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    重慶市野生黃精粗多糖含量分析與評價

    2022-11-15 03:32:16羅長琴肖國生朱顯平樊汶樵鄭容
    中國野生植物資源 2022年10期
    關(guān)鍵詞:萬州黃精根莖

    羅長琴,肖國生,朱顯平,樊汶樵,鄭容

    (1.重慶市萬州食品藥品檢驗所,重慶 萬州 404100;2.重慶三峽學(xué)院生物與食品工程學(xué)院,重慶 萬州 404100;3.重慶安全技術(shù)職業(yè)學(xué)院,重慶 萬州 404100;4.重慶文理學(xué)院,重慶 永川 4021603)

    黃精(Polygonatum sibiricumRed.)為百合科黃精屬多年生草本植物,為藥食兩用植物,以根莖入藥[1]。目前全世界普遍認可的黃精屬有87種,主要分布于北溫帶和北亞熱帶國家,我國有黃精屬40余種,廣泛分布于32個省級行政區(qū)[2-3],其中西南地區(qū)(四川省、重慶市、云南省、貴州省和廣西省)的黃精屬植物的種類最多,達23種,是黃精屬植物的熱點地區(qū)和多樣性中心[4]。

    黃精性平、味甘,常用于治療脾虛胃弱、糖尿病、高血糖、高血脂、高血壓等疾?。?]。

    目前對黃精的文獻報道多集中在多糖類和甾體皂苷類[6-8],黃精多糖是黃精化學(xué)組成中最重要的有效成分之一,具有降血糖[9-10]、抗氧化[11-12]、抗菌[13-14]以及免疫調(diào)節(jié)[15-16]等藥用價值,《中國藥典》將黃精多糖含量作為黃精的質(zhì)量控制指標[17]。粗多糖的藥典測定方法是采用有機溶劑回流1 h后,過濾除去雜質(zhì),在殘渣中加水再回流1 h提取粗多糖,加入顯色試劑,利用分光光度計進行定量測定。該方法前處理經(jīng)過兩次回流處理,操作繁瑣,且消耗大量有機試劑,回流后還有大量黏液物質(zhì)造成過濾困難,導(dǎo)致誤差偏大,影響測定結(jié)果準確性。

    本研究采用水浴提取-醇沉法制成粗多糖提取液,以葡萄糖為標準品,苯酚-硫酸為顯色試劑,利用紫外分光光度法對野生黃精粗多糖含量進行測定,比較重慶市不同區(qū)縣的野生黃精不同部位多糖含量差異,為野生黃精的深入研究提供數(shù)據(jù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要儀器與試劑

    刀式混合研磨儀(GM200,德國RETSCH);電熱鼓風(fēng)干燥箱(BPG-9240A,上海鰲珍);分析天平(QUINTIX224-1CN,德國賽多利斯);數(shù)顯恒溫水浴鍋(HH-6,友聯(lián));冰箱(BCD-206TAS,海爾);渦旋儀(IKAMS3digt,德國IKA);離心機(SIGMA3-30K,德國SIGMA);紫外可見分光光度計(TU1901,北京普析)。

    葡萄糖(優(yōu)級純),購自天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;無水乙醇(分析純),硫酸和苯酚(優(yōu)級純),購自成都市科龍化學(xué)品有限公司。

    1.1.2 樣品采集與制備

    從重慶市奉節(jié)縣、萬州區(qū)、梁平區(qū)、石柱縣、巫山縣等地采集野生黃精樣品,從湖南襄陽市采購人工種植黃精作為參比樣品。采集野生黃精根莖34份、根須4份、葉子4份、種子4份,種植黃精根莖6份,共52份樣品。將根莖、根須、葉子及種子樣品清洗干凈(根莖切成約1 mm厚的薄片,其余類型樣品無需處理),放入電熱烘箱內(nèi),60℃加熱12 h,取出冷卻,用研磨儀制成粉末狀,裝入自封袋中,常溫保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 方法

    1.2.1 標準溶液的制備

    將葡萄糖于105℃烘箱中烘干2 h,冷卻后精密稱取0.013 07 g于10 mL容量瓶中,用水溶解并定容至刻度制成標準儲備液,再吸取儲備液1.00 mL于10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,制成濃度為0.103 7 mg/mL的標準中間液。

    1.2.2 樣品溶液的制備

    稱取樣品約0.5 g于50 mL離心管中,加水至25 mL,加蓋,渦旋1 min,于80℃水浴鍋中水浴1 h,取出,放置5 min,8 000 r/min離心5 min。精密量取上清液2 mL于15 mL離心管中,加入無水乙醇8 mL,加蓋,置于冰箱中,4℃醇沉24 h。取出后8 000 r/min離心10 min,棄去上清液,加入無水乙醇3 mL于離心管中醇洗沉淀2次,棄去乙醇,加入8 mL水溶解沉淀,于10 ml容量瓶中定容待測。

    1.2.3 粗多糖測定

    分別精密量取葡萄糖標準中間液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL和樣品溶液0.2 mL于10 mL比色管中,加水至2 mL,加入5%苯酚溶液1.00 mL,再迅速加入濃硫酸5.00 mL,放置10 min后渦旋混勻,放入30℃水浴鍋中水浴20 min,取出于490 nm處,以零管調(diào)零,利用紫外可見分光光度計測定吸光度值。

    1.2.4 數(shù)據(jù)分析

    采用SPSS 25.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,利用GraphPad Prism8軟件進行作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 方法學(xué)考察

    2.1.1 標準曲線及其相關(guān)性

    以葡萄糖濃度為橫坐標(X),吸光度值為縱坐標(Y),繪制標準曲線:Y=6.067 4X-0.002 6,R2=0.998 8,在0~0.131 mg范圍內(nèi)線性良好,見圖1。

    圖1 葡萄糖標準曲線Fig.1 Standard curve of glucose

    2.1.2 精密度測定

    取同一樣品溶液平行測定6次,記錄吸光度值(A)和相對標準偏差(Relative standard deviation,RSD),結(jié)果顯示平均吸光度值為0.516,RSD為1.36%(n=6),說明儀器的精密度良好,見表1。

    表1 粗多糖精密度測定結(jié)果Tab.1 The precision results of polysaccharide

    2.1.3 重復(fù)性測定

    稱取同一黃精樣品6份,按照上述方法進行前處理,制成6份樣品溶液進行測定,記錄吸光度(A),結(jié)果顯示平均吸光度值為0.519,RSD為2.06%(n=6),表明該方法重復(fù)性較好,見表2。

    表2 粗多糖重復(fù)性測定結(jié)果Tab.2 The repeatability results of polysaccharide

    2.1.4 穩(wěn)定性測定

    精密吸取樣品溶液0.20 mL進行顯色,水浴結(jié)束后,分別在放置0、0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h后測定吸光度值(A),結(jié)果顯示平均吸光度值為0.521,RSD為1.45%(n=5),說明待測液穩(wěn)定性良好,見表3。

    表3 粗多糖穩(wěn)定性測定結(jié)果Tab.3 The stability result of polysaccharide

    2.2 野生黃精根莖中粗多糖含量情況

    重慶市野生黃精根莖粗多糖平均含量為(12.64±5.57)g/100 g,略高于種植黃精(10.50±1.76)g/100 g,但差異不顯著(P>0.05);野生黃精比種植黃精多糖含量范圍廣,最大值達24.07 g/100 g,最小值僅3.52 g/100 g,而種植黃精根莖粗多糖含量均大于7.89 g/100g;以藥典中不得少于7%作為標準值進行判定[17],總樣本合格率為87.50%(n=35),其中野生黃精根莖合格率為85.29%(n=29),種植黃精根合格率莖為100.00%(n=6),合格率詳見表4。

    表4 黃精根莖粗多糖含量Tab.4 The content of polysaccharide in rhizome of P.sibiricum

    2.3 不同區(qū)縣野生黃精根莖中粗多糖含量比較與分析

    40份樣品中粗多糖平均含量為(12.32±5.22)g/100 g,范圍3.52~24.07 g/100 g。分析不同區(qū)縣黃精根莖中粗多糖含量發(fā)現(xiàn),含量高低依次為:石柱、萬州、梁平、巫山、種植、奉節(jié),其中石柱(17.19±2.20)g/100g和萬州(15.49±5.23)g/100g平均含量均顯著高于其他區(qū)縣(P<0.05),見表5。含量最高的采自梁平(24.07 g/100 g),為標準值(≥7%)的3.44倍,最低的采自奉節(jié)(3.50 g/100 g),僅為標準值的一半。比較各個地區(qū)的粗多糖合格率,萬州、石柱、巫山、種植均為100%,而奉節(jié)和梁平較低,分別為71.42%和75.00%??傮w來說,重慶市的野生黃精根莖中粗多糖含量較高,具有可觀的開發(fā)利用價值。

    表5 不同區(qū)縣黃精根莖中粗多糖含量比較與分析Tab.5 Comparison and analysis of crude polysaccharide content in P.sibiricum rhizome from different districts and counties

    2.4 野生黃精不同部位的粗多糖含量差異

    對比奉節(jié)縣采集的4批次野生黃精的根莖、根須、葉子和種子的粗多糖測定結(jié)果,平均含量:根莖(17.90±0.47)g/100 g>根須(12.00±0.93)g/100 g>種 子(11.32±0.11)g/100 g>葉 子(9.68±0.09)g/100 g,其中根莖含量明顯高于其他部位(P<0.05);葉子含量明顯低于其他部位(P<0.05),見表6。

    表6 野生黃精不同部位的粗多糖含量Tab.6 The content of polysaccharide in different parts of wild P.sibiricum

    3 討論與結(jié)論

    野生黃精常生長于林下,自然形成的遮蔭環(huán)境中,陰涼、潮濕等因素有利于多糖的累積[18],其根莖多糖含量可達24.07 g/100 g,且平均含量高于種植品種,與吳啟國等[19]研究安徽產(chǎn)地的野生與栽培黃精測定結(jié)果相吻合。然而在沒有人為控制下,過度的遮蔭環(huán)境,加上群落物種與黃精形成的種間競爭會阻礙黃精的生長[20],導(dǎo)致部分黃精多糖積累量較少,最低僅為3.52 g/100 g。因此野生黃精生長環(huán)境較分散,生長年限存在差異,種源多樣化[21-22],綜合導(dǎo)致多糖含量差異大。本研究測定的重慶市野生黃精根莖粗多糖平均含量為(12.22±5.28)g/100 g,與焦劼等[23-26]等的研究結(jié)果相比含量更高,表明重慶野生黃精品質(zhì)較好,具有較高的開發(fā)利用價值。

    本研究采用水浴-醇沉提取,紫外分光光度法測定黃精中粗多糖的含量,該方法簡單,結(jié)果準確可靠,精密度好,可用于大批量樣品的檢測。樣品測定結(jié)果發(fā)現(xiàn),重慶市野生黃精粗多糖含量可觀,根莖合格率高達85.29%,其中石柱和萬州含量較高,奉節(jié)最低。黃精根須、種子和葉子中也含有豐富的多糖類物質(zhì),后續(xù)可對此類副產(chǎn)物做進一步研究,為黃精全株高效綜合利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

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