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    低溫處理不同時間對金花茶的影響

    2022-11-16 00:50:10朱江麗鄭衛(wèi)國宮彥章高育慧蔡金術(shù)
    湖南農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:金花低溫植株

    朱江麗,許 諾,鄭衛(wèi)國,宮彥章,高育慧,蔡金術(shù)

    (深圳文科園林股份有限公司,廣東省園林景觀與生態(tài)恢復(fù)工程技術(shù)研究中心,廣東 深圳 518026)

    金花茶(Camellia nitidssima)是山茶科山茶屬的灌木或小喬木,花色金黃艷麗,觀賞價值極高。山茶科植物的花色有紅、白、復(fù)色等多種顏色,但過去一直缺少黃花顏色。因此,金花茶的發(fā)現(xiàn)引起了國內(nèi)外植物學(xué)界和園藝學(xué)界的關(guān)注,尤其引起國際山茶學(xué)會的高度重視[1]。而且,金花茶具有較高藥用價值,是一種珍稀種質(zhì)資源,不僅被列為國家一級重點保護植物,而且被稱作“植物中的大熊貓”和“夢幻的金黃山茶”[2]。金花茶主要分布于我國廣西西南部的防城、龍州、寧明、大新及越南諒山等地。目前,關(guān)于金花茶的研究主要集中在引種栽培[3-4]與繁殖[5-6]、水肥管理[7-8]與病蟲害防治[9-10]、光照環(huán)境適應(yīng)性[11-12]和功能基因研究[13-14]等方面,而關(guān)于金花茶耐寒性及生理特性的研究鮮見報道。李吉濤等[15-16]比較了8 種金花茶的耐寒性及部分生理指標(biāo),發(fā)現(xiàn)其耐寒性依次為金花茶>龍州金花茶>毛籽金花茶>檸檬黃金花茶>凹脈金花茶>直脈金花茶>東興金花茶>平果金花茶;張武君等[17]研究發(fā)現(xiàn),廣西防城普通金花茶苗的引種地極端低溫不宜低于-6℃,否則應(yīng)采取防寒保護措施。筆者以廣西防城金花茶為材料,在0℃低溫環(huán)境下進行不同時長的處理,探究廣西防城金花茶抗寒脅迫生理相關(guān)機制,旨在為金花茶的引種栽培及抗寒育種提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    以福建龍巖基地提供的普通廣西防城金花茶1.5~2.0 a 齡幼苗為試材。

    1.2 試驗方法

    選取長勢基本一致,株高為45~50 cm 的營養(yǎng)袋苗置于遮陰大棚中恢復(fù)生長1 個月,期間進行常規(guī)水分管理。低溫處理在恒溫氣候箱中進行,溫度設(shè)為0℃,處理時間為3、6、9、12、15、18 d,以自然溫度處理為對照,每個處理6 株植物,處理完畢后選取植物頂部4~5 片葉進行生理指標(biāo)測定。

    1.3 測定指標(biāo)及方法

    細胞傷害率(CIR)測定:將經(jīng)過不同時間低溫處理的葉片剪成邊長1 cm 的小塊,用電子天平稱取0.1 g,先用自來水沖洗干凈,然后用蒸餾水沖洗2 遍,晾干后放入裝有10 mL 蒸餾水的試管中,蓋上試管塞浸泡15 h 后用雷磁DDS-11C 型電導(dǎo)率儀測定初電導(dǎo)率值R0,然后在沸水浴中煮沸30 min,冷卻至室溫后測定終電導(dǎo)率值R1,以不經(jīng)低溫處理的植物葉片的電導(dǎo)率為對照(RCK),各處理細胞傷害率計算公式為:CIR(%)=(R0-RCK)/(R1-RCK)×100。

    丙二醛(MDA)、可溶性糖(SS)、蛋白質(zhì)(SP)含量及SOD、POD 活性采用南京建成生物研究所提供的試劑盒測定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    采用Excel 軟件和SPSS 25.0 軟件進行數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計分析,利用鄧肯法檢驗不同處理之間的差異性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 低溫脅迫對金花茶植株形態(tài)的影響

    由表1 可知,不同時長低溫脅迫后,金花茶植株的形態(tài)發(fā)生了變化;低溫處理3 d 時,植株葉片有冰凍現(xiàn)象,但顏色正常;低溫處理6~9 d 時,植株從基部向上2/3 的葉片明顯失水、卷曲,基部葉片沒有明顯變化;低溫處理12~18 d 時,整株葉片失水明顯,葉片干枯卷曲。低溫處理后將植株放置于大棚中恢復(fù)生長3 周后觀察,低溫處理3 d 的植株可恢復(fù)正常生長狀態(tài);低溫處理6~9 d 的植株不可恢復(fù)正常生長狀態(tài),且植株基部葉片也出現(xiàn)卷曲失水癥狀,樹葉部分掉落,有的甚至整株死亡;低溫處理12~18 d 的植株不可恢復(fù)正常生長狀態(tài),植株整株死亡。

    表1 低溫脅迫下金花茶形態(tài)變化

    2.2 低溫脅迫對金花茶葉片CIR 的影響

    從圖1 可以看出,不同時長低溫脅迫后,金花茶葉片CIR 先由3 d 的4.07%急劇上升到6 d 的71.64%,然后從6 d 開始到18 d 保持在68.03%~72.10%。除對照外,低溫處理3 d 時CIR 最小,為4.07%,低溫處理15 d 時CIR 最高,為72.10%。方差分析結(jié)果顯示,除低溫處理3 d 與對照差異不顯著(P<0.05)外,低溫處理6~18 d 后植株的CIR 值均顯著高于對照(P<0.05),表明低溫處理時間超過6 d 時,金花茶葉片細胞膜受到了嚴重傷害。

    圖1 低溫脅迫對金花茶葉片CIR 的影響

    2.3 低溫脅迫對金花茶葉片MDA 含量的影響

    低溫使植物產(chǎn)生過氧化產(chǎn)物,MDA 是常用的膜脂過氧化指標(biāo)。由圖2 可知,低溫處理時間的延長能促進金花茶葉片MDA 含量的積累,處理時間越長,MDA積累的越多;對照處理植株的MDA 含量最低,為13.84 nmol/g;低溫處理18 d 時植株的MDA 含量最高,為41.07 nmol/g,是對照的2.97 倍。方差分析結(jié)果顯示,除低溫處理3 d 與對照無顯著差異外,其他各處理均與對照差異顯著(P<0.05),表明隨著低溫處理時間的延長,金花茶葉片細胞受傷害程度也越大。

    圖2 低溫脅迫對金花茶葉片MDA 含量的影響

    2.4 低溫脅迫對金花茶葉片保護酶活性的影響

    由圖3 可知,金花茶葉片SOD 活性隨著低溫處理時間的延長先增加后降低,在處理0~15 d 時,SOD活性一直呈現(xiàn)增加趨勢;在15~18 d 時,SOD 活性呈現(xiàn)降低趨勢;對照處理植株葉片的SOD 活性最低,為1 759.56 U/g;低溫處理15 d 時植株葉片的SOD 活性最高,為2 506.26 U/g,較對照增加了42.44%。方差分析結(jié)果顯示,低溫處理3 d 植株葉片的SOD 活性與對照差異不顯著(P>0.05),而低溫處理6~18 d 時,植株葉片的SOD 活性顯著高于對照(P<0.05)。

    圖3 低溫脅迫對金花茶葉片SOD 活性的影響

    由圖4 可知,金花茶葉片POD 活性隨著低溫處理時間的延長呈現(xiàn)出先降低后增加的趨勢,處理0~15 d 時,POD 活性呈現(xiàn)出降低趨勢,處理15~18 d 時呈現(xiàn)出增加趨勢;對照處理植株葉片的POD 活性最高,為382.41 U/g;低溫處理15 d 時植株葉片的POD 活性最低,為161.11 U/g,較對照下降了57.87%。方差分析結(jié)果顯示,低溫處理與對照間差異均達顯著水平(P<0.05)。

    圖4 低溫脅迫對金花茶葉片POD 活性的影響

    2.5 低溫脅迫對金花茶葉片滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量的影響

    由圖5 可知,低溫脅迫時間的延長能增加金花茶葉片SS 含量,且在0~12 d 時,SS 含量增加速度較快,在12~18 d 時,SS 含量增加速度減緩;對照處理植株葉片的SS 含量最低,為59.19 mg/g;低溫處理18 d時植株葉片的SS 含量最高,為162.8 mg/g,是對照的2.75 倍。方差分析結(jié)果顯示,低溫處理與對照間差異均達顯著水平(P<0.05)。

    圖5 低溫脅迫對金花茶葉片SS 含量的影響

    由圖6 可知,金花茶葉片SP 含量隨著低溫處理時間的延長呈現(xiàn)出上升趨勢,且上升速度緩慢;對照SP 含量最低,為0.21 mg/mL,低溫處理18 d 時SP 含量最高,為0.36 mg/mL,是對照的1.71 倍。除低溫處理3 d 與對照差異不顯著外,其他處理與對照差異均顯著(P<0.05)。

    圖6 低溫脅迫對金花茶葉片SP 含量的影響

    3 討論與結(jié)論

    植物受到低溫脅迫時,細胞內(nèi)代謝平衡被破壞,自由基大量積累,破壞了膜系統(tǒng),從而引起電解質(zhì)外滲、細胞傷害率增大等生理代謝[18-21]。MDA 含量是植物抗逆生理研究的一個常用指標(biāo),可以反映植物膜系統(tǒng)的受傷程度[22]。MDA 含量的增加表明植物細胞膜透性的增加。該研究中,金花茶葉片細胞傷害率和MDA 含量在低溫處理3 d 時與對照的差異均不顯著,說明3 d 的低溫處理未對細胞膜系統(tǒng)造成損害;而低溫處理6~18 d 時,金花茶葉片細胞的傷害率和MDA含量均與對照產(chǎn)生顯著的差異,說明低溫處理6~18 d已對金花茶葉片細胞膜造成嚴重的損傷。

    SOD 和POD 是植物體內(nèi)保護酶系統(tǒng)的重要組成部分,它們有一定的自我調(diào)節(jié)功能,可以清除因低溫脅迫而產(chǎn)生的過多活性氧,這是機體適應(yīng)低溫環(huán)境的一種應(yīng)激保護機制。有的植物SOD 和POD 的調(diào)節(jié)能力強,因而可以很好地保護細胞膜結(jié)構(gòu),增強植株的抗逆能力,提高植株的抗逆性[23]。該研究中金花茶葉片SOD 活性在低溫處理0~15 d 時,隨著時間的延長而增加,在低溫處理15~18 d 時隨著時間的延長而降低,表明在可耐受的低溫處理時間內(nèi),金花茶葉片可通過提高SOD 活性來增強抗寒能力,維持細胞的正常生理功能,但當(dāng)?shù)蜏靥幚頃r間達到極限時,細胞的組織結(jié)構(gòu)會遭受破壞,進而導(dǎo)致SOD 活性降低。而葉片中POD 活性隨著低溫脅迫時間的延長呈先下降后上升趨勢,且各處理與對照間差異均顯著,表明POD 活性對低溫時間的延長非常敏感,低溫處理時間的延長使葉片中POD 活性受到抑制。

    SS 是植物光合作用和呼吸作用等重要生命活動的能源物質(zhì),可增加細胞的保水能力,調(diào)節(jié)細胞滲透壓,降低細胞質(zhì)冰點,提高植物抗寒能力,是細胞內(nèi)的重要滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)[24]。該研究中,隨著低溫脅迫時間的延長,SS 含量升高,且各處理與對照差異顯著,但是低溫處理12、15、18 d 這3 個處理間無顯著差異,說明金花茶葉片受到低溫脅迫時,低溫時間越長SS 含量越高,但低溫時間延長到一定程度時,SS 含量變化不明顯。

    SP 有助于增強細胞持水力,保護原生質(zhì)膜結(jié)構(gòu),提高細胞液濃度和滲透勢,也是細胞內(nèi)的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。該研究中,SP 含量隨著低溫脅迫時間的延長而增加,且低溫處理3 d 時SP 含量與對照差異不顯著,低溫處理6~18 d 時SP 含量與對照差異顯著,說明金花茶葉片可通過增加SP 含量來調(diào)節(jié)細胞滲透壓,低溫處理時間超過6 d 時,SP 含量顯著增加以抵抗低溫逆境,這與楊鴻基等[25]的研究結(jié)果一致。

    綜上所述,金花茶植株在0℃低溫脅迫時間不超過3 d 時,受凍不明顯,室溫下能恢復(fù)生長,且生理指標(biāo)變化與對照相比大多不顯著;低溫脅迫時間為6~9 d 時,植株受凍明顯,基部以上2/3 葉片失水卷曲,且部分植株不可恢復(fù)生長而死亡;低溫脅迫時間為12~18 d 時,植株受凍嚴重,葉片基本全部失水卷曲,且植株不可恢復(fù)生長而全部死亡,同時葉片生理指標(biāo)也發(fā)生顯著變化。因此,金花茶在0℃下最長耐受時間為3 d。該試驗低溫處理時間設(shè)置以3 d 為一階段,實際生產(chǎn)中低溫脅迫時間可能為1~2 d 或4~5 d,其耐寒形態(tài)和生理指標(biāo)變化有待進一步深入研究。

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