非小細胞肺癌患者外周血與胸腔積液中淋巴細胞亞群比值的臨床價值研究*

劉春霞，肖士濱，劉聯(lián)斌，黃 剛，郭守俊，李遠香，葉宇慧，王小麗

1.贛州市腫瘤醫(yī)院，江西贛州 341000;2.贛州市立醫(yī)院，江西贛州 341000

非小細胞肺癌(NSCLC)是肺癌常見的病理類型之一，發(fā)生率約占肺癌的80%，因早期無特異性表現(xiàn)，確診時約有75%患者病情處于中晚期，5年生存率極低，嚴重威脅生命質(zhì)量[1-2]。免疫功能紊亂在NSCLC發(fā)生、進展中起到重要作用，當(dāng)機體免疫受抑制或功能低下時腫瘤發(fā)生風(fēng)險更高，而腫瘤進行性生長也會對機體免疫功能造成抑制，形成惡性循環(huán)[3-4]。惡性胸腹腔積液是機體系統(tǒng)性或局部性疾病在胸腹膜腔局部免疫反應(yīng)的表現(xiàn)，也是晚期癌癥的嚴重并發(fā)癥之一，隨著胸腹腔積液的積累，免疫細胞大量被募集，直接影響疾病進程[5]?；诖?，本研究對健康者的外周血和NSCLC患者的外周血和胸腔積液進行淋巴細胞亞群檢測，分析NSCLC患者外周血與胸腔積液中淋巴細胞亞群比值的臨床價值，旨在為臨床診治提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年2月至2022年1月就診于贛州市腫瘤醫(yī)院(簡稱本院)的60例NSCLC患者作為肺癌組，男41例，女19例；年齡42～87歲，平均(61.78±3.46)歲；TNM分期：Ⅲ期27例，Ⅳ期33例；分化程度：高分化15例，中分化26例，低分化19例。納入標準：(1)凝血功能正常；(2)NSCLC均符合《中華醫(yī)學(xué)會肺癌臨床診療指南(2018版)》[6]中診斷標準，經(jīng)組織病理學(xué)證實；(3)TNM分期為Ⅲ期、Ⅳ期者；(4)年齡>18歲。排除標準：(1)入組前3個月內(nèi)接受調(diào)節(jié)免疫相關(guān)藥物治療；(2)患有血液系統(tǒng)疾?。?3)合并自身免疫性疾?。?4)患有精神疾?。?5)患有肝腎功能衰竭；(6)患有嚴重急慢性感染疾??；(7)其他疾病引起的胸腔積液。另選擇同期在本院體檢的體檢健康者60例作為健康組，男38例，女22例；年齡43～86歲，平均(62.01±3.39)歲。兩組各項資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核批準。兩組受檢者均簽署知情同意書。

1.2方法 采集兩組受檢者空腹肘正中靜脈血2 mL，其中健康組于體檢時抽取。肺癌組靜脈血于入院第1天抽取，并抽取肺癌患者胸腔積液5 mL，乙二胺四乙酸抗凝。將獲取的標本用安徽中科中佳科學(xué)有限公司的KDC-1044型低速離心機以1 200 r/min轉(zhuǎn)速離心操作5 min，獲取細胞層，置于澳柯瑪股份有限公司的DW-86L348型醫(yī)用低溫冰箱中-80 ℃低溫保存待檢。使用深圳邁瑞公司BricyteE6流式細胞儀及其配套試劑測定淋巴細胞亞群比值：CD3+、CD4+、CD8+T細胞和自然殺傷細胞(NK細胞)占淋巴細胞的百分比，并計算CD4+/CD8+比值。

1.3觀察指標 (1)比較兩組淋巴細胞亞群檢測結(jié)果，CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞、CD4+/CD8+。(2)評估NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能的變化。

2 結(jié) 果

2.1兩組外周血淋巴細胞亞群檢測結(jié)果比較 肺癌組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較健康組低，NK細胞較健康組高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；兩組CD8+水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能比較 NSCLC患者胸腔積液的CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 兩組外周血淋巴細胞亞群檢測結(jié)果比較

表2 NSCLC患者外周血和胸腔積液免疫功能比較

3 討 論

NSCLC的發(fā)生與大氣污染、吸煙史、既往肺部慢性感染、電離輻射、遺傳等因素關(guān)系密切，早期可引起胸部脹痛、咳嗽、痰血、低燒等，晚期可致患者食欲下降、呼吸困難、體重減輕、疲乏、咯血等癥狀[7]。與小細胞癌相比，NSCLC腫瘤細胞生長分裂較慢，擴散轉(zhuǎn)移較晚，惡性程度較高，預(yù)后較差[8]。相關(guān)研究顯示[9]，機體免疫功能缺陷與NSCLC發(fā)生、轉(zhuǎn)移、進展密切相關(guān)，特別與細胞免疫功能抑制有關(guān)。

淋巴細胞是機體主要免疫細胞，減少可致機體抗腫瘤免疫功能下降，可分為NK細胞、B細胞、T細胞及其亞群。T淋巴細胞約占外周血淋巴細胞的70%，主要執(zhí)行細胞免疫功能，不僅直接殺傷腫瘤細胞，還能活化免疫系統(tǒng)的其他成分，在控制具有免疫原性腫瘤細胞的生長中起到關(guān)鍵作用[10]。CD4+T細胞可促進T細胞、B細胞和其他免疫活性細胞的分化、增生，對免疫細胞間相互作用進行協(xié)調(diào)，并可分泌干擾素(INF)-β、INF-γ、白細胞介素(IL)-2等細胞因子，在機體細胞免疫應(yīng)答中起到關(guān)鍵作用[11]。CD8+T細胞是主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類分子限制性細胞，主要識別存在于被病毒感染的靶細胞、癌細胞等抗原肽片段結(jié)合的復(fù)合分子、靶細胞表面上的Ⅰ類分子，抑制NK細胞的殺傷活性，還能分泌IL-13、IL-10等細胞因子，主要介導(dǎo)體液免疫[12]。CD4+、CD8+相互影響，正常情況下處于動態(tài)平衡狀態(tài)，當(dāng)其比值下降時，細胞免疫的平衡被破壞，則可致機體免疫功能紊亂。NK細胞可在免疫調(diào)節(jié)中起到非特異性殺傷腫瘤細胞作用，其活化后可迅速分泌粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子、INF-γ等細胞因子，并可調(diào)節(jié)吞噬細胞功能，也可分泌細胞毒因子，對腫瘤細胞起到殺傷作用，其活性降低是腫瘤細胞出現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移、進展的重要影響因素[13]。本研究結(jié)果顯示，肺癌組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平較健康組低，NK細胞較健康組高；兩組CD8+水平比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，提示肺癌患者機體存在明顯的免疫功能紊亂。原因在于腫瘤組織可分泌IL-10、INF-β等多種免疫抑制因子，可使APC對腫瘤抗原的加工、攝取和提呈降低，阻礙其激活，對CD4+細胞成熟分化形成抑制，造成CD4+細胞數(shù)目明顯減少，致使免疫誘導(dǎo)和反應(yīng)效應(yīng)不足，機體免疫監(jiān)視作用減弱，影響患者細胞免疫功能[14]。胸腹膜腔是一個相對獨立的空間，在腫瘤等因素刺激下，胸腹膜滲出液不斷累積，淋巴細胞大量聚集，大量免疫活性分子和細胞存在于微環(huán)境內(nèi)，同時胸腹膜滲出液中存在CD4+細胞聚集，其中Th1類免疫細胞可大量釋放INF-γ而發(fā)揮抗腫瘤免疫功能[15]。本研究結(jié)果顯示，NSCLC患者胸腔積液的CD3+、CD4+、CD8+、NK細胞水平低于外周血，CD4+/CD8+水平高于外周血，提示NSCLC患者腹腔局部免疫能力明顯低于整體免疫能力。腫瘤細胞微環(huán)境內(nèi)存在多種可抑制CD4+分化、成熟的免疫抑制因子，而CD4+/CD8+降低，CD8+水平升高，使機體進入免疫抑制狀態(tài)，引起免疫功能紊亂，影響腫瘤細胞的正常清除，促使腫瘤細胞增殖，加速病情惡化。T淋巴細胞被抑制時，NK細胞水平明顯升高，其免疫反應(yīng)增強，表明NSCLC體內(nèi)細胞免疫功能可能激活并促進NK細胞增殖。本研究尚存在觀察指標偏少、未分析淋巴細胞亞群與NSCLC患者預(yù)后之間的關(guān)系、未納入樣本量偏小、未分析兩組患者淋巴細胞亞群的質(zhì)量、數(shù)量等、未與他人研究結(jié)果對比等不足，可能對研究結(jié)果可信度及準確性造成影響，后期仍需加大樣本量深入研究，旨在為臨床提供更為可靠的參考。

綜上所述，NSCLC患者外周血中淋巴細胞亞群比值明顯下降，腹腔局部免疫能力明顯低于整體免疫能力，動態(tài)監(jiān)測胸腔積液中淋巴細胞亞群比值有助于評估患者免疫功能。