傳染性單核細(xì)胞增多癥患兒血清Toll樣受體2、Toll樣受體9與外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及臨床意義

馬永梅，樊 榮

(寶雞市婦幼保健院兒科，陜西 寶雞 721000)

傳染性單核細(xì)胞增多癥(Infectious mononucleosis，IM)是由EB病毒(Epstein-barr virus，EBV)感染引起的急性病，好發(fā)于兒童，以發(fā)熱、淋巴結(jié)及肝脾腫大等為主要表現(xiàn)，部分患兒可并發(fā)心肌炎、肝功能異常等嚴(yán)重并發(fā)癥，危及生命健康[1-2]。EBV感染可引起機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)紊亂，激發(fā)T淋巴細(xì)胞增殖及免疫應(yīng)答，因此隨著IM病情進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸，T淋巴細(xì)胞亞群也呈相應(yīng)變化[3]。Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR)作為模式識別受體，可識別病原體，在天然免疫中發(fā)揮重要作用。其中，TLR2和TLR9在多種免疫細(xì)胞上均有表達(dá)，在機(jī)體抗病毒免疫中占據(jù)重要地位[4]?；诖?，本研究回顧性分析我院106例IM患兒臨床資料，以評估血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群在IM診療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對象與方法

1.1 研究對象 回顧性分析2015年2月至2020年5月寶雞市婦幼保健院106例IM患兒臨床資料，其中男性61例，女性45例；年齡3～14歲，平均(7.23±1.39)歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》第8版[5]中IM診斷標(biāo)準(zhǔn)；年齡3～14歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并慢性心功能不全、支氣管哮喘等慢性疾?。话橹гw感染、腺病毒感染等其他病原體感染；伴艾滋病、甲狀腺功能亢進(jìn)、糖尿病等免疫性疾病或致免疫功能低下的疾?。缓喜籽?、淋巴瘤等良性或惡性腫瘤。本研究病例資料收集均獲得患兒監(jiān)護(hù)人知情同意，且經(jīng)寶雞市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會審批。

1.2 研究方法 106例IM患兒入院后給予更昔洛韋注射液(批號：H20051041)靜脈滴注，每次5 mg/kg，每次滴注時(shí)間>1 h，2次/d，連續(xù)治療7 d。再給重組人干擾素α1b注射液(批號：S20040039)霧化吸入治療，每次2～4 μg/kg+0.9%氯化鈉溶液2 ml，采用氧氣驅(qū)動霧化，每次持續(xù)15 min，2次/d，連續(xù)治療5 d。收集治療前及治療7 d時(shí)外周血，采用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測EBV脫氧核糖核酸(EBV-DNA)，檢測試劑均購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司(試劑盒批號：140936、160539、180934)，以EBV-DNA<500 copies/L定義為陰性。使用流式細(xì)胞儀(型號：FACSCalibur，美國BD公司)檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+表達(dá)水平(試劑盒批號：141119、161033、181127，均購自美國BD公司)，并計(jì)算CD4+/CD8+。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清TLR2、TLR9水平，試劑盒(批號：141108、160931、181044)均購自上海生工生物工程股份有限公司。收集急性期(發(fā)病后3～7 d)和恢復(fù)期(發(fā)病后45～60 d，淋巴結(jié)、脾明顯縮小，臨床癥狀消失)患者空腹外周靜脈血，檢測血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平，檢測方法同上。

1.3 觀察指標(biāo) 比較IM患兒急性期與恢復(fù)期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平；治療7 d時(shí)，根據(jù)EBV-DNA是否轉(zhuǎn)陰將IM患兒分為轉(zhuǎn)陰組和未轉(zhuǎn)陰組，比較兩組一般資料，以及治療7 d時(shí)血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平；分析治療7 d時(shí)EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 IM患兒急性期與恢復(fù)期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較 見表1。IM患兒急性期血清TLR2、TLR9表達(dá)水平高于恢復(fù)期，外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平高于恢復(fù)期，外周血CD4+及CD4+/CD8+表達(dá)水平則低于恢復(fù)期(均P<0.05)。

表1 IM患兒急性期與恢復(fù)期血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較

2.2 兩組患兒一般資料比較 見表2。治療7 d時(shí)，106例IM患兒EBV-DNA轉(zhuǎn)陰82例(77.36%)，納入轉(zhuǎn)陰組；未轉(zhuǎn)陰24例(22.64%)，納入未轉(zhuǎn)陰組。兩組患兒性別、入院前病程及治療前白細(xì)胞計(jì)數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。未轉(zhuǎn)陰組年齡低于轉(zhuǎn)陰組，治療前EBV-DNA載量高于轉(zhuǎn)陰組(均P<0.05)。

表2 兩組患兒一般資料比較

2.3 兩組患兒治療7 d時(shí)血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較 見表3。治療7 d時(shí)，未轉(zhuǎn)陰組血清TLR2、TLR9表達(dá)水平高于轉(zhuǎn)陰組，外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平高于轉(zhuǎn)陰組，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于轉(zhuǎn)陰組(均P<0.05)。

表3 兩組患兒治療7 d時(shí)血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平比較

2.4 治療7 d時(shí)EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平的關(guān)系 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9及外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平呈正相關(guān)(r=0.381、0.362、0.319、0.347，均P<0.05)，與外周血CD4+及CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.360、-0.395，均P<0.05)。

3 討 論

研究[6-7]發(fā)現(xiàn)，TLR2是機(jī)體EBV感染免疫反應(yīng)中最直接的模式識別受體，可直接將病原體交予抗原呈遞細(xì)胞，激活機(jī)體免疫反應(yīng)。Noor等[8]也發(fā)現(xiàn)，B淋巴細(xì)胞是原發(fā)EBV感染最初靶細(xì)胞，而TLR9主要表達(dá)于B淋巴細(xì)胞表面，EBV感染可激活淋巴細(xì)胞上TLR9，產(chǎn)生抗病毒細(xì)胞因子。本研究中，IM患兒急性期血清TLR2、TLR9水平均高于恢復(fù)期，提示隨著IM病情轉(zhuǎn)歸，患兒血清TLR2、TLR9水平顯著降低。推測該結(jié)果由以下原因引起：在IM急性期，EBV入侵引起TLR2、TLR9表達(dá)上調(diào)，使機(jī)體識別抗原體，激活免疫反應(yīng)，隨著治療后EBV的清除，TLR2及TLR9配體對TLR2、TLR9刺激減弱，使TLR2、TLR9表達(dá)下調(diào)[9-10]。不僅如此，治療7 d時(shí)，未轉(zhuǎn)陰組血清TLR2、TLR9水平高于轉(zhuǎn)陰組，且EBV-DNA載量與血清TLR2、TLR9水平呈正相關(guān)。考慮該結(jié)果與治療后EBV-DNA載量較高者EBV未得到有效清除，TLR2、TLR9仍然受病原體刺激而呈高表達(dá)有關(guān)[11]。因此，臨床也可通過監(jiān)測血清TLR2、TLR9水平判斷EBV感染進(jìn)程，評估IM患兒病情轉(zhuǎn)歸情況。

另外，本研究也對T淋巴細(xì)胞亞群的變化展開分析，發(fā)現(xiàn)IM患兒急性期外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平均高于恢復(fù)期，CD4+及CD4+/CD8+則低于恢復(fù)期。其中，CD8+作為細(xì)胞毒T細(xì)胞及抑制T細(xì)胞的表面標(biāo)志，在EBV感染后可大量增殖，發(fā)揮細(xì)胞毒作用，消滅感染的B細(xì)胞[12]；CD3+、CD4+則是輔助T細(xì)胞及效應(yīng)T細(xì)胞表面標(biāo)志，均能刺激免疫細(xì)胞的增殖、分化，以清除EBV[13]；CD8+的大量增殖可抑制CD4+的增殖、分化，而CD4+/CD8+能直接反映機(jī)體免疫功能的高低[14]。上述結(jié)果也說明，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答參與了EBV感染的發(fā)展及轉(zhuǎn)歸。在IM急性期，EBV的感染刺激T淋巴細(xì)胞強(qiáng)烈反應(yīng)，引起CD3+、CD8+表達(dá)上調(diào)，CD4+/CD8+比值降低；而在恢復(fù)期，EBV被清除，免疫紊亂緩解，使CD3+、CD8+表達(dá)下降，CD4+/CD8+動態(tài)平衡改善[3，15]。另外，治療7 d時(shí)，未轉(zhuǎn)陰組外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平高于轉(zhuǎn)陰組，外周血CD4+及CD4+/CD8+低于轉(zhuǎn)陰組，EBV-DNA載量與外周血CD3+、CD8+表達(dá)水平呈正相關(guān)，與外周血CD4+及CD4+/CD8+呈負(fù)相關(guān)，這也說明EBV感染轉(zhuǎn)歸情況與T淋巴細(xì)胞功能具有相關(guān)性，EBV清除后機(jī)體免疫功能也顯著改善[16]。故監(jiān)測T淋巴細(xì)胞亞群變化情況對評估IM患兒病情變化有利[17]。

本研究還發(fā)現(xiàn)，未轉(zhuǎn)陰組年齡低于轉(zhuǎn)陰組，治療前EBV-DNA載量高于轉(zhuǎn)陰組，提示IM抗病毒療效可能與患兒年齡及治療前EBV感染狀況有關(guān)[18]。其原因可能為：年齡較小患兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善，自身抗病毒能力弱，導(dǎo)致病情轉(zhuǎn)歸延遲[19]；治療前EBV-DNA載量較高提示急性期病毒復(fù)制水平較高，病情更為嚴(yán)重，造成治療難度增加[20]。

綜上所述，IM患兒在EBV感染后，TLR2、TLR9表達(dá)上調(diào)，T淋巴細(xì)胞功能紊亂，在EBV清除、病情轉(zhuǎn)歸后，TLR2、TLR9表達(dá)下調(diào)，T淋巴細(xì)胞功能恢復(fù)，因此監(jiān)測血清TLR2、TLR9及外周血T淋巴細(xì)胞亞群表達(dá)水平有利于IM患兒病情進(jìn)展及轉(zhuǎn)歸的判斷。