銀杏葉藥物成分測定及數(shù)量遺傳分析

●張婷婷（吉林省藥品檢驗研究院 吉林 長春 130033）

銀杏是典型的銀杏科植物，其葉片可以在未完全呈現(xiàn)綠色前采摘、晾干，作為藥物[1]。藥性平和，味道同時具有甘、澀、苦等特征，藥效包括平喘、斂肺、止咳，且有良好的活血化瘀作用，經(jīng)常被用于治療冠心病、心絞痛等心臟類疾病，對于虛火引發(fā)的肺病也有很好的治療效果[2]。這主要是銀杏葉中的黃酮、內(nèi)酯成分在發(fā)揮作用。銀杏類藥物對心臟、肺部疾病的治療效果顯著高于其他同類型藥物。隨醫(yī)學技術發(fā)展，銀杏類藥物在各類醫(yī)療臨床試驗中不斷取得突破，其藥物成分的毒性得到抑制、治療性得到增強，銀杏藥物在疾病治療中發(fā)揮良好效果[3]。本試驗對銀杏葉藥物主要成分及數(shù)量遺傳進行分析，以期為銀杏類藥物在臨床上的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗資料

收集國內(nèi)13個種源，87個無性系，在山東及藥鄉(xiāng)林場2點聯(lián)合選擇。為避免接穗年齡和位置效應的干擾，將收集材料先嫁接至根系發(fā)達，對環(huán)境適應性較強，不攜帶病毒的實生苗上，選用1年生接穗雙舌接定植，植株行距控制在1.0 m×0.3 m。共3個試驗點，局部控制利用隨機分組技術，誤差于組內(nèi)，與組間差別無關，組間變異系數(shù)較大，通過方差分析誤差分離，區(qū)組數(shù)與重復數(shù)相同，區(qū)組內(nèi)區(qū)數(shù)等于試驗處理數(shù)，試驗區(qū)組隨機排列。10株小區(qū)，重復3次，每年7月至現(xiàn)場調研，采取長枝從下而上的第3葉片備用。

1.2 方法

1.2.1 成分測定黃酮采用Rutin分光光度法測定，并根據(jù)C（%，干）=Rutin（g/L）/樣本重（g）×稀釋倍數(shù)10-3×100計算葉內(nèi)黃酮總量。內(nèi)酯采用日本Shimadzu LC-10ADHPLC國際標準測定，并根據(jù)銀杏苦內(nèi)酯（%）=A酯/A標×100/R×1.054/M計算內(nèi)酯苷總量。銀杏苦內(nèi)酯A=1.12，銀杏苦內(nèi)酯B=1.16，銀杏苦內(nèi)酯C=1.26，銀杏苦內(nèi)酯J=1.21，白果內(nèi)酯=1.21。

1.2.2 數(shù)量遺傳分析穩(wěn)定性分析采用Nassar&Huhu 的非參數(shù)法，包括Si（1）和Si（2）2 個參數(shù)。

第i個品種在不同環(huán)境中名詞的絕對差異由Si（1）表示。第i個品種在S個環(huán)境中的名次方差由Si（2）表示。品種i在環(huán)境j中的等級由γij表示，表示環(huán)境數(shù)（j＝1，2，…，N），K表示種數(shù)（i=1,2，…，K）。

2 結果與分析

2.1 銀杏葉內(nèi)酯性別、種源、無性系成分方程

Ⅰ類內(nèi)酯總量為0.1879%，Ⅱ類內(nèi)酯總量為0.1529%，Ⅲ類為中內(nèi)酯種源，總內(nèi)酯為0.1059%，Ⅳ類為低內(nèi)酯種源，平均內(nèi)酯為0.0457%。將內(nèi)酯6個性狀化為2個主成分方程，詳見表1。

表1 銀杏葉內(nèi)酯性別、種源、無性系方程

2.2 全國銀杏內(nèi)酯性別、種源Q型聚類結果及形狀指針

87個無性系分為4類，山東蒼山3個系號（56、57、59），山東海陽2個系號（17、18）屬于高內(nèi)酯無性系。Ⅲ類14個屬中內(nèi)酯無性系，Ⅳ類68個屬低內(nèi)酯無性系。內(nèi)酯總量、白果內(nèi)酯、銀杏苦內(nèi)酯A、銀杏苦內(nèi)酯B、銀杏苦內(nèi)酯C、銀杏苦內(nèi)酯J 等6個指針對國內(nèi)13個種源進行Q型聚類分析，詳見表2、表3。

表2 全國銀杏內(nèi)酯性別、種源Q型聚類結果及形狀指針

表3 內(nèi)酯與黃酮Q型聚類分析結果

2.3 基因穩(wěn)定性分析

Nassar& Huhu 非參數(shù)法中，Si（1）與Si（2）越小，品種穩(wěn)定性越好。從15個內(nèi)酯系號基因穩(wěn)定性非參數(shù)法分析結果可知，廣西（系號9）、山西（系號8）、云南（系號5）3個雄株系號內(nèi)酯較穩(wěn)定，詳見圖1。從38個黃酮系號基因穩(wěn)定性非參數(shù)法分析結果可知，有15個穩(wěn)定系號，詳見圖2。

圖1 銀杏葉黃酮基因型穩(wěn)定性分析

圖2 銀杏葉黃酮基因型穩(wěn)定性分析

3 討論

銀杏葉提取物來自青色階段從銀杏樹上采摘、晾干的銀杏葉，其系列藥物被用于治療心血管和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其中的黃酮、內(nèi)酯發(fā)揮主要藥理作用，以高治療價值、低毒性的優(yōu)勢在相關疾病治療中取得優(yōu)勢[4]。鑒于銀杏葉提取物的重要藥用價值，我國國內(nèi)的銀杏種植產(chǎn)業(yè)悄然興起，雖然并未見于各大報道，但關于銀杏葉數(shù)量性狀及其遺傳參數(shù)的研究成為心臟病與肺部疾病臨床治療領域的重點，甚至一些國外醫(yī)療機構也紛紛效仿，試圖將銀杏提取物加入相關疾病治療中[5]。本研究收集國內(nèi)13個種源，87個無性系進行田間試驗設計，對藥物成分及遺傳穩(wěn)定性進行分析，結果顯示，本研究中篩選的4個內(nèi)酯無性系和高黃酮，黃酮含量為1.59%～2.49%，內(nèi)酯含量為0.29%～0.38%。銀杏葉藥物基因穩(wěn)定性變化幅度較高，其中內(nèi)酯有3個系號穩(wěn)定性良好，黃酮中有15個穩(wěn)定系號。