Th17/Treg、CD3+CD56+ NKT細(xì)胞水平對(duì)兒童肺炎支原體肺炎病情及預(yù)后的評(píng)估價(jià)值

曹煥萍，孫淑娜，葉江艷，朱耿云，彭銀花，陸 定

上海市第八人民醫(yī)院兒科，上海 200235

肺炎支原體肺炎是由于支原體感染造成的肺部急性感染，是較為常見的肺部疾病之一。流行病學(xué)調(diào)查顯示，在學(xué)齡前患有肺炎的兒童中，肺炎支原體肺炎患兒所占比例較高[1]。學(xué)齡前兒童肺炎支原體肺炎發(fā)病的癥狀不盡相同，同時(shí)可伴發(fā)多種器官及多個(gè)系統(tǒng)的損傷[2]。輕度肺炎支原體肺炎患兒通過科學(xué)的診療，可取得較好的治療效果，但是少數(shù)患兒可能會(huì)病情惡化，進(jìn)而引發(fā)進(jìn)行性呼吸窘迫癥，嚴(yán)重影響患兒的生命安全[3]。因此，在疾病的早期，及時(shí)對(duì)肺炎支原體肺炎患兒的惡化趨勢(shì)進(jìn)行分析，對(duì)于提升患兒的生存率及治療效果具有積極的意義[4]。Th17/Treg屬于CD4 T細(xì)胞，在炎癥反應(yīng)的各個(gè)階段，Th17/Treg表現(xiàn)為明顯的失衡。有研究報(bào)道顯示，Th17/Treg主要通過對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子的活化作用，進(jìn)而造成Th17/Treg進(jìn)一步失衡[5]。CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平在一定程度上反映了體液免疫及細(xì)胞免疫水平[6]。本研究主要通過分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞對(duì)兒童肺炎支原體肺炎病情的評(píng)估價(jià)值，為臨床診療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 以2019年2月至2021年2月在本院進(jìn)行治療的80例肺炎支原體肺炎患兒作為觀察組。(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患兒符合肺炎支原體肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②患兒血清特異性抗-肺炎支原體IgM陽性；③經(jīng)影像學(xué)檢查確診為肺炎支原體肺炎；④所有患兒均無免疫系統(tǒng)疾病。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他因素導(dǎo)致的小兒肺炎；②合并其他呼吸道疾?。虎蹖?duì)本研究使用藥物過敏；④伴有嚴(yán)重合并癥或并發(fā)癥；⑤伴有嚴(yán)重心、肝、腎等器質(zhì)性病變；⑥有長(zhǎng)期糖皮質(zhì)激素使用史。按照肺炎支原體肺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]確診患兒并劃分嚴(yán)重程度，患兒僅表現(xiàn)為上呼吸道感染，且發(fā)熱在7 d內(nèi)則為輕度；患兒表現(xiàn)為支氣管炎及肺炎，發(fā)熱在7 d及以上，體溫在39 ℃以上，存在肺外系統(tǒng)合并癥，使用大環(huán)內(nèi)酯類藥物治療，效果欠佳則為重度。其中輕度患兒50例，重度患兒30例，重度患兒中采用激素治療及未采用激素治療各15例。出院時(shí)患兒的臨床癥狀、體征、影像學(xué)特征基本恢復(fù)正?；蛘咄耆謴?fù)正常，經(jīng)過為期6個(gè)月的隨訪，無反復(fù)呼吸道感染則為預(yù)后良好；出院時(shí)患兒的臨床癥狀及體征未完全恢復(fù)正常、影像學(xué)檢查病灶未完全吸收，或吸收不完全，出院后仍有癥狀，仍需用藥、復(fù)診，經(jīng)過為期6個(gè)月的隨訪有反復(fù)呼吸道感染則為預(yù)后不良[8]。另選取同期健康兒童40例作為對(duì)照組。兩組研究對(duì)象一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。所有研究對(duì)象監(jiān)護(hù)人均同意研究對(duì)象參與本研究，并簽署知情同意書，本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2方法 采集所有研究對(duì)象肘靜脈血2 mL，采用流式細(xì)胞儀分別對(duì)Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)試劑購(gòu)于江蘇洲聯(lián)生物科技有限公司，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

表1 兩組一般資料比較

1.3觀察指標(biāo) 比較觀察組及對(duì)照組的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平；比較輕度患兒及重度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平；比較激素治療和非激素治療重度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平；比較不同預(yù)后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平；分析Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。判斷Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的真陽性、假陽性、真陰性及假陰性結(jié)果，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的參考范圍分別為0～0.74%及9.9%～28.7%，超過范圍則判斷為陽性。并計(jì)算Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的靈敏度、特異度、陽性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

2 結(jié) 果

2.1兩組Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較 觀察組的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.2不同嚴(yán)重程度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較 輕度患兒Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平明顯低于重度患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.3采用不同治療措施治療的重度肺炎支原體肺炎患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較 非激素治療患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平明顯高于激素治療患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表2 兩組Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較

表3 不同嚴(yán)重程度患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較

2.4不同預(yù)后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較 隨訪后發(fā)現(xiàn)，預(yù)后良好患兒69例，預(yù)后不良患兒11例。預(yù)后良好患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平明顯低于預(yù)后不良患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表4 采用不同治療措施治療的重度肺炎支原體肺炎患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平比較

表5 不同預(yù)后情況患兒的Th17/Treg、CD3+CD56+NKT 細(xì)胞水平比較

2.5Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的價(jià)值 串聯(lián)方式的聯(lián)合檢測(cè)分析結(jié)果顯示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率明顯大于單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)。見表6。

表6 Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的效能

2.6ROC曲線分析結(jié)果 ROC曲線分析結(jié)果顯示，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎不良預(yù)后的曲線下面積(AUC)明顯大于單獨(dú)檢測(cè)的AUC患兒(P<0.05)，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT的cut-off值分別為1.33%、36.91%。見表7。

表7 ROC曲線分析結(jié)果

3 討 論

肺炎支原體肺炎是臨床較為常見的呼吸道疾病之一，也是春秋季兒童較為常見的社區(qū)獲得性肺炎[9]。在社區(qū)獲得性肺炎患兒中，肺炎支原體肺炎患兒的比例呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。由于患兒的呼吸系統(tǒng)發(fā)育不全，免疫功能較低，疾病的進(jìn)展較快，嚴(yán)重影響患兒的生命安全。因此，對(duì)肺炎支原體肺炎患兒進(jìn)行早期診斷具有重要意義[10]。而在對(duì)不同預(yù)后患兒進(jìn)行分析時(shí)，在輕度患兒中也可發(fā)現(xiàn)預(yù)后不良者，因此，對(duì)預(yù)后不良患兒進(jìn)行早期預(yù)測(cè)，并早期開展干預(yù)，對(duì)改善患兒的預(yù)后具有積極的意義[11]。

Th17/Treg在機(jī)體的白細(xì)胞介素(IL)-17、IL-21及IL-22等細(xì)胞因子的分泌過程中發(fā)揮重要作用，在炎癥反應(yīng)過程中，其主要通過對(duì)中性粒細(xì)胞的招募作用，進(jìn)而發(fā)揮適應(yīng)性免疫作用，在氣道黏膜抵御病原菌的病理、生理過程中發(fā)揮重要作用。Treg是重要的T細(xì)胞亞群[12]，主要通過對(duì)CD4及CD8因子的抑制發(fā)揮作用。在正常的生理作用下，患兒的Treg主要發(fā)揮IL-10及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β等的調(diào)控作用[13]。Th17及Treg是近年來重要的T淋巴細(xì)胞，在細(xì)胞的分化過程中發(fā)揮重要作用，而在二者的分化過程中，二者相互拮抗，同時(shí)在免疫功能中發(fā)揮重要的作用[14]。臨床研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，Th17/Treg的失衡與自身免疫性疾病發(fā)生及其不良預(yù)后有關(guān)[15]。本研究中，隨著疾病的進(jìn)展，患兒的Th17/Treg呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)。提示在肺炎支原體肺炎疾病的進(jìn)展中，機(jī)體的慢性炎癥反應(yīng)會(huì)進(jìn)一步造成免疫功能明顯降低。王亞洲等[16]通過對(duì)兒童肺炎支原體肺炎的疾病進(jìn)展進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)患兒的Th17/Treg呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)，與本研究結(jié)果一致。CD56及CD3是重要的自然殺傷(NK)細(xì)胞表面標(biāo)志物，在正常的生理狀態(tài)下，其主要分布在肝臟、胸腺及骨髓中，而在外周血中水平較低。有研究報(bào)道，NKT細(xì)胞既有T細(xì)胞的活性，又具有NK細(xì)胞的效能，同時(shí)NKT細(xì)胞通過對(duì)患兒的顆粒酶B及穿孔素的分泌作用，進(jìn)一步發(fā)揮NK細(xì)胞的抗感染作用[17]。在本研究中，隨著疾病的進(jìn)展，CD3+CD56+NKT細(xì)胞呈現(xiàn)明顯的上升趨勢(shì)。張丹丹等[18]研究發(fā)現(xiàn)，肺炎支原體肺炎患兒的NKT細(xì)胞呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)，與本研究結(jié)果一致。以上研究結(jié)果提示對(duì)NKT細(xì)胞及Th17/Treg水平進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)對(duì)于患兒的病情判斷具有重要意義。

另外，通過對(duì)Th17/Treg、CD3+CD56+NKT聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎患兒的預(yù)后效能進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測(cè)的效能明顯高于單獨(dú)檢測(cè)。通過對(duì)患兒Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平的聯(lián)合檢測(cè)，可對(duì)患兒的體液免疫功能及細(xì)胞免疫功能進(jìn)行綜合分析，進(jìn)而對(duì)患兒的總體免疫水平進(jìn)行評(píng)估，對(duì)于預(yù)測(cè)患兒的預(yù)后具有重要意義。同時(shí)，本研究通過對(duì)ROC曲線進(jìn)行分析，得到Th17/Treg、CD3+CD56+NKT預(yù)測(cè)肺炎支原體肺炎患兒不良預(yù)后的cut-off值分別為1.33%、36.91%。

綜上所述，Th17/Treg、CD3+CD56+NKT細(xì)胞水平對(duì)肺炎支原體肺炎患兒的病情評(píng)估及激素治療效果評(píng)價(jià)具有重要的意義，也可作為臨床判斷患兒預(yù)后的重要依據(jù)。