FTO在胃腺癌患者癌組織中的表達(dá)及臨床意義*

劉 超

延安大學(xué)附屬醫(yī)院胃腸外科，陜西延安 716000

胃癌是我國(guó)最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤，具有惡性程度高、侵襲性強(qiáng)和轉(zhuǎn)移率高等臨床特點(diǎn)，進(jìn)展期胃癌患者的5年生存率常不及30%[1]。胃腺癌是胃癌中最常見(jiàn)的病理類(lèi)型，由胃腺體細(xì)胞惡變而來(lái)，約占胃癌的95%[2]。脂肪和肥胖相關(guān)蛋白(FTO)起初被報(bào)道與肥胖性疾病關(guān)系密切，后來(lái)發(fā)現(xiàn)它還是一種N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化修飾酶，在細(xì)胞增殖、凋亡和分化等生物過(guò)程中發(fā)揮著重要作用[3]。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)FTO參與了乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌和急性髓性白血病等多種癌癥的發(fā)生與發(fā)展[4-6]。但目前關(guān)于FTO在胃癌中的研究并不多見(jiàn)。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測(cè)FTO在胃腺癌患者癌組織中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)水平與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，旨在為胃癌的診斷和治療提供新思路、新靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2014年1月至2016年6月在延安大學(xué)附屬醫(yī)院普外科行手術(shù)治療的胃腺癌患者的癌組織及匹配的癌旁組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者行根治性手術(shù)，不論術(shù)前是否接受過(guò)新輔助治療；(2)術(shù)后病理確診為T(mén)NM Ⅰ～Ⅲ期胃腺癌；(3)患者臨床資料完善且隨訪依從性好。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)術(shù)前或術(shù)中發(fā)現(xiàn)腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，或無(wú)法行根治性手術(shù)；(2)本研究涉及的相關(guān)指標(biāo)缺乏；(3)患者術(shù)后不能配合隨訪調(diào)查。本研究最終納入102例胃腺癌患者作為研究對(duì)象，其中男60例、女42例，平均年齡(61.0 ±5.8)歲。研究對(duì)象中遠(yuǎn)端胃切除術(shù)84例，近端胃切除術(shù)8例，全胃切除術(shù)10例；研究對(duì)象術(shù)后病理顯示TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期48例，Ⅲ期45例。所有研究對(duì)象術(shù)后隨訪5年，計(jì)算總生存時(shí)間；并根據(jù)患者術(shù)后5年內(nèi)是否死亡分為預(yù)后不良組和預(yù)后良組。

1.2免疫組織化學(xué)檢測(cè) 采用IHC方法檢測(cè)102例胃腺癌患者的癌組織及匹配的癌旁組織標(biāo)本中FTO水平。所有標(biāo)本由石蠟包埋固定并連續(xù)切片，HE染色和光鏡下確認(rèn)后行常規(guī)IHC。SP試劑盒和DAB試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗FTO單克隆抗體(貨架號(hào)為ab124892，稀釋比為1∶100)購(gòu)自上海艾博抗貿(mào)易有限公司，各步驟嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。IHC評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：高倍鏡視野(×400)下隨機(jī)選擇5個(gè)視野，觀察每個(gè)視野中100個(gè)細(xì)胞。根據(jù)FTO染色強(qiáng)度分為0(無(wú)色)、1(淡棕色)、2(棕黃色)及3(棕褐色)分；根據(jù)染色陽(yáng)性細(xì)胞比例分為1(<25%)、2(25%～<50%)、3(50%～<75%)及4(≥75%)分。兩項(xiàng)得分相乘，分值>4分判定為高表達(dá)，分值≤4分判定為低表達(dá)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用單因素分析預(yù)后不良組和預(yù)后良組間臨床病理指標(biāo)的差異，再將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)納入Cox回歸模型進(jìn)行多因素生存分析。用Kaplan-Meier曲線分析FTO高表達(dá)、低表達(dá)患者的預(yù)后。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1胃腺癌和癌旁組織中FTO的表達(dá) IHC顯示，F(xiàn)TO主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)中，部分表達(dá)在胞核內(nèi)，在胃腺癌患者癌組織中染色以棕黃色多見(jiàn)，而在癌旁組織中主要呈淡棕色或不表達(dá)。102例胃腺癌患者的癌組織和癌旁組織中FTO高表達(dá)率分別為67.6%(69/102)和37.3%(38/102)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=18.889,P<0.001)，見(jiàn)圖1。

2.2FTO高表達(dá)與胃腺癌臨床病理特征的關(guān)系 FTO高表達(dá)率在不同TNM分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、不同腫瘤分化程度或不同脈管侵犯情況的胃腺癌患者中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；但FTO高表達(dá)率在不同年齡、性別、腫瘤位置及幽門(mén)螺桿菌感染間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 FTO高表達(dá)與胃腺癌臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

2.3FTO表達(dá)與胃腺癌患者預(yù)后的關(guān)系 術(shù)后5年內(nèi)有67例(65.7%)胃腺癌患者死亡，判定為預(yù)后不良組，仍存活的35例(34.3%)患者歸為預(yù)后良組。單因素分析顯示年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分化程度、脈管侵犯和FTO水平在預(yù)后不良組和預(yù)后良組的分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)，見(jiàn)表2。將上述結(jié)果引入Cox多因素分析，顯示高齡、TNM分期晚、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性、腫瘤分化差及FTO高表達(dá)是患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(均P<0.05)；FTO高表達(dá)的死亡風(fēng)險(xiǎn)是FTO低表達(dá)的1.95倍(95%CI:1.39～2.41;P=0.005)，見(jiàn)表3。Kaplan-Meier曲線也顯示FTO高表達(dá)的患者預(yù)后顯著差于FTO低表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

表2 胃腺癌患者預(yù)后不良的單因素分析[n(%)]

續(xù)表2 胃腺癌患者預(yù)后不良的單因素分析[n(%)]

3 討 論

我國(guó)胃癌的發(fā)病率和病死率均高居惡性腫瘤第2位。盡管目前采用多學(xué)科診療模式，但近50%的胃癌患者在治療后仍會(huì)發(fā)生復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)健康[1-2]。FTO可以通過(guò)降低原位癌和(或)抑癌基因mRNA的m6A甲基化水平以調(diào)節(jié)該蛋白的表達(dá)，在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和耐藥產(chǎn)生等方面均發(fā)揮著重要角色[3]。

既往有研究利用TCGA等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，顯示FTO mRNA在胃腺癌患者癌組織中呈高表達(dá)[7]。本研究結(jié)果顯示，從蛋白層面進(jìn)一步表明FTO在胃腺癌患者癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織；FTO高表達(dá)率在不同TNM分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、不同腫瘤分化程度或不同脈管侵犯情況的胃腺癌患者中比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，這提示FTO可能參與了胃癌的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移，也揭示其作為診斷標(biāo)志物的應(yīng)用價(jià)值。

另外，本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)TO高表達(dá)是胃腺癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，這有助于臨床制訂個(gè)體化治療方案，以提高其生存率。NIU等[4]發(fā)現(xiàn)FTO高表達(dá)有助于增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞的增殖與遷移能力，并且是乳腺癌患者預(yù)后不佳的預(yù)測(cè)因子。LI等[6]報(bào)道FTO在急性髓性白血病中呈高表達(dá)，通過(guò)降低ASB2和RARA的m6A修飾水平阻止了全反式維甲酸介導(dǎo)的細(xì)胞分化，進(jìn)而發(fā)揮促癌作用。有研究揭示FTO可以通過(guò)調(diào)控caveolin-1的m6A甲基化修飾和線粒體能量代謝來(lái)促進(jìn)胃癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[8]。但關(guān)于FTO在胃癌中的作用機(jī)制仍知之甚少，有待進(jìn)一步研究，這也將為FTO作為胃癌治療潛在新靶點(diǎn)提供依據(jù)。

綜上所述，F(xiàn)TO在胃腺癌患者癌組織中異常高表達(dá)，并與預(yù)后不良相關(guān)，對(duì)患者的預(yù)后判斷和診療具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。