毛細管氣相色譜法測定常通舒顆粒中藁本內(nèi)酯的含量

肖小武，周志強，付輝政，郎淑琴，吳旻昱

1.江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330029；2.江西中醫(yī)藥大學，江西 南昌 330044

常通舒顆粒是用于習慣性便秘，老年性便秘及產(chǎn)后便秘的常用藥，臨床療效顯著，由何首烏、當歸、赤芍、火麻仁、桑葚五味藥組成［1-2］。方中當歸為臣藥，具有補血活血，潤腸通便等功效，現(xiàn)代研究表明當歸主要含有有機酸、多糖類、黃酮類、揮發(fā)油類化合物及其他成分［3-4］。當歸收載于《中國藥典》2020 年版一部［5］，規(guī)定其含揮發(fā)油不得少于0.4%。當歸揮發(fā)油中含量最高的成分為藁本內(nèi)酯，且《中國藥典》2020 年版一部對當歸流浸膏中的藁本內(nèi)酯進行了定性鑒別［5］?，F(xiàn)行的常通舒顆粒質(zhì)量標準缺乏對當歸藥味質(zhì)量控制項目，質(zhì)量標準控制技術(shù)較低，難以保證產(chǎn)品質(zhì)量和臨床療效。目前對常通舒顆粒的質(zhì)量控制技術(shù)研究報道較少［6-8］，故本試驗參考相關(guān)研究［9-10］，以當歸中指標成分藁本內(nèi)酯為考察指標，研究建立GC 法對常通舒顆粒中的藁本內(nèi)酯進行測定，以期為常通舒顆粒的制造生產(chǎn)、質(zhì)量控制和評價提供參考。

1 儀器與試藥

美國安捷倫8890 型氣相色譜儀（配置7693型自動進樣器、FID 檢測器），瑞士賽多利斯BT25S 型十萬分之一電子天平。藁本內(nèi)酯對照品購自中國食品藥品檢定研究院，批號為111859-201906，純度以100% 計。試驗用常通舒顆粒樣品分別為長春英平藥業(yè)有限公司（S1: 批號20190902）和貴州威門藥業(yè)股份有限公司（S2：批號200601，S3:批號200701，S4:批號210901，S5:批號211001，S6:批號211101）。陰性樣品為照常通舒顆粒生產(chǎn)工藝制備缺當歸的陰性樣品。無水乙醇為分析純，

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取藁本內(nèi)酯對照品15.12 mg，置10 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，作為對照品母液；再精密量取上述對照品母液1 mL，置10 mL 量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品內(nèi)容物，研細，取約10.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇25 mL，密塞，稱定重量，靜置過夜后超聲處理15 min，放冷，用無水乙醇補足減失重量，取上清液，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性樣品溶液的制備

取陰性樣品，照“2.2”項下供試品溶液制備方法同法制成陰性樣品溶液。

2.4 色譜條件

以Agilent HP-5（30 m×0.32 mm×0.25 μm）為色譜柱；以高純氮氣為載氣，柱流速為2.5 mL/min；進樣體積為1 μL，進樣分流比為1∶1；進樣口溫度為250 ℃，柱箱采取程序升溫：最初溫度為50 ℃（保留0.5 min），然后以6 ℃/min 的速率升至130 ℃（保留0.5 min），再以10 ℃/min 的速率升至260 ℃；檢測器為FID，檢測器溫度為280 ℃。結(jié)果供試品溶液中藁本內(nèi)酯分離度良好，且陰性無干擾。對照品、供試品和陰性對照溶液色譜圖見圖1。

圖1 各溶液HPLC色譜圖：A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品

2.5 線性關(guān)系考察

精密量取“2.1”項下制備的對照品母液1、1、1、2 mL 分別置于50、20、10、10 mL 的量瓶中，依次用無水乙醇稀釋至刻度。分別取上述4 個濃度的對照品溶液以及對照品母液進樣測定峰面積。以進樣濃度為橫坐標、以測得峰面積為縱坐標繪制標準曲線。結(jié)果藁本內(nèi)酯的回歸方程為Y=2.341 6X+3.102 7，r=0.999 9。表明藁本內(nèi)酯在30.24～1 512.00 μg/mL 的濃度范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗

取“2.1”項下的對照品溶液，按“2.4”項下方法連續(xù)進樣6 次，測定峰面積。結(jié)果藁本內(nèi)酯峰面積的RSD 為1.27%，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取樣品（S1），按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.4”條件下24 h 內(nèi)分別于每隔4 h 進樣測定峰面積，結(jié)果藁本內(nèi)酯的峰面積的RSD 為0.89%，見表1，表明藁本內(nèi)酯在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

表1 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.8 重復性試驗

取樣品（S1），按“2.2”項下方法制備供試品溶液6 份，按上述“2.4”條件進行分析測定，藁本內(nèi)酯平均含量為304.55 μg/g，RSD 為1.92%（n=6），結(jié)果表明此方法重復性較好，見表2。

表2 重復性試驗結(jié)果

2.9 加樣回收率試驗

取樣品（S1）6份，每份約5.0g，精密稱定，各精密加入藁本內(nèi)酯對照品溶液(濃度60.48 μg/mL)，每份25 mL，按“2.2”項下方法除不加無水乙醇外同法制備供試品溶液，按上述“2.4”條件進行分析測定，平均回收率為95.77%，RSD 為1.3%。結(jié)果表明方法準確可靠，見表3。

表3 藁本內(nèi)酯回收率試驗結(jié)果

2.10 樣品的測定

按照擬定的方法對6 批樣品進行測定，結(jié)果見表4。

表4 樣品的測定結(jié)果（n=4）

3 討論

3.1 前處理方式的選擇

本試驗考察了超聲、回流、揮發(fā)油提取三種提取方式，但因藁本內(nèi)酯在高溫下不穩(wěn)定，回流、揮發(fā)油提取以及超聲時間過長均存在熱分解而損失，因此最終采用先冷浸后超聲的提取方式。此外，本試驗還考察了甲醇、無水乙醇、乙酸乙酯以及石油醚四種提取溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無水乙醇的提取率最高，故試驗最終采用無水乙醇為提取溶劑。

3.2 分析方法的確定

本實驗最初考察了液相色譜法進行測定，但常通舒顆粒處方藥味較多，成分復雜且大部分為極性較強、不易揮發(fā)的組分，對測定存在較大的干擾，故本試驗最終選擇了干擾較小的毛細管氣相色譜進行測定。

3.3 樣品結(jié)果分析

從結(jié)果可知，藁本內(nèi)酯的含量在不同生產(chǎn)企業(yè)間相差較大，且同企業(yè)不同批次間含量差異也較大。分析其原因為常通舒顆粒的生產(chǎn)工藝為水煎醇沉，藁本內(nèi)酯受熱不穩(wěn)定且易揮發(fā)造成藁本內(nèi)酯的損耗，提示生產(chǎn)企業(yè)需控制生產(chǎn)工藝參數(shù)，保證常舒通顆粒產(chǎn)品的批間一致性。