的關聯(lián)分析相比,多個性狀聯(lián)合信息的多性狀GWAS 通常具有更好的關聯(lián)分析效果[22-24]。

    “華西?!笔侵袊r(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所歷經(jīng)40 余年潛心培育的肉牛新品種,2021 年通過國家畜禽遺傳資源委員會審定,并獲得國家畜禽新品種證書,其具有生長速度快、飼料轉化率高、凈肉率高、產(chǎn)肉和繁殖性能好、抗逆性強等特性。與國際同類型肉牛品種相比,“華西?!钡娜赵鲋?、屠宰率、凈肉率處于國際先進水平。本研究以內(nèi)蒙古烏拉蓋管理區(qū)建立的華西牛資源群體為研究對象,基于Illumina BovineHD 芯片基因型數(shù)據(jù),對胴體重(Carcass Weight,CW)、胴體長(Carcass Length,CL)、胴體胸深(Chest Depth of Carcass,CD)3 個胴體性狀分別進行單性狀與多性狀GWAS 分析,旨在挖掘影響華西牛胴體性狀的顯著SNPs 位點及候選基因,為全基因組選擇育種提供有效的分子標記,為進一步研究華西牛胴體相關性狀的潛在遺傳機制提供有價值的參考。

    1 材料與方法

    1.1 實驗數(shù)據(jù)收集 實驗動物群體選自中國農(nóng)業(yè)科學院北京畜牧獸醫(yī)研究所牛遺傳育種創(chuàng)新團隊在內(nèi)蒙古錫林郭勒盟烏拉蓋管理區(qū)組建的華西牛資源群體,該群體2008 年開始建立,每年進行擴群,并且使用Illumina BovineHD 芯片對每個個體進行基因分型。胴體重、胴體長和胴體胸深3 個胴體性狀表型數(shù)據(jù)嚴格按照GB/T 27643-2011《牛胴體及鮮肉分割》[25]的要求進行測定。

    1.2 表型處理和基因型質(zhì)控 對表型數(shù)據(jù)進行處理,包括剔除表型缺失值、三倍標準差以外的異常值。采用一般線性模型評估育肥場、屠宰場、屠宰年份、屠宰季節(jié)以及年齡對性狀影響的顯著性,將顯著的效應作為協(xié)變量加入到模型當中。利用PLINK 軟件[26]對群體進行主成分分析(Principal Components Analysis,PCA),使用R 包ggplot2 繪制群體PCA 圖。利用EIGENSTRAT計算各主成分是否具有顯著統(tǒng)計學意義,將達到顯著水平P<0.05 的主成分作為協(xié)變量加入到模型當中。使用PLINK 軟件對相應個體的基因型數(shù)據(jù)進行質(zhì)量控制,標準如下:剔除SNP 缺失率大于10%的個體以及檢出率低于90%、最小哈德溫伯格平衡小于1.0×10-6、最小等位基因頻率小于0.05 的SNPs 位點。最后,使用R包ASReml[27]中的多性狀動物模型計算各性狀之間的表型相關和遺傳相關。

    1.3 關聯(lián)統(tǒng)計分析

    1.3.1 單性狀GWAS 使用GEMMA 軟件[21]進行全基因組關聯(lián)分析,采用考慮親緣關系的混合線性模型(Linear Mixed Model,LMM),計算公式如下:

    式(1)中,y為所有個體表型性狀的n×1 向量;W為協(xié)變量矩陣,α為包括截距在內(nèi)對應系數(shù)的一列向量;x為標記基因型向量,β表示標記位點效應的大??;u為個體的隨機效應向量,u~N(0,KVg),K代表由SNP 標記計算出的已知的n×n遺傳關系矩陣,Vg為加性遺傳方差;ε代表n×1 隨機誤差向量,符合ε~N(0,IVe)分布,I代表n×n身份矩陣,Ve代表殘差組分。本次研究中主要利用Wald 測驗作為GWAS 分析顯著統(tǒng)計指標。

    1.3.2 多性狀GWAS 使用GEMMA 軟件[21]中的多性狀混合線性模型(Multivariate Linear Mixed Model,mvLMM)進行多個性狀表型值和SNP 標記的GWAS,計算公式如下:

    式(2)中,Y為n×t維表型矩陣,n是樣本數(shù)目,t是分析性狀個數(shù);W為n×c維協(xié)變量矩陣,A為c維相應系數(shù)行向量,c是包含截距項在內(nèi)的行變量個數(shù);x為n維當前檢驗SNP 的基因型指示變量列向量,β為n×t維不包括當前檢驗SNP 的剩余多基因效應矩陣;G~MN(0,Vg?K),K是由全基因組SNP 標記構建的基因組親緣關系矩陣,Vg是t×t維剩余多基因方差-協(xié)方差矩陣;E為n×t維誤差項矩陣,E~MN(0,Ve?I),Ve是t×t維誤差方差-協(xié)方差矩陣,I是單位矩陣。最終,全基因組上每個SNP 都能得到1 個一因多效Wald 統(tǒng)計量。應用Bonferroni 方法進行多重校正,確定染色體水平顯著性閾值為1/N,N 為用于分析的SNPs 數(shù)目。最后,用R 包ggplot2 繪制曼哈頓圖和QQ 圖。

    1.4 位點版本轉化及基因注釋 Illumina BovineHD 芯片中的SNPs 位置信息為Bos taurus UMD 3.1 版本,使用在線網(wǎng)站UCSC 中的liftover 工具(http://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgLiftOver/)將其轉化成最新的?;蚪M版本ARS-UCD 1.2。根據(jù)得到的顯著SNPs 位點的物理位置,利用Ensemble 在線數(shù)據(jù)庫的biomart 模塊(http://www.ensembl.org/biomart/)搜索每個顯著SNP位點上下游50 kb 區(qū)域尋找距離最近的候選基因,作為與目標性狀關聯(lián)的重要功能基因。

    2 結果

    2.1 主成分分析 由圖1 可知,實驗群體存在分層現(xiàn)象。利用EIGENSTRAT 計算發(fā)現(xiàn),有2 個達到P<0.05 顯著水平的主成分,因此在后續(xù)分析中將前2 個主成分作為協(xié)變量加入到模型中。

    圖1 群體主成分分析圖

    2.2 表型及基因型描述性統(tǒng)計

    2.2.1 表型值的描述性統(tǒng)計 分別對840 頭華西牛公牛的CW、CL 和CD 3 個性狀開展單性狀GWAS 與多性狀GWAS 分析。表1 為各性狀的原始表型描述性統(tǒng)計分析結果。3 個性狀的表型頻率分布圖見圖2,可以看出,各性狀的表型值基本都符合正態(tài)分布。此外,對各表型值進行了表型相關分析與遺傳相關分析(表2)。結果顯示,胴體重、胴體長、胴體胸深3 個性狀間均具有較高的表型相關(r>0.6);胴體長與胴體胸深具有中等遺傳相關性(r=0.339 2),胴體重與胴體長、胴體胸深具有強遺傳相關性(r>0.4)。

    表1 胴體重、胴體長、胴體胸深的描述性統(tǒng)計

    表2 性狀間表型及遺傳相關程度

    圖2 CW、CL 和CD 的頻率分布

    2.2.2 基因型的描述性統(tǒng)計 按篩選原則對基因型數(shù)據(jù)進行質(zhì)控后,共剩余607 198 個SNPs 標記。由圖3 可知,各染色體上的SNP 位點分布較均勻,可以用于華西牛群體的GWAS 分析。

    圖3 SNPs 標記在29 條染色體的分布情況

    2.3 GWAS 分析 使用GEMMA 軟件中考慮親緣關系的混合線性模型(LMM)對3 個性狀分別做單性狀GWAS 分析。曼哈頓和QQ 圖如圖4 所示,在CW 和CL 性狀中都沒有檢測到顯著的遺傳變異位點,僅在CD 性狀中發(fā)現(xiàn)了6 個顯著的SNPs 位點,分別位于4、7、10、23、24、25 號染色體上,共注釋到了5 個基因(表3)。

    表3 單性狀GWAS 和多性狀GWAS 基因注釋結果

    圖4 單性狀GWAS 曼哈頓和QQ 圖

    使用mvLMM 分別進行了CW-CL、CW-CD、CLCD、CW-CL-CD 4 個組合的多性狀GWAS 分析(圖5)。在CW-CL 組合的多性狀GWAS 中,發(fā)現(xiàn)1 個超過染色體顯著水平的SNP 位點,位于1 號染色體上,注釋到了1 個基因;在CW-CD 組合的多性狀GWAS 中,發(fā)現(xiàn)5 個超過染色體顯著水平的SNPs 位點,分別位于4、7、23、25 號染色體上,共注釋到3 個基因;在CL-CD組合的多性狀GWAS 中,發(fā)現(xiàn)2 個超過染色體顯著水平的SNPs 位點,分別位于4、25 號染色體上,注釋到了1 個基因;在CW-CL-CD 組合的多性狀GWAS 中,發(fā)現(xiàn)3 個超過染色體顯著水平的SNPs 位點,分別位于4、7、23 號染色體上,共注釋到3 個基因。合并多性狀GWAS 的4 個組合的結果發(fā)現(xiàn),有4 個SNPs 位點在多性狀GWAS 中被重復檢測到,其中Hapmap36353-SCAFFOLD29708_3468 在CW-CD、CL-CD、CW-CLCD 3 個組合中被重復檢測到,BovineHD0700018227和BovineHD2300004986均在CW-CD、CW-CL-CD 2個組合中被重復檢測到,BovineHD2500006960 在CLCD、CW-CD 2 個組合中被重復檢測到。去除重復位點,多性狀GWAS 共找到6 個一因多效的SNPs 位點。

    圖5 多性狀GWAS 曼哈頓和QQ 圖

    2.4 重要候選基因 對CW、CL、CD 3 個性狀分別進行單性狀GWAS 和不同性狀之間組合的多性狀GWAS結果進行匯總統(tǒng)計。結果得到,單性狀與多性狀GWAS共檢測到9 個與華西牛胴體性狀顯著相關的SNPs 位點,根據(jù)顯著SNPs 位點的物理位置,在這9 個顯著SNPs 位點上下游50 kb 的區(qū)間內(nèi)尋找距離最近的候選基因,共在8 個位點附近找到6 個候選基因,分別是突觸結合蛋白5L(Syntaxin Binding Protein 5 Like,STXBP5L)、磷酸二酯酶1C(Phosphodiesterase 1C,PDE1C)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子-1β(Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Gamma Coactivator 1-Beta,PPARGC1B)、(Metaxin 3,MTX3)、鈣調(diào)磷酸酶調(diào)節(jié)因子2(Regulator Of Calcineurin 2,RCAN2)、??康鞍?(Docking Protein 6,DOK6)。其中,PDE1C、PPARGC1B、RCAN23 個基因在單性狀GWAS 與多性狀GWAS 中被重復檢測到。

    由圖6 可知,單性狀與多性狀GWAS 重復檢測到的3 個顯著SNPs 位點分別是Hapmap36353-SCAFFOLD29708_3468、BovineHD2300004986 和Bovine HD2500006960。其中,單性狀GWAS 與多性狀GWAS中CW-CD、CL-CD 組合共同檢測到的BovineHD25000 06960 未注釋到相關基因。此外,存在不同策略檢測到的多個SNPs 位點注釋到同一個基因的情況,具體為:在CD 單性狀GWAS 檢測到的BovineHD0700018210 與CW-CD、CW-CL-CD 2 個多性狀GWAS 共同檢測到的BovineHD0700018227,同時注釋到基因PPARGC1B;CW-CD 多性狀GWAS 檢測到的BovineHD2300004985與單性狀GWAS 和CW-CD、CW-CL-CD 2 個多性狀GWAS 共同檢測到的BovineHD2300004986,同時注釋到基因RCAN2。PPARGC1B和RCAN2將作為后續(xù)重點關注的與胴體性狀關聯(lián)的重要候選基因。

    圖6 單性狀GWAS 與多性狀GWAS 結果韋恩圖

    3 討 論

    在肉牛產(chǎn)業(yè)中,胴體性狀被認為是影響肉牛生產(chǎn)的重要經(jīng)濟性狀,對于提高生產(chǎn)效率和效益起著至關重要的作用[28-29]。然而,肉牛胴體性狀的測定只能在個體屠宰后進行,這就導致胴體性狀的相關表型數(shù)據(jù)收集困難且成本高昂[30]。因此,闡明胴體性狀的遺傳調(diào)控機制,提供可靠的分子遺傳標記,可以對肉牛胴體相關性狀進行早期遺傳評估,從而降低育種成本,提高生產(chǎn)效益。

    GWAS 方法已經(jīng)廣泛應用于動植物復雜性狀的遺傳解析[31-33]。本研究基于Illumina BovineHD 芯片基因分型,對華西牛CW、CL、CD 3 個胴體性狀進行了關聯(lián)分析,綜合考慮單性狀和多性狀GWAS 分析得到的結果,共得到9 個顯著的SNPs 位點和6 個相關基因,分別是STXBP5L、PDE1C、PPARGC1B、MTX3、RCAN2和DOK6。其中,多性狀與單性狀策略共同鑒定到3 個基因,分別為PDE1C、PPARGC1B和RCAN2。PDE1C基因在小鼠胚胎早期發(fā)育過程中中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)遷移的神經(jīng)元細胞中表達[34]。在人類疾病的研究中,PDE1C基因的異常會導致兒童發(fā)育遲緩[35]。PPARGC1B基因是一種調(diào)控基因轉錄的共激活劑,對轉錄因子和核受體活動、脂肪氧化、糖酵解以及能量代謝等多種生物學過程具有調(diào)控作用[36-39]。Jiang 等[40]研究了秦川牛犢牛和成年發(fā)育階段牛脂肪組織中circRNA 的表達,發(fā)現(xiàn)circFUT10 在脂肪細胞增殖和分化中有重要作用,circFUT10 間接促進PPARGC1B的轉錄,然后調(diào)節(jié)細胞的增殖和分化,且PPARGC1B在成年牛脂肪組織中表達水平較高,說明該基因對胴體性狀的表型差異可能存在重要影響。在小鼠模型中的相關研究表明,RCAN2基因對體重調(diào)節(jié)有重要作用[41-43]。RCAN2在成纖維細胞、心臟、腦、肝臟和骨骼肌中表達,能夠抑制鈣調(diào)磷酸酶活性,在骨骼發(fā)育和維護中有重要作用[44]。由此可見,該基因可能是影響華西牛胴體性狀的重要候選基因。MTX3與DOK6是單性狀GWAS 分析中鑒定到的與CD 性狀相關的2 個特有基因。MTX3在蛋白質(zhì)轉運到線粒體這一生物過程中發(fā)揮重要作用[45-46]。DOK6能促進RET 介導的神經(jīng)突生長,可能在大腦發(fā)育或維護中發(fā)揮作用[47]。Jiao 等[48]對杜洛克豬群體進行GWAS 分析,提出DOK6基因為平均日采食量、育肥期日增重、活體背膘厚3 個重要經(jīng)濟性狀最有可能的候選基因之一。STXBP5L基因為CW-CL 組合的多性狀GWAS 中單獨鑒定到的基因,它在維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)[49]、囊泡運輸和胞吐作用抑制[50]等過程中發(fā)揮著重要作用。

    對單性狀GWAS 與多性狀GWAS 結果進行比較,結果發(fā)現(xiàn),在相同的顯著性閾值下,兩者檢測到的基因數(shù)目無明顯差別。但是單一性狀GWAS 分析中,CW、CL 性狀都沒有檢測到顯著SNPs 位點及相關基因。通過將CW 與CL、CD 兩兩組合進行多性狀GWAS,在CW-CL、CW-CD、CL-CD、CW-CL-CD 4 個不同組合中均檢測到了不同數(shù)目的顯著SNPs 位點和相關基因。同時,在單性狀GWAS 以及4 組多性狀GWAS 中,Hapmap36353-SCAFFOLD29708_3468、BovineHD070 0018227、BovineHD2300004986、BovineHD2500006960共4 個SNPs 位點,以及PDE1C、PPARGC1B、RCAN2共3 個基因被重復檢測到,推測認為這些位點及基因極大可能是潛在的一因多效位點和一因多效基因??傮w而言,多性狀GWAS 可以提高對位點的檢測效率和準確性,這與高進等[51]、Bolormaa 等[16]的研究結果相一致。在實際育種當中,CW、CL 和CD 的表型通常是同時被選擇的,由于多性狀GWAS 分析檢測到的SNPs 位點具有一因多效的優(yōu)越性,因此綜合考慮多性狀GWAS 分析在生物學和實際應用層面更有意義。

    4 結 論

    本研究基于Illumina BovineHD 高密度基因分型結果,利用840 頭華西牛胴體重、胴體長和胴體胸深表型數(shù)據(jù),采用單變量和多變量線性混合模型方法進行單性狀和多性狀的GWAS 分析,共檢測到9 個顯著關聯(lián)的SNPs 位點,注釋到STXBP5L、PDE1C、PPARGC1B、MTX3、RCAN2、DOK6共6個候選基因,其中PPARGC1B、RCAN2被不同方法檢測到的多個SNPs 位點同時注釋到,且參與體重調(diào)節(jié)、脂肪細胞增殖和分化等過程,推測其可能是影響胴體性狀的重要候選基因。

    猜你喜歡
    華西胴體表型
    影響豬胴體瘦肉率的因素及提高措施
    建蘭、寒蘭花表型分析
    百年精誠 譽從信來——走進四川大學華西眼視光之一
    在華西人與晚清軍事技術近代化
    華西追蹤:“戰(zhàn)時狀態(tài)”不見了
    內(nèi)洛爾公牛的飼料轉化率及其與胴體品質(zhì)、非胴體品質(zhì)和肉品質(zhì)的關系
    飼料博覽(2016年5期)2016-07-12 11:58:39
    GABABR2基因遺傳變異與肥胖及代謝相關表型的關系
    藍塘豬與長白豬正反交F1代胴體性狀和肉品質(zhì)的比較
    慢性乙型肝炎患者HBV基因表型與血清學測定的臨床意義
    72例老年急性白血病免疫表型分析
    国产午夜福利久久久久久| 国产免费福利视频在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 晚上一个人看的免费电影| 国产片特级美女逼逼视频| videossex国产| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲最大成人av| 亚洲自偷自拍三级| 热99在线观看视频| 国产精品福利在线免费观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 高清在线视频一区二区三区| 国产淫片久久久久久久久| 最近的中文字幕免费完整| 国产美女午夜福利| 久久久色成人| 色哟哟·www| 一个人观看的视频www高清免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 少妇熟女欧美另类| 大香蕉97超碰在线| 成人午夜高清在线视频| 视频中文字幕在线观看| 夫妻午夜视频| av一本久久久久| 国产 亚洲一区二区三区 | 久久久亚洲精品成人影院| 成人毛片60女人毛片免费| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲经典国产精华液单| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产在线男女| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成人美女网站在线观看视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产大屁股一区二区在线视频| 免费av毛片视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 在线观看av片永久免费下载| 国产av在哪里看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲自偷自拍三级| 免费大片18禁| 最后的刺客免费高清国语| 午夜爱爱视频在线播放| 99热这里只有是精品在线观看| 高清毛片免费看| 免费观看精品视频网站| 久久久久久久久久成人| 色网站视频免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 日韩欧美精品v在线| 一级毛片 在线播放| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 两个人视频免费观看高清| 99热这里只有是精品在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 免费av观看视频| 1000部很黄的大片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 一级黄片播放器| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久99精品国语久久久| 日韩成人av中文字幕在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| av在线亚洲专区| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 少妇熟女欧美另类| 特级一级黄色大片| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 高清欧美精品videossex| 亚洲人成网站高清观看| 精品熟女少妇av免费看| 激情五月婷婷亚洲| 91精品国产九色| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲三级黄色毛片| 午夜福利在线在线| 一级二级三级毛片免费看| a级毛色黄片| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲欧洲国产日韩| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产免费又黄又爽又色| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 激情 狠狠 欧美| 成年免费大片在线观看| 国产成人精品福利久久| 在线免费观看的www视频| 日本一二三区视频观看| 国产亚洲精品av在线| 亚洲av中文av极速乱| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| av福利片在线观看| 床上黄色一级片| 51国产日韩欧美| 尾随美女入室| 最新中文字幕久久久久| 亚洲精品日本国产第一区| 成年女人在线观看亚洲视频 | 欧美另类一区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 91精品一卡2卡3卡4卡| 黄片无遮挡物在线观看| 精品久久久久久久末码| 美女被艹到高潮喷水动态| 午夜日本视频在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 欧美精品国产亚洲| 日本黄色片子视频| 精品国产露脸久久av麻豆 | 日日啪夜夜爽| 精品熟女少妇av免费看| 久久久精品94久久精品| 99热这里只有是精品在线观看| 日本熟妇午夜| 亚洲精品乱久久久久久| 干丝袜人妻中文字幕| 九草在线视频观看| 国产男人的电影天堂91| 啦啦啦啦在线视频资源| av天堂中文字幕网| 国产亚洲最大av| 成人二区视频| 国产黄片美女视频| 男女国产视频网站| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲国产av新网站| 亚洲精品日本国产第一区| 国产又色又爽无遮挡免| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日日干狠狠操夜夜爽| av黄色大香蕉| 日日啪夜夜撸| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 夜夜爽夜夜爽视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久久久精品性色| 大香蕉久久网| 床上黄色一级片| 久久99热6这里只有精品| 黄色一级大片看看| 国产av不卡久久| 日本黄色片子视频| 亚洲欧美精品自产自拍| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 九九爱精品视频在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 精品一区在线观看国产| 99久久人妻综合| 国产老妇女一区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 天天一区二区日本电影三级| 日韩制服骚丝袜av| 麻豆乱淫一区二区| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 午夜激情久久久久久久| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 22中文网久久字幕| 午夜老司机福利剧场| 一级毛片aaaaaa免费看小| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜福利视频精品| 波多野结衣巨乳人妻| 国产 一区精品| 久久午夜福利片| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品无大码| 精品久久久久久久末码| 国产午夜精品论理片| 国产精品久久久久久精品电影| 麻豆成人午夜福利视频| 免费看光身美女| 精品国产三级普通话版| 亚洲国产最新在线播放| 别揉我奶头 嗯啊视频| av在线亚洲专区| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 欧美极品一区二区三区四区| 欧美激情久久久久久爽电影| 美女主播在线视频| 精品一区在线观看国产| 亚洲成人久久爱视频| 中文字幕av在线有码专区| 成年女人在线观看亚洲视频 | videos熟女内射| 亚洲欧美日韩东京热| 人人妻人人澡欧美一区二区| 丰满乱子伦码专区| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品熟女少妇av免费看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲精品久久午夜乱码| 色视频www国产| 亚洲性久久影院| 久久热精品热| 国产高清国产精品国产三级 | xxx大片免费视频| 一级av片app| 亚洲电影在线观看av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲精品,欧美精品| 日韩欧美精品免费久久| 91狼人影院| 久久久久久久久大av| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 精品欧美国产一区二区三| 欧美+日韩+精品| 日韩欧美三级三区| 国产精品蜜桃在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 97热精品久久久久久| 日韩成人伦理影院| 一边亲一边摸免费视频| 观看免费一级毛片| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲一区高清亚洲精品| 日韩人妻高清精品专区| 久久国内精品自在自线图片| 亚洲性久久影院| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲成人中文字幕在线播放| 青春草国产在线视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 综合色丁香网| 97超碰精品成人国产| 美女黄网站色视频| 99久久人妻综合| 国产黄频视频在线观看| 午夜激情欧美在线| 两个人的视频大全免费| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲在久久综合| 色哟哟·www| 极品少妇高潮喷水抽搐| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 国产探花极品一区二区| 国产精品三级大全| 国产色婷婷99| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲精品国产av蜜桃| 黄色配什么色好看| 国产 一区精品| 国产成人福利小说| 精品一区二区三区视频在线| 高清视频免费观看一区二区 | 亚洲高清免费不卡视频| 极品教师在线视频| 国内精品一区二区在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲综合色惰| 九九爱精品视频在线观看| av在线观看视频网站免费| av在线播放精品| 午夜福利在线观看吧| av福利片在线观看| 日韩视频在线欧美| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 欧美一区二区亚洲| videos熟女内射| 天美传媒精品一区二区| 美女主播在线视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 高清毛片免费看| 久久亚洲国产成人精品v| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久精品久久精品一区二区三区| 九九爱精品视频在线观看| 高清午夜精品一区二区三区| 麻豆国产97在线/欧美| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲美女视频黄频| 超碰av人人做人人爽久久| 精品一区二区免费观看| av在线天堂中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人亚洲精品一区在线观看 | 精品欧美国产一区二区三| 午夜视频国产福利| 日本与韩国留学比较| 亚洲高清免费不卡视频| 联通29元200g的流量卡| 亚洲精品自拍成人| 久久99热这里只频精品6学生| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 人妻夜夜爽99麻豆av| 乱人视频在线观看| 国产91av在线免费观看| 三级国产精品欧美在线观看| 嫩草影院入口| 国产成人精品福利久久| 69av精品久久久久久| 久久久久久久久久成人| 日本免费a在线| kizo精华| 国精品久久久久久国模美| 国产v大片淫在线免费观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产一区二区在线观看日韩| 精品欧美国产一区二区三| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 欧美人与善性xxx| 国产成人福利小说| 成年av动漫网址| 中文字幕av成人在线电影| 欧美激情在线99| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲国产精品sss在线观看| 18禁在线无遮挡免费观看视频| av线在线观看网站| 精品熟女少妇av免费看| 免费看美女性在线毛片视频| 国产在线一区二区三区精| 欧美三级亚洲精品| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 中文字幕免费在线视频6| 日本黄大片高清| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品国产三级国产专区5o| 女人久久www免费人成看片| 国产精品久久久久久精品电影| 成人av在线播放网站| 亚洲无线观看免费| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜免费激情av| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久久久伊人网av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 啦啦啦啦在线视频资源| 免费观看a级毛片全部| 啦啦啦啦在线视频资源| 91aial.com中文字幕在线观看| 久久久久网色| 午夜福利高清视频| 99热全是精品| 免费看a级黄色片| 少妇熟女欧美另类| 免费看a级黄色片| 99热6这里只有精品| 国产永久视频网站| 少妇人妻精品综合一区二区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产成人aa在线观看| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 不卡视频在线观看欧美| 久久精品久久精品一区二区三区| 色综合色国产| 国模一区二区三区四区视频| 国产午夜福利久久久久久| 日本一二三区视频观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 在线免费十八禁| 91久久精品电影网| 国产黄色视频一区二区在线观看| av在线观看视频网站免费| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 五月伊人婷婷丁香| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日本wwww免费看| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲怡红院男人天堂| 精品久久久久久久久久久久久| 一级毛片 在线播放| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产成人精品婷婷| 国产伦精品一区二区三区四那| 一级毛片电影观看| 高清视频免费观看一区二区 | 亚洲第一区二区三区不卡| 日本一二三区视频观看| ponron亚洲| 乱系列少妇在线播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品无大码| 又爽又黄无遮挡网站| av国产免费在线观看| 99热这里只有精品一区| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲在线自拍视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久精品免费免费高清| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 免费av观看视频| 超碰av人人做人人爽久久| 日韩成人伦理影院| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲性久久影院| av在线播放精品| 亚洲成色77777| 婷婷色综合www| 亚洲国产高清在线一区二区三| 深爱激情五月婷婷| 久久久a久久爽久久v久久| 日本免费在线观看一区| 欧美精品国产亚洲| 超碰97精品在线观看| 精品酒店卫生间| 国产亚洲最大av| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产不卡一卡二| 少妇熟女欧美另类| 亚洲第一区二区三区不卡| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 成人午夜精彩视频在线观看| 亚洲av男天堂| 一级av片app| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 能在线免费看毛片的网站| 久久精品国产亚洲av涩爱| 国产 亚洲一区二区三区 | 三级毛片av免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 青春草国产在线视频| 美女主播在线视频| 久久久a久久爽久久v久久| 床上黄色一级片| 国产亚洲精品av在线| 日日干狠狠操夜夜爽| av天堂中文字幕网| 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 晚上一个人看的免费电影| 精华霜和精华液先用哪个| 久久久久久久久久久丰满| 日韩欧美三级三区| a级一级毛片免费在线观看| 乱人视频在线观看| 国产黄片美女视频| 麻豆成人午夜福利视频| 国产一区二区三区av在线| 亚洲不卡免费看| 黑人高潮一二区| 久久久久久久久中文| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩国内少妇激情av| videossex国产| 两个人的视频大全免费| 免费看av在线观看网站| 亚洲怡红院男人天堂| 欧美97在线视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产探花极品一区二区| 婷婷色综合www| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 91精品国产九色| 我的女老师完整版在线观看| 国产在线男女| 免费观看无遮挡的男女| 大话2 男鬼变身卡| 女人被狂操c到高潮| 亚洲美女视频黄频| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲av一区综合| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| av女优亚洲男人天堂| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产综合懂色| 乱人视频在线观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 久久久久精品性色| 婷婷色综合大香蕉| 黄色欧美视频在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| av免费观看日本| 免费黄频网站在线观看国产| 亚洲精品国产成人久久av| 大香蕉久久网| av女优亚洲男人天堂| 国产真实伦视频高清在线观看| 直男gayav资源| 天堂√8在线中文| av在线亚洲专区| 成人无遮挡网站| 日韩av在线免费看完整版不卡| 午夜福利成人在线免费观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 天天一区二区日本电影三级| 在现免费观看毛片| 中文欧美无线码| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国国产精品蜜臀av免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲国产精品sss在线观看| 丝袜喷水一区| 久久综合国产亚洲精品| 久久久久久久久久人人人人人人| 秋霞在线观看毛片| 国产伦精品一区二区三区视频9| 亚洲三级黄色毛片| 天美传媒精品一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 高清日韩中文字幕在线| 97超碰精品成人国产| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲av中文av极速乱| 色尼玛亚洲综合影院| 色综合站精品国产| 欧美最新免费一区二区三区| 国产中年淑女户外野战色| 成人国产麻豆网| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 性插视频无遮挡在线免费观看| 在线观看av片永久免费下载| 高清毛片免费看| 97在线视频观看| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 欧美日韩综合久久久久久| 三级毛片av免费| 99久久精品热视频| 在线播放无遮挡| 亚洲va在线va天堂va国产| 2022亚洲国产成人精品| 老女人水多毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 成年女人看的毛片在线观看| 国产单亲对白刺激| 天堂√8在线中文| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 成人性生交大片免费视频hd| 少妇被粗大猛烈的视频| 夜夜爽夜夜爽视频| 青春草亚洲视频在线观看| 九草在线视频观看| 国产美女午夜福利| 亚洲美女视频黄频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 熟女电影av网| 嘟嘟电影网在线观看| 2018国产大陆天天弄谢| 少妇高潮的动态图| 午夜激情福利司机影院| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 啦啦啦韩国在线观看视频| av在线天堂中文字幕| 免费观看av网站的网址| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 夫妻午夜视频| 色网站视频免费| 欧美丝袜亚洲另类| 在线观看一区二区三区| 亚洲在线自拍视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 日韩人妻高清精品专区| 天堂影院成人在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| av在线蜜桃| 精品久久久久久成人av| 久久久精品欧美日韩精品| 免费观看在线日韩| 午夜福利成人在线免费观看| 男女国产视频网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 女人被狂操c到高潮| 国产av不卡久久| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | av网站免费在线观看视频 | 久久国产乱子免费精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 69av精品久久久久久| 日日啪夜夜撸| 最近最新中文字幕大全电影3| 视频中文字幕在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲最大成人av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 精品久久久久久久久亚洲| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 在线观看人妻少妇| 成人午夜高清在线视频| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲人成网站高清观看| 午夜福利视频精品| av播播在线观看一区| 美女被艹到高潮喷水动态| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| av国产免费在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品嫩草影院av在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频|