基于耳石不同切面的小黃魚(yú)年齡鑒定及其生長(zhǎng)方程年齡反演比較

康中杰，宋大德，李 綱，嚴(yán)利平，仲霞銘，湯建華，王燕平，吳 磊，熊 瑛

（1.上海海洋大學(xué)海洋科學(xué)學(xué)院，上海 201306；2.江蘇省海洋水產(chǎn)研究所，江蘇南通 226007；3.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部海洋與河口漁業(yè)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，上海 200090）

耳石是由生物礦化作用所形成的碳酸鈣結(jié)晶，耳石上沉積物質(zhì)顯示出每日積累，其在代謝上幾乎是惰性的，具有極好的保守性，因此可用來(lái)鑒定魚(yú)類的日齡和年齡［1］。對(duì)于硬骨魚(yú)類來(lái)說(shuō)，相比其他硬組織（鱗片、脊椎骨、鰓蓋等），耳石仍然是最常用、最可靠的年齡鑒定的生物材料［2］。魚(yú)類的年齡與生長(zhǎng)一直是魚(yú)類種群動(dòng)力學(xué)參數(shù)估算的基礎(chǔ)，許多學(xué)者運(yùn)用魚(yú)類耳石的不同切面做了年齡與生長(zhǎng)方面的相關(guān)研究［3-4］；耳石也被應(yīng)用于魚(yú)類生長(zhǎng)參數(shù)估算，大多數(shù)生長(zhǎng)參數(shù)估算方法都是以隨著年齡增長(zhǎng)的體型增長(zhǎng)理論為基礎(chǔ)，如最常用的Von Bertalanffy生長(zhǎng)方程（VBGF）參數(shù)估算方法，那么基于耳石的生長(zhǎng)模型估算不同時(shí)期魚(yú)類體型的變化為研究魚(yú)類生長(zhǎng)提供了一個(gè)可行可靠的途徑［5］。然而，由于獲取耳石切片的相對(duì)較高的時(shí)間成本和年齡鑒定的難度，基于魚(yú)體體長(zhǎng)或體質(zhì)量指標(biāo)利用已有的魚(yú)類生長(zhǎng)方程來(lái)反推魚(yú)體年齡，成為當(dāng)前年齡估算的一種便捷方法。

小 黃 魚(yú)［Larimichthys polyactis（Bleeker，1877）］屬石首魚(yú)科，黃魚(yú)屬，為暖溫性底層魚(yú)類，分布于我國(guó)東海、黃海和渤海以及朝鮮半島西岸海域［6］。小黃魚(yú)的資源狀況一直備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注，是我國(guó)海洋經(jīng)濟(jì)漁業(yè)資源研究的模式種，在我國(guó)海洋漁業(yè)資源中占有十分重要的地位［6］。隨著對(duì)小黃魚(yú)的開(kāi)發(fā)利用，自20世紀(jì)90年代起小黃魚(yú)群體年齡結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，呈現(xiàn)“低齡化”，多為1～3齡［7］，對(duì)這一定性結(jié)論的精細(xì)化研究卻較為少見(jiàn)，而根據(jù)近年體長(zhǎng)組成特征，間接反映出小黃魚(yú)低齡化狀況有所緩解［8］。因此，對(duì)小黃魚(yú)年齡進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定是研究小黃魚(yú)種群結(jié)構(gòu)必不可少的一項(xiàng)基礎(chǔ)性工作。研究者們對(duì)石首魚(yú)科大黃魚(yú)（Larimichthys crocea）、小黃魚(yú)、白姑 魚(yú)（Pennahia argentata）、黃 姑 魚(yú)（Nibea albiflora）、棘頭梅童魚(yú)（Collichthys lucidus）等開(kāi)展過(guò)年齡研究［9-10］。由于其耳石晶體結(jié)構(gòu)層厚，無(wú)法從耳石表面來(lái)觀察年輪，常以分析單個(gè)切面進(jìn)行年齡鑒定。針對(duì)小黃魚(yú)耳石磨片制作，蘭永倫和羅秉征［11］曾嘗試過(guò)從3個(gè)不同方向切割小黃魚(yú)耳石以確定最佳切片位置和方向，但并未對(duì)小黃魚(yú)耳石輪紋進(jìn)行比對(duì)分析。此外，大部分學(xué)者以獲取的體長(zhǎng)數(shù)據(jù)通過(guò)小黃魚(yú)的生長(zhǎng)方程來(lái)反演年齡［12-14］，但其反演結(jié)果的準(zhǔn)確性并未加以驗(yàn)證。

本文以黃海南部小黃魚(yú)矢耳石為研究材料，基于矢耳石縱切面、橫切面、水平切面3個(gè)切面進(jìn)行年齡鑒定［1，15］，比較3個(gè)切面判讀年輪的效果，同步系統(tǒng)地歸納我國(guó)近30年來(lái)小黃魚(yú)的生長(zhǎng)方程以進(jìn)行年齡反演，通過(guò)二者年齡鑒定結(jié)果的比對(duì)，總結(jié)小黃魚(yú)年齡鑒定和估算的關(guān)鍵點(diǎn)，提出魚(yú)類年齡研究的科學(xué)性、合理性的建議，以期為漁業(yè)資源管理積累基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

本研究隨機(jī)選取小黃魚(yú)樣本共計(jì)45尾，分別于2018年4月在黃海南部的呂四漁場(chǎng)（121°40＇E～121°50＇E、32°10＇N～32°20＇N）采集小黃魚(yú)15尾，于2019年9月在大沙漁場(chǎng)（122°40＇E～122°50＇E、33°40＇N～33°50＇N）采集小黃魚(yú)30尾。小黃魚(yú)樣品冷凍保存后運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行生物學(xué)測(cè)定，主要測(cè)體長(zhǎng)（standard length，SL）（精確至1mm）、體質(zhì)量（body weight，BW）（精確至0.01g）等參數(shù)。用鑷子摘取矢耳石作為年齡鑒定材料，去除表面雜質(zhì)，用酒精清洗、干燥后，編號(hào)保存在離心管中。其中，4、9月分別取5、10尾小黃魚(yú)的耳石用于縱切面、水平切面、橫切面切片分析（表1）。

表1 小黃魚(yú)耳石3個(gè)切面樣本資料Tab.1 Sampling details of L.polyactis in three sections（mean±SD）

1.2 耳石切片制作

根據(jù)小黃魚(yú)耳石切面示意圖（圖1）并參考熊瑛等［16］的方法制作耳石切片，但其中部分制作過(guò)程略有調(diào)整。首先，將A膠和B膠按照1∶1體積比涂在錫箔紙上用酒精燈微微加熱充分?jǐn)嚢杌旌希c(diǎn)滴于鑲樣杯杯底，耳石按不同切面水平放于AB膠上30 min，待耳石固定后用環(huán)氧冷鑲嵌溶液［樹(shù)脂和硬化劑（質(zhì)量比為1∶7），丹麥Struers公司］包埋，置于37℃烘箱中干燥12 h。然后，用DTQTM5低速精密切割機(jī)切去多余的樹(shù)脂，用熱熔膠將其固定于標(biāo)準(zhǔn)載玻片上研磨。研磨過(guò)程中先用P500的SiC砂紙粗磨至耳石核心即將暴露，再用P2000的SiC砂紙精磨至耳石核心，最后換用裝有MD-Chem拋光布的磨拋機(jī)（RotoPol-35，丹麥Struers公司）輔以0.25μm OP-S拋光液拋光。如此完成一面，將耳石切片另外一面重復(fù)上述操作步驟，直至核心完全暴露。

圖1 小黃魚(yú)耳石切面示意圖Fig.1 Schematic diagram of the otolith sections for L.polyactis

1.3 年齡讀取

本研究采用直接讀取和酸蝕后讀取輪紋兩種方式進(jìn)行。將耳石切片置于5%的EDTA進(jìn)行酸蝕［3］，每隔1 s取出，用去離子水清洗、拭干，并在反射光下和透射光下切換觀察，直至能在金相顯微鏡下獲得清晰年輪帶。

所有耳石切片制作好后在金相顯微鏡下觀察并拍照。由于耳石切面面積較大，拍攝單張照片無(wú)法顯示完整的耳石面，故先將耳石含輪紋的各部分拍成照片后，使用S-gauge軟件拼接出成完整輪紋照片，以分析年輪。

耳石年齡讀取，采用CAMPANA和NEILSON［17］的方法，在不清楚樣本大小、性別的情況下，每個(gè)耳石切片分別由三人讀取并記錄，取三人讀取結(jié)果的平均值納入后續(xù)的處理。參考PAUL和HORN［18］的方法，對(duì)小黃魚(yú)耳石3個(gè)切面年輪的清晰度按照等級(jí)進(jìn)行評(píng)分：1）“非常好”（輪紋清晰，年輪直觀）；2）“一般”（輪紋較為清晰，經(jīng)仔細(xì)確認(rèn)后可以辨別）；3）“難以辨認(rèn)”（輪紋模糊，年輪辨別困難）。

1.4 生長(zhǎng)方程年齡反演

通過(guò)系統(tǒng)整理近30年來(lái)探究小黃魚(yú)年齡與生長(zhǎng)的VBGF文獻(xiàn)，得出19個(gè)VBGF［12-14，19-33］（表2），用于對(duì)本文45尾小黃魚(yú)的年齡反演。Von Bertalanffy生長(zhǎng)方程為：

表2 渤海、黃海、東海小黃魚(yú)Von Bertalanffy生長(zhǎng)方程Tab.2 Von Bertalanffy grow th equation of L.polyactis in Bohai Sea（BS），Yellow Sea（YS），and East China Sea（ES）

式中，Lt表示生物體在t齡時(shí)的體長(zhǎng)；L∞表示生物體的漸進(jìn)體長(zhǎng)，也稱極限體長(zhǎng)或最大體長(zhǎng)；t0表示理論上體長(zhǎng)（Lt）等于零時(shí)的年齡，是一個(gè)假定的理論常數(shù)；K為生長(zhǎng)曲線的平均曲率，表示趨近漸進(jìn)值的相對(duì)速度。

采用單因素方差分析（ANOVA）對(duì)生長(zhǎng)參數(shù)K和L∞進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，從而解釋不同生長(zhǎng)方程參數(shù)的差異性。統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 23.0軟件，當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為差異顯著。

理論上，因取樣區(qū)域源自黃海南部，可假設(shè)其樣本歸屬于南黃海族種群，其產(chǎn)卵高峰期在每年的4月［7］，因此，默認(rèn)本研究4月份采集的小黃魚(yú)年齡測(cè)記依次為1齡、2齡、……，9月份采集的小黃魚(yú)（5月齡≈0.417齡）年齡測(cè)記依次為1.417齡、2.417齡、……。

分別以3個(gè)耳石切面鑒定得出的年齡與不同生長(zhǎng)方程得出年齡相比對(duì)，計(jì)算出方程與各切面比對(duì)的相似度，即表中年齡測(cè)記與生長(zhǎng)方程計(jì)算結(jié)果相同（當(dāng)年齡反演結(jié)果為1.00～1.99時(shí)，認(rèn)為與1齡和1.417齡是相同；當(dāng)年齡反演結(jié)果為2.00～2.99時(shí)，認(rèn)為與2齡和2.417齡是相同）的個(gè)數(shù)在總數(shù)中所占比例，進(jìn)而得出最吻合的生長(zhǎng)方程，公式如下：

2 結(jié)果與分析

2.1 矢耳石3個(gè)切面特征

在金相顯微鏡下觀察，小黃魚(yú)耳石切片中心核呈圓形，核內(nèi)深黑色的圓形結(jié)構(gòu)為耳石原基。反射光下耳石切片上呈現(xiàn)明暗交替的環(huán)帶現(xiàn)象，明帶（不透明帶）與暗帶（半透明帶）之間是一種漸變的過(guò)渡。明暗交替的輪紋作為讀取年齡的標(biāo)志，即一條明帶和暗帶共記作1齡。

2.1.1 縱切面

小黃魚(yú)耳石縱切面切片（圖2）形狀為不規(guī)則橢圓形，前端較寬，后端較窄。耳石核心靠近背端，在年輪排列區(qū)域，由耳石核心到邊緣年輪間距呈現(xiàn)有規(guī)律的縮短，靠近中心核的輪紋間距較大，靠近邊緣的輪紋間距顯著變窄。由耳石中心核到邊緣，輪紋由圓環(huán)狀逐漸變?yōu)闄E圓狀。隨著輪紋的增加，輪紋逐漸呈現(xiàn)為無(wú)規(guī)律、不規(guī)則曲線狀，這一現(xiàn)象同樣出現(xiàn)于水平切面和橫切面上?？v切面在未酸蝕的情況下不易分辨年輪，較另外兩個(gè)切面具有更多的干擾輪紋，易使年輪讀取產(chǎn)生偏差，使鑒定結(jié)果偏大（圖2）。酸蝕之后，年輪帶相對(duì)明顯（圖3）。

2.1.2 水平切面

小黃魚(yú)耳石水平切面（圖2，圖3）核心至邊緣輪紋逐漸增多，輪紋形狀不規(guī)則。水平切面核心區(qū)域由輪紋密集而形成的最長(zhǎng)軸，在進(jìn)行年齡鑒定時(shí)，只觀察長(zhǎng)軸上緣的年輪帶不足以準(zhǔn)確鑒定年輪數(shù)量，需要借助長(zhǎng)軸下緣年輪帶矯正，但少數(shù)切片的長(zhǎng)軸下緣年輪不清晰，干擾輪紋較多，難以分辨，導(dǎo)致年齡鑒定效果不好。由于水平切面核心區(qū)域面積較小，在研磨時(shí)較難掌握切片厚度，導(dǎo)致在透射光下亮帶與暗帶較難區(qū)分且無(wú)法觀察到核心區(qū)域。因此，在觀察水平切面年輪時(shí)應(yīng)盡量使用反射光觀察。水平切面酸蝕之后，年輪帶更為明顯。

2.1.3 橫切面

小黃魚(yú)耳石橫切面（圖2，圖3）在研磨過(guò)程中，不易磨至核心區(qū)域。當(dāng)以橫切面為截面觀察年輪時(shí)，年輪暗帶和明帶分界清晰，較易觀察，在反射光下能清晰辨別出年輪帶，核心周圍區(qū)域幾乎沒(méi)有干擾輪紋，大多數(shù)切片無(wú)需酸蝕可觀察到年輪。橫切面切片由核心區(qū)域到邊緣的輪紋形狀由平滑的曲線變?yōu)椴贿B續(xù)曲線或折線，輪紋寬度不一且波動(dòng)較大。針對(duì)橫切面，建議盡量使用反射光邊研磨邊觀察年輪情況。酸蝕之后，年輪帶也更為明顯。

圖2 反射光下小黃魚(yú)耳石3個(gè)切面及年齡標(biāo)記（未酸蝕）Fig.2 Age signs on three sections of otolith for L.polyactis under reflected light（no acid etching）

圖3 反射光下小黃魚(yú)耳石3個(gè)切面及年齡標(biāo)記（酸蝕）Fig.3 Age signs on three sections of otolith for L.polyactis under reflected light（acid etch）

2.2 矢耳石3個(gè)切面清晰度評(píng)分比較

對(duì)小黃魚(yú)矢耳石3個(gè)切面輪紋清晰度評(píng)價(jià)結(jié)果（表3）顯示，橫切面輪紋的清晰度最高，被判斷為“非常好”的比例高達(dá)73.33%；其次是水平切面，被判斷為“非常好”的比例達(dá)66.67%；而縱切面被判斷為“一般”和“難以辨認(rèn)”的比例近乎50.00%。

表3 小黃魚(yú)耳石3個(gè)切面的清晰度評(píng)分Tab.3 Distribution of readability scores for three otolith sections of L.polyactis

2.3 生長(zhǎng)方程年齡反演與年齡鑒定比對(duì)

基于VBGF方程年齡反演結(jié)果詳見(jiàn)表4。用單因素方差分析法對(duì)渤海、黃海及東海海域的生長(zhǎng)參數(shù)K、L∞進(jìn)行差異分析，結(jié)果表明，K值差異性顯著（P＜0.05）、漸進(jìn)體長(zhǎng)L∞無(wú)顯著差異（P＞0.05）。將生長(zhǎng)方程計(jì)算結(jié)果與年齡測(cè)記對(duì)比之后分別得出縱切面、水平切面、橫切面的相似度。在縱切面相似度中，生長(zhǎng)方程Lt＝366［1-e-0.11777（t+1.76429）］和Lt＝230［1-e-0.26（t+0.3678）］反演結(jié)果的相似度比較高，分別為53.33%和66.67%。在水平切面相似度中，生長(zhǎng)方程Lt＝206.827［1-e-0.45413（t+0.3534）］反演結(jié)果的相似度為66.67%，生長(zhǎng)方程Lt＝366［1-e-0.11777（t+1.76429）］反演結(jié)果的相似度為86.67%，其他生長(zhǎng)方程均在50.00%以下。在橫切面相似度中，生長(zhǎng)方程Lt＝206.827［1-e-0.45413（t+0.3534）］反演結(jié)果的相似度 為80.00%，生 長(zhǎng) 方 程Lt＝366［1-e-0.11777（t+1.76429）］反演結(jié)果的相似度為86.67%。由于生長(zhǎng)方程Lt＝206.827［1-e-0.45413（t+0.3534）］的研究中采用的樣本數(shù)僅100尾，可能會(huì)因樣本量較少而導(dǎo)致本實(shí)驗(yàn)中年齡反演結(jié)果不準(zhǔn)確，故排除。Lt＝230［1-e-0.26（t+0.3678）］反演結(jié)果的水平切面和橫切面的相似度較低，也可排除。由此得出，黃海及東海小黃魚(yú)的生長(zhǎng)方程Lt＝366［1-e-0.11777（t+1.76429）］的年齡反演結(jié)果，與本實(shí)驗(yàn)中小黃魚(yú)年齡最吻合。結(jié)合清晰度評(píng)分，故可排除縱切面作為小黃魚(yú)的年齡鑒定最佳切面。

表4 小黃魚(yú)生長(zhǎng)方程年齡反演結(jié)果與不同切面年齡相似度對(duì)照表Tab.4 Sim ilarity com paring table of age backward inferring results of grow th equations w ith age determ ination from three otolith sections for L.polyactis

3 討論

3.1 3個(gè)切片特征比較

年齡鑒定在漁業(yè)資源評(píng)估、漁業(yè)管理和資源的合理開(kāi)發(fā)中具有重要作用，高估或低估年齡都可能會(huì)造成資源的過(guò)度開(kāi)發(fā)或浪費(fèi)，而魚(yú)類耳石年輪的清晰度會(huì)影響魚(yú)類年齡鑒定的準(zhǔn)確性。本文對(duì)耳石不同切面清晰度評(píng)分中顯示，橫切面的清晰度最高，年齡鑒定效果最好。分析其原因?yàn)?，橫切面較其他切面表面積較小，易觀察，同時(shí)受次生核影響較小，在研磨過(guò)程中即使切片過(guò)薄也不易導(dǎo)致年輪帶不清晰。

耳石切片上的年輪表現(xiàn)為明暗交替的環(huán)帶現(xiàn) 象，這 與 丁 城 志 等［34］在 描 述 孔 吻 鲃（Poropuntius huangchuchieni）耳石年輪特征時(shí)一致。耳石年輪的形成是由于環(huán)境因素和魚(yú)類內(nèi)源機(jī)制的共同作用［17，35-36］。春夏季節(jié)魚(yú)類攝食活動(dòng)旺盛，生長(zhǎng)速率快，碳酸鈣堆積在耳石的量增多，耳石形成半透明帶，秋冬季節(jié)由于光照減弱導(dǎo)致水溫低，攝食活動(dòng)和生長(zhǎng)速率有所降低，碳酸鈣堆積速度變慢，耳石形成不透明帶［1］。切片輪紋由核心區(qū)域至邊緣的變化對(duì)應(yīng)到具體的耳石形態(tài)變化過(guò)程為，從小黃魚(yú)矢耳石早期的圓形到后期的近橢圓形且表面有不規(guī)則疣狀突起，原因可能是與小黃魚(yú)幼魚(yú)到成魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)［37］。這種變化也出現(xiàn)在多數(shù)魚(yú)類上，如姜濤等［3］發(fā)現(xiàn)刀鱭（Coilia nasus）矢耳石從早期的圓形變化至后期前端分叉的紡錘形，嚴(yán)太明等［38］發(fā)現(xiàn)骨唇黃河魚(yú)（Chuanchia labiosa）矢耳石由早期的圓形發(fā)育為后期的箭矢狀。

縱切面切片表面積較大，這有利于運(yùn)用耳石微化學(xué)最大化地反映小黃魚(yú)全生活史［39-40］。縱切面切片核心周圍區(qū)域干擾輪紋較多，會(huì)對(duì)小黃魚(yú)幼魚(yú)日輪的判斷產(chǎn)生影響。干擾輪紋的產(chǎn)生可能是由于次生核的影響，而次生核形成原因與仔魚(yú)向稚魚(yú)的變態(tài)發(fā)育有關(guān)，仔魚(yú)期生長(zhǎng)率快的個(gè)體，其次生核數(shù)量可能越多［41］。耳石的輪紋特征不僅可以反映個(gè)體發(fā)育過(guò)程以及棲息環(huán)境變化等狀況［42］，還可以用于鑒別不同地理群系小黃魚(yú)［43-44］，這種方法已見(jiàn)于對(duì)大西洋鯡（Clupea harengus）等魚(yú)類的研究［45］。

在研磨過(guò)程中，水平切面的年輪帶較易觀察，在不酸蝕的情況下大多數(shù)耳石也能觀察到年輪（圖2），因此適宜做年齡鑒定。水平切面也可以用來(lái)研究小黃魚(yú)耳石微結(jié)構(gòu)從而判斷日齡和生長(zhǎng)狀況［9］。水平切面靠近核心區(qū)域的輪紋部分密集，其最長(zhǎng)軸更有利于耳石微化學(xué)分析。

橫切面適宜作為年齡鑒定的最佳切面。這與姜濤等［3］和劉子俊等［4］在研究刀鱭和次南極電燈魚(yú)（Electrona carlsbergi）的結(jié)論一致。小黃魚(yú)橫切面幾乎無(wú)次生核，也可觀察仔、稚魚(yú)日齡并進(jìn)行生長(zhǎng)分析。胡海生等［10］在制作小黃魚(yú)橫切面切片時(shí)將耳石橫切為厚度0.5 mm的薄片，這種方法較易磨至耳石核心區(qū)域，但要掌握好耳石切割位置。

3.2 生長(zhǎng)方程年齡反演

本研究中生長(zhǎng)方程的年齡反演以水柏年［32］研究最具代表性，其方程反演的年齡與樣本小黃魚(yú)3個(gè)切面鑒定的年齡相似度均最高。其可能原因分析如下：首先，水柏年［32］實(shí)驗(yàn)樣本包括黃海、東海海域的小黃魚(yú)，其樣本的區(qū)域性與本研究樣本區(qū)域是基本重疊的，這可能是其相似度較高的原因之一。其次，水柏年［32］采用一元線性回歸方法擬合的生長(zhǎng)方程預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率較高；鑒于目前小黃魚(yú)種群結(jié)構(gòu)單一的現(xiàn)狀仍未改變，如果使用Ford-Walford生長(zhǎng)變換法會(huì)導(dǎo)致生長(zhǎng)參數(shù)科學(xué)性不高［12］，這一論點(diǎn)在嚴(yán)利平等［33］研究中有所證實(shí)。嚴(yán)利平等［33］認(rèn)為，使用逆算體長(zhǎng)以Ford-Walford生長(zhǎng)變換法和非線性回歸方法兩種方法來(lái)擬合生長(zhǎng)方程，結(jié)果表明非線性回歸方法較Ford-Walford生長(zhǎng)變換法有較好的擬合。第三，水柏年［32］實(shí)驗(yàn)中生長(zhǎng)指標(biāo)不僅包括魚(yú)體長(zhǎng)和純重，而且以耳石作為擬合生長(zhǎng)方程的年齡鑒定材料，這也是其方程相似度較高的重要原因。此外，本研究中也出現(xiàn)了一些研究者的方程反演結(jié)果與鑒定結(jié)果偏離較大的情況。如LIU等［22］生長(zhǎng)方程反演年齡較其他結(jié)果偏大，其原因可能是在計(jì)算t0時(shí)只是將其代入PAULY［46］的經(jīng)典公式而并未進(jìn)行修正，由此產(chǎn)生較大誤差；不同區(qū)域小黃魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育狀況不同或是本身屬于不同的種群，這也可能是導(dǎo)致其生長(zhǎng)方程反演年齡與年齡鑒定相似度較低的原因之一。需要指出的是，許多魚(yú)類的生長(zhǎng)方程擬合僅采用體長(zhǎng)或體質(zhì)量頻率分布法，如本研究中所涉及的小黃魚(yú)生長(zhǎng)方程利用耳石、鱗片等年齡材料做輔助擬合的研究較少，而單一方法擬合得出的生長(zhǎng)方程準(zhǔn)確性也還有待驗(yàn)證；同時(shí)，擬合生長(zhǎng)方程時(shí)，可考慮運(yùn)用多種方法、多重比較，進(jìn)而選擇更優(yōu)的擬合方法。因此，在以魚(yú)體體長(zhǎng)或體質(zhì)量作為參數(shù)推斷魚(yú)類年齡時(shí)不能簡(jiǎn)單地選擇生長(zhǎng)方程進(jìn)行反演，不僅要考慮取樣時(shí)間、海域等差異性，還應(yīng)結(jié)合魚(yú)類年齡印證結(jié)果和生長(zhǎng)方程擬合方法擇優(yōu)選擇。

同樣，年齡反演結(jié)果還受制于該生長(zhǎng)方程模擬時(shí)的樣本選取。在取樣時(shí)，樣本量并非越多越好，關(guān)鍵在于個(gè)體大小范圍，成體和幼體均應(yīng)有一定數(shù)量。但由于樣本數(shù)量的要求以及采樣可能導(dǎo)致魚(yú)類死亡等問(wèn)題，這些生長(zhǎng)數(shù)據(jù)的獲取所需要的時(shí)間成本是不容忽視的，生長(zhǎng)方程是基于各類體型范圍的個(gè)體大小的數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合以得到最優(yōu)的生長(zhǎng)方程參數(shù)擬合結(jié)果［5］。對(duì)于小黃魚(yú)而言，雌性個(gè)體往往比雄性個(gè)體稍大［8］，應(yīng)盡量將雌、雄魚(yú)分別計(jì)算生長(zhǎng)方程，以此來(lái)避免雌雄魚(yú)體長(zhǎng)和體質(zhì)量的不同所導(dǎo)致的誤差。在本次取樣中有體長(zhǎng)為100 mm以下的雌性小黃魚(yú)已達(dá)到性成熟，而所有生長(zhǎng)方程反演年齡不滿1齡，由此驗(yàn)證了水柏年［32］提出的小黃魚(yú)性成熟提前的現(xiàn)象，同時(shí)也間接說(shuō)明生長(zhǎng)方程反演結(jié)果無(wú)法覆蓋特殊個(gè)體。年齡反演作為魚(yú)類年齡鑒定和生長(zhǎng)研究中重要的研究手段，在反映生物資源量及種群結(jié)構(gòu)動(dòng)態(tài)變化上有著極其重要的意義，基于小黃魚(yú)的年齡反演研究還有待繼續(xù)開(kāi)展。

此外，年齡鑒定材料和方法在研究魚(yú)類年齡和年齡反演中也尤為重要。就同一種魚(yú)而言，不同的年齡鑒定材料上的年輪的清晰程度和數(shù)目不一定是相同的，且不同年齡段的魚(yú)的年齡鑒定最適材料也可能是不一樣的［47］。目前小黃魚(yú)年齡鑒定材料中，耳石是應(yīng)用最廣泛的材料，鱗片也可作為年齡材料，金顯仕［19］借助鱗片作為輔助擬合生長(zhǎng)方程。另外，脊椎骨還被應(yīng)用在大眼金槍魚(yú)（Thunnus obesus）和大黃魚(yú)的年齡鑒定上［47-48］。不同的魚(yú)類其理想的鑒定材料也不同，所以在條件許可時(shí)往往需要通過(guò)多種材料進(jìn)行鑒定并比較其優(yōu)劣。劉艷超等［49］研究雙須葉須魚(yú)（Ptychobarbus dipogon）利用微耳石、星耳石、脊椎骨、鰓蓋骨、臀鱗、胸鱗、側(cè)線鱗和背鱗等8種年齡材料分析比較，從而選擇最適材料。小黃魚(yú)不同年齡段的年齡鑒定最適材料還有待進(jìn)一步研究，作為除耳石和鱗片之外的補(bǔ)充材料，為以后小黃魚(yú)的年齡鑒定提供參考依據(jù)。關(guān)于年齡鑒定，年輪檢視常是最有效的方法［50］之一。但這種方法也存在主觀性等缺點(diǎn)，盡管有學(xué)者認(rèn)為邊際增量分析是對(duì)年齡鑒定的極好補(bǔ)充［2］，但是這種方法的適用性和精確性等還有待證實(shí)。

耳石被廣泛用于研究魚(yú)類的種群結(jié)構(gòu)和生長(zhǎng)特征［51-52］，年齡鑒定的可靠性至關(guān)重要。盡管小黃魚(yú)資源小型化、低齡化的問(wèn)題有所改善，但其種群結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單化的問(wèn)題依然嚴(yán)峻。因此，有必要加強(qiáng)小黃魚(yú)年齡鑒定的基礎(chǔ)性研究和種群動(dòng)力學(xué)科研攻關(guān)，確保我國(guó)小黃魚(yú)漁業(yè)資源的可持續(xù)利用。