QuEChERS-高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定番茄中15種農(nóng)藥殘留

付玉志 石懷超 鄭婷婷 公強(qiáng)

（臨沂市檢驗(yàn)檢測(cè)中心 山東臨沂 276000）

1 前言

番茄，俗稱西紅柿，是茄科番茄屬的一年生草本植物[1]，原產(chǎn)自南美洲，明朝時(shí)期傳入我國(guó)。番茄果實(shí)富含維生素、礦物質(zhì)和番茄紅素，具有獨(dú)特風(fēng)味，可生食、煮食、加工制成番茄醬汁或整果罐藏。我國(guó)是世界第一大番茄生產(chǎn)國(guó)，年產(chǎn)量達(dá)450萬(wàn)噸，約占蔬菜年產(chǎn)量的7%[2]。我國(guó)的番茄種植區(qū)主要集中在山東、河北、河南、江蘇、廣東、云南等地，已經(jīng)成為很多地區(qū)的支柱產(chǎn)業(yè)。例如筆者所在地山東省臨沂市費(fèi)縣胡陽(yáng)鎮(zhèn)，2013年，“胡陽(yáng)西紅柿”正式通過(guò)農(nóng)業(yè)部地理標(biāo)志認(rèn)證[3]，經(jīng)過(guò)十余年的發(fā)展，當(dāng)?shù)胤逊N植面積已達(dá)2.7萬(wàn)畝，以溫室大棚種植為主，品種多達(dá)120余種，總產(chǎn)量達(dá)2.7萬(wàn)t，產(chǎn)值達(dá)19.6億元[4]。

各級(jí)政府部門(mén)歷來(lái)重視農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全問(wèn)題，但是近年來(lái)，“毒草莓”、“毒生姜”等農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全事件仍有發(fā)生[5]，應(yīng)當(dāng)不斷加強(qiáng)農(nóng)藥準(zhǔn)入監(jiān)管和用藥指導(dǎo)，并規(guī)范化地進(jìn)行產(chǎn)地農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全檢測(cè)。因此，建立蔬菜中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法非常重要[6]。

目前，蔬菜中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有速測(cè)法、色譜法和色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法[7]。本文以胡陽(yáng)鎮(zhèn)合作社種植的番茄為研究對(duì)象，建立15種農(nóng)藥殘留的QuEChERS—高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法，該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高[8-10]，可滿足政府部門(mén)對(duì)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全例行監(jiān)測(cè)和監(jiān)督抽查的需求。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

三重四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀（LCMS-8060，日本島津公司）；平行研磨儀（E0303S，微思行（北京）科技有限公司）；水浴恒溫振蕩器（SHZ-82，常州國(guó)宇儀器制造有限公司）；電動(dòng)離心機(jī)（TDL-5A，江蘇金怡儀器科技有限公司）；渦旋混合儀（MIXER S0200，Labnet公司）；電子天平（YP202，上海津平科學(xué)儀器有限公司）。

霜霉威、噻菌靈、抗蚜威、異丙威、甲霜靈、抑霉唑、腈菌唑、異丙甲草胺、腈苯唑、戊唑醇、丙環(huán)唑、烯唑醇、噻嗪酮、氟蟲(chóng)脲、氟啶脲15種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（濃度100μg/mL，均為液體標(biāo)準(zhǔn)品，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所，北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司）；乙腈、甲酸、乙酸銨（色譜純，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司）；AOAC1202提取包（NaAc 1.5g，MgSO46 g）、5 mL AO AC2202凈化管（C18 100 mg，PSA100 mg，MgSO4300 mg）（中國(guó)農(nóng)科院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所）；純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）。番茄樣品購(gòu)自臨沂市費(fèi)縣胡陽(yáng)鎮(zhèn)合作社。

2.2 樣品前處理

稱取已制備好的番茄樣品15.00 g，置于50 mL離心管中；加入15 mL乙腈，置于振蕩器上震蕩30 min；加入AOAC1202提取包，劇烈振搖15min；以4 000r/min離心5min，取2mL上清液，置于5mL AOAC2202凈化管中，渦旋混合2 min；以4 000 r/min離心5 min后取上清液，過(guò)0.22 μm濾膜，裝瓶待測(cè)。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

量取15種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)各200 μL，分別置于10 mL容量瓶中；用乙腈定容至10 mL，配制成質(zhì)量濃度為2 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；依據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，用乙腈逐級(jí)梯度稀釋，得到質(zhì)量濃度為0.005、0.01、0.05、0.1、0.2 μg/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；置于-18℃冰箱中，避光保存。根據(jù)測(cè)得的結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.4 色譜-質(zhì)譜條件

2.4.1 色譜條件

色譜柱：Diol-HILIC-120色譜柱（2.1 mm×50 mm，1.9 μm）；進(jìn)樣量：3 μL，柱溫：40℃；流動(dòng)相：5 mmoL/L乙酸銨+0.02%甲酸的水溶液（A）和乙腈（B），梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 色譜梯度洗脫

2.4.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），負(fù)離子模式；電噴霧電壓：4.0 kV；離子源溫度：300℃，碰撞氣：氬氣（99.999%）；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。

用乙腈將15種混合農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成濃度為0.05 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行質(zhì)譜全掃描，對(duì)每種化合物的母離子、子離子、碰撞能量等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化[11]。選擇有代表性的碎片離子作為母離子，進(jìn)行碰撞能優(yōu)化，根據(jù)其子離子的掃描質(zhì)譜圖，確定最佳的定性離子對(duì)和定量離子對(duì)[12-13]。優(yōu)化后的15種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2，總離子色譜圖見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，15種農(nóng)藥的峰型較好，可準(zhǔn)確進(jìn)行定量和定性。

圖1 15種農(nóng)藥總離子色譜圖

表2 15種農(nóng)藥質(zhì)譜分析參數(shù)

3 結(jié)果與分析

按照色譜條件和優(yōu)化后的質(zhì)譜條件，對(duì)15種農(nóng)藥的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，分別以質(zhì)量濃度和峰面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性方程和相關(guān)系數(shù)[14]。結(jié)果表明，在0.005～0.200 μg/mL濃度范圍內(nèi)，15種農(nóng)藥的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2在0.998 5～0.999 9范圍內(nèi)，依據(jù)定量離子，對(duì)色譜峰的3倍信噪比計(jì)算最低檢出限[15]。15種農(nóng)藥的回歸方程、R2和檢出限見(jiàn)表3。

表3 15種農(nóng)藥線性回歸方程、R2和檢出限

在質(zhì)譜檢測(cè)過(guò)程中，樣品的基質(zhì)效應(yīng)經(jīng)常會(huì)干擾對(duì)被測(cè)物的分析[16]，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度存在誤差。為消除基質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，需采用空白樣品基質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，添加濃度依次為0.01、0.05、0.10 mg/kg，每個(gè)添加水平進(jìn)行6次平行試驗(yàn)，按照上述步驟進(jìn)行提取、凈化、測(cè)定，計(jì)算平均添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），結(jié)果見(jiàn)表4。番茄中15種農(nóng)藥測(cè)定的平均添加回收率在72.2%～117.9%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD在0.54%～8.20%。

表4 15種農(nóng)藥平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

（續(xù)表4）

4 結(jié)論

本文采用QuEChERS法，結(jié)合高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，對(duì)番茄樣品進(jìn)行提取、凈化和檢測(cè)。結(jié)果顯示，15種農(nóng)藥在0.005～0.2 μg/mL濃度范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好，R2為0.998 5～0.999 9，檢出限為0.06～1.12 μg/kg，加標(biāo)回收率在72.2%～117.9%，RSD＜9%。表明該方法操作簡(jiǎn)單快速、準(zhǔn)確性好、重現(xiàn)性高，適用于上述15種農(nóng)藥殘留的定性確征和定量檢測(cè)。