非小細胞肺癌組織中Notch1、PTEN表達相關(guān)性及其與患者預(yù)后的關(guān)系

張媛媛，馬靜，何會娜，郭銀，李香蘭，池菲

1河北省胸科醫(yī)院急診科，石家莊 050041；2河北省胸科醫(yī)院消化內(nèi)科；3河北省胸科醫(yī)院護理部；4河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院放療科

非小細胞肺癌（NSCLC）是肺癌最主要的發(fā)病類型，臨床常見。隨著分子靶向治療、化療等技術(shù)的發(fā)展，NSCLC的治療效果雖有提高，但整體效果仍不理想［1-2］。NSCLC的發(fā)生發(fā)展與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常、抑癌基因與促癌基因失衡、細胞周期異常關(guān)系密切［3-4］。有研究發(fā)現(xiàn)，缺刻基因1（Notch1）在NSCLC組織中高表達，其可能經(jīng)miR-582-5p靶向調(diào)控進而影響肺腫瘤細胞的增殖及侵襲，Notch1可能在NSCLC病理發(fā)展中起促癌作用［5］。另有研究顯示，第10號染色體同源缺失性磷酸酶張力蛋白基因（PTEN）在NSCLC中低表達，其可能在NSCLC發(fā)生、轉(zhuǎn)移、浸潤過程中發(fā)揮抑制作用［6］，且Notch1可通過調(diào)節(jié)PTEN相關(guān)通路進而影響平滑肌細胞的增殖和遷移［7］。但關(guān)于Notch1、PTEN在NSCLC中是否相關(guān)，以及二者與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系研究較少?；诖耍狙芯客ㄟ^測定Notch1、PTEN在NSCLC中的表達情況，分析NSCLC組織Notch1、PTEN表達的相關(guān)性及其與患者預(yù)后的關(guān)系，以期為NSCLC患者的預(yù)后評估提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料經(jīng)河北省胸科醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批號：201612-0206），選取2017年1月—2019年1月于我院行腫瘤根治性切除術(shù)的原發(fā)性NSCLC患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合原發(fā)性NSCLC診斷標(biāo)準(zhǔn)［8］；②術(shù)前未進行放化療；③臨床資料完整。④受試者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤、嚴(yán)重臟器疾病；②有手術(shù)禁忌證；③無法配合檢查及隨訪，依從性差。共收集符合標(biāo)準(zhǔn)的原發(fā)性NSCLC患者134例，其中男78例、女56例，年齡（59.76±10.38）歲（＜60歲52例、≥60歲82例），TNM分期Ⅰ期42例、Ⅱ～Ⅲ期92例，腫瘤大小≤3 cm 60例、＞3 cm 74例，分化程度低分化56例、中高分化78例，手術(shù)方式肺葉切除122例、單側(cè)全肺切除12例，病理類型腺癌56例、鱗癌60例、其他18例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例、未轉(zhuǎn)移62例。納入患者在術(shù)后隨訪的36個月中，存活72例、死亡62例。1.2 NSCLC及癌旁組織Notch1、PTEN表達檢測

采用免疫組織化學(xué)法。在NSCLC患者進行病理活檢時，分別留取腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織（距腫瘤組織＞4 cm），清洗后置入10%甲醛中制成石蠟標(biāo)本切片，采用免疫組化SP法染色，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作。一抗為兔抗人Notch1抗體（ab245686，英 國Abcam公 司）、PTEN抗 體（ab154812，英國Abcam公司），二氨基聯(lián)苯胺顯色30 s，蘇木素復(fù)染，利用自來水、蒸餾水清洗后，運用不同濃度乙醇脫水，封片，顯微鏡（Ti2，日本尼康公司）下拍照。使用陽性細胞比例及染色程度評分的乘積來評價Notch1、PTEN表達情況。陽性細胞比例＜25%為0分、25%～＜50%為1分、50%～＜75%為2分、≥75%為3分，染色程度無色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、黃褐色為3分，將陽性細胞比例評分×染色程度評分＜3評價為Notch1、PTEN表達陰性、≥3評價為Notch1、PTEN表達陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS25.0統(tǒng)計軟件。計量資料采用Kolmogorov-Smirnov進行正態(tài)性分析，符合正態(tài)分布的以±s表示，組間比較行t檢驗；計數(shù)資料以例（%）表示，數(shù)據(jù)比較行χ2檢驗。采用Spearman相關(guān)分析法分析NSCLC組織中Notch1與PTEN的相關(guān)性；Log-Rank檢驗分析NSCLC組織Notch1、PTEN蛋白表達與患者預(yù)后的關(guān)系；COX回歸分析NSCLC患者預(yù)后的影響因素，取單因素COX回歸分析結(jié)果P＜0.001的臨床指標(biāo)進一步納入多因素COX回歸分析，總結(jié)影響NSCLC患者預(yù)后的獨立危險、保護因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC及癌旁組織Notch1、PTEN表達比較

NSCLC組織中Notch1表達陰性42例（31.34%）、陽性92例（68.66%），PTEN表 達 陰 性100例（74.63%）、陽性34例（25.37%）；癌旁組織中Notch1表達陰性118例（88.06%）、陽性16例（11.94%），PTEN表 達 陰 性11例（8.21%）、陽 性123例（91.79%）；NSCLC組織Notch1表達陽性率高于癌旁組織，PTEN表達陽性率低于癌旁組織（P均＜0.01）。2.2 NSCLC組織Notch1與PTEN表達的相關(guān)性Spearman相關(guān)分析顯示，NSCLC組織中Notch1表達與PTEN表達呈負相關(guān)（r=-0.345，P＜0.01）。

2.3 Notch1、PTEN表達陽性與陰性NSCLC患者預(yù)后比較Notch1陰性、Notch1陽性的NSCLC患者平均生存時間分別為33.10、28.51個月，Notch1陰性患者平均生存時間高于Notch1陽性患者；PTEN陰性、PTEN陽性的NSCLC患者平均生存時間分別為28.99、32.77個月，PTEN陰性患者平均生存時間低于PTEN陽性患者（P均＜0.01）。Log-Rank檢驗顯示，Notch1陰性患者36個月累積生存率高于Notch1陽性患者，PTEN陰性患者36個月累積生存率低于PTEN陽性患者（P均＜0.01）。見圖1、2。

圖1 NSCLC組織Notch1表達與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

圖2 NSCLC組織PTEN表達與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系

2.4 Notch1、PTEN蛋白表達與NSCLC患者預(yù)后的關(guān)系單因素COX分析顯示，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Notch1陽性是影響NSCLC患者預(yù)后的危險因素，低分化程度、PTEN陽性是影響NSCLC患者預(yù)后的保護因素（P均＜0.001）；多因素COX分析顯示，TNM分期Ⅱ～Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、Notch1陽性是影響NSCLC患者預(yù)后的獨立危險因素，PTEN陽性是影響NSCLC患者預(yù)后的獨立保護因素（P均＜0.01）。見表1。

表1 影響NSCLC患者預(yù)后的COX回歸分析結(jié)果

3 討論

NSCLC是病死率極高的呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，手術(shù)是目前治療NSCLC的主要手段，但具有創(chuàng)傷性且術(shù)后復(fù) 發(fā) 率高，致使NSCLC患者預(yù) 后 不良［9-10］。Notch信號通路是保守性較高的信號通路，與腫瘤發(fā)病進程有關(guān)，在不同情況下，分別發(fā)揮抑癌或促癌作用。Notch信號通路中關(guān)于Notch1受體的研究最多，Notch1可通過細胞間相互作用進而調(diào)控細胞增殖、生長、分化，并在調(diào)節(jié)血管生成方面起到重要作用［11-12］。研究發(fā)現(xiàn)，靶向沉默Notch1可能下調(diào)下游的DNA結(jié)合蛋白Hes-1，進而降低NSCLC干細胞活性，加 速細胞 凋亡［13］；另 有研究 顯 示，Notch1在NSCLC患者中表達失調(diào)，Notch1陽性表達的NSCLC患者比陰性表達患者預(yù)后差，其可輔助預(yù)測NSCLC患者預(yù)后情況［14］。以上研究提示，Notch1在NSCLC中發(fā)揮癌基因作用。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織中Notch1陽性表達率高于癌旁組織，與LIU等［5］研究趨勢一致，提示Notch1可能通過調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路促進癌細胞增殖和血管生成，影響NSCLC病理發(fā)展。

PTEN是一種腫瘤抑制基因，其可維持免疫穩(wěn)態(tài)，參與胚胎發(fā)育并調(diào)控細胞分化、凋亡、黏附、遷移、增殖等過程，影響多種腫瘤發(fā)生發(fā)展［15-16］。研究顯示，PTEN在NSCLC中表達下調(diào)，其可能通過促進G0/G1期阻滯及細胞凋亡進而抑制NSCLC細胞生長，可能是治療NSCLC的潛在靶基因［17］。李曉燕等［18］研究發(fā)現(xiàn)，PTEN在NSCLC組織中表達缺失率較高，其與NSCLC發(fā)病進程關(guān)系密切，可作為評估NSCLC預(yù)后的標(biāo)志物。以上研究提示，NSCLC發(fā)病進程可能與PTEN表達失調(diào)有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組織PTEN陽性表達率低于癌旁組織，與張秀義等［6］研究相符。這提示PTEN可能在NSCLC中發(fā)揮抑癌作用，測定腫瘤組織PTEN表達水平有利于判定NSCLC患者疾病嚴(yán)重程度，從而制定較為精準(zhǔn)的治療方案。

本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者NSCLC組織中Notch1表達與PTEN表達呈負相關(guān)，提示Notch1可能與PTEN共同影響NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程。我們據(jù)此推測，PTEN可能作為Notch1信號通路中的下游基因，與Notch1共同影響NSCLC細胞增殖、凋亡，進而影響NSCLC發(fā)生發(fā)展，但具體機制有待深入研究。進一步對納入患者的生存情況進行分析發(fā)現(xiàn)，Notch1陽性、PTEN陰性的NSCLC患者36個月累積生存率低于Notch1陰性、PTEN陽性的NSCLC患者，提示Notch1、PTEN與NSCLC患者預(yù)后有關(guān)，二者具有評估NSCLC患者預(yù)后的潛在價值，與金子等［14］及李曉燕等［18］的研究結(jié)果一致。此外，Notch1是影響NSCLC預(yù)后的獨立危險因素，PTEN是影響NSCLC預(yù)后的獨立保護因素，提示Notch1表達升高、PTEN表達降低均會使NSCLC患者發(fā)生不良預(yù)后的風(fēng)險升高，及時測定腫瘤組織Notch1、PTEN表達有利于及早診治和NSCLC預(yù)后的評估。

綜上所述，NSCLC患者NSCLC組織中Notch1表達上調(diào)、PTEN表達下調(diào)，Notch1表達與PTEN表達呈負相關(guān)，且二者均與NSCLC患者預(yù)后關(guān)系密切，Notch1、PTEN有望作為臨床評估NSCLC患者預(yù)后的輔助指標(biāo)。后期需擴大樣本、多角度探究Notch1、PTEN在NSCLC中的作用機制，為臨床診治NSCLC提供更有力證據(jù)。