鴨跖草總黃酮對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的影響

梁文彬，蔡金玲，溫慶偉，彭華強(qiáng)

高血壓是一種以體循環(huán)動(dòng)脈血壓升高為特征的慢性疾病，隨著病情進(jìn)展常出現(xiàn)心、腦、腎等器官功能或器質(zhì)性損害并發(fā)癥。我國中老年人為高血壓的主要發(fā)病人群[1]。隨著生活及飲食習(xí)慣改變，高血壓發(fā)病率呈年輕化趨勢，高血壓的治療包括新型降壓藥物或降壓器械，有33.33%的高血壓病人血壓控制達(dá)標(biāo)[2]，且一般需長期或終身通過藥物或器械調(diào)節(jié)血壓，給高血壓病人和社會(huì)帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為威脅人類健康的全球衛(wèi)生問題。

鴨跖草是鴨跖草科鴨跖草(Commelina communis Linn.)干燥的地上部分，其味甘、淡，性寒，歸肺、胃、小腸經(jīng)，具有清熱、瀉火、解毒等功效。鴨跖草不僅是傳統(tǒng)中藥，也是廣西傳統(tǒng)的壯藥[3-4]。壯醫(yī)理論認(rèn)為鴨跖草味甜、淡，性寒，可清熱毒，治療腮腺炎、高血壓等疾病。壯藥具有民族性、傳統(tǒng)性和地域性的特點(diǎn)。目前關(guān)于壯藥的研究較少。本研究觀察鴨跖草總黃酮對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)的影響，為壯藥鴨跖草的開發(fā)提供基礎(chǔ)的科學(xué)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 原發(fā)性高血壓大鼠40只，無特定病原體(SPF)級(jí)，雄性，8周齡，體質(zhì)量(240±10)g，由北京維通利華動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：北京百善SCXK(京)2016-0006。Wistar大鼠10只，SPF級(jí)，雄性，8周齡，體質(zhì)量(290±10)g，購自廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：SCXK(桂)2019-0005。大鼠飼養(yǎng)于通風(fēng)良好的環(huán)境，室溫18～25 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，12 h光照晝夜循環(huán)。本研究嚴(yán)格按動(dòng)物倫理要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 鴨跖草總黃酮提?。簩⒏稍秫嗸挪莘鬯楹?，用70%乙醇在80 ℃回流提取1.5 h，采用乙酸乙酯對(duì)醇提液進(jìn)行萃取，聚酰胺樹脂吸附分離出鴨跖草總黃酮，以蘆丁為對(duì)照藥品，檢測鴨跖草總黃酮含量為78.24%?？ㄍ衅绽?汕頭金石制藥總廠生產(chǎn)，批號(hào)190718)；腎素(EL1901017)、醛固酮(ALD，EL1901016)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ，EL1901022)、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE，EL1901014)、一氧化氮(NO，EL1901023)、內(nèi)皮素-1(ET-1，EL1901107)酶聯(lián)免疫試劑盒(廣州瑞博奧生物科技有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 ALC-NIBP大鼠無創(chuàng)血壓測量分析系統(tǒng)(上海奧爾科特生物科技有限公司)；ML740型Power Lab/4SP生物信號(hào)處理和分析系統(tǒng)(澳大利亞ADInstruments公司)；Gel doc2000低溫高速離心機(jī)(德國西門子公司)；9602A-酶標(biāo)儀(北京艾普生物設(shè)備有限公司)。

1.4 分組及給藥 將原發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分為模型組、卡托普利組(40 mg/kg)、鴨跖草總黃酮高劑量組(200 mg/kg)、鴨跖草總黃酮低劑量組(100 mg/kg)，每組10只。灌胃對(duì)應(yīng)的藥物，每日1次，連續(xù)給藥12周。另將Wistar大鼠10只作為正常組。正常組與模型組灌胃等體積生理鹽水。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 動(dòng)脈血管環(huán)舒張和收縮功能 大鼠離體動(dòng)脈血管環(huán)的制備，將離體動(dòng)脈置于4 ℃由氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碳酸氫鈉、葡萄糖組成的氧飽和K-H溶液中，清除血管表面多余組織[5]。將長3 mm動(dòng)脈血管環(huán)置于37 ℃恒溫K-H液，持續(xù)給予含氧氣與二氧化碳的混合氣體(95%∶5%)，通過不銹鋼小鉤連接張力換能器，分別使用1×10-10mol/L、1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的苯腎上腺素(PE)，1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、1×10-5mol/L的乙酰膽堿(Ach)檢測血管環(huán)收縮和舒張功能，其張力的變化傳輸并錄入PowerLab/4SP生物信號(hào)記錄分析系統(tǒng)。

1.5.2 RAAS相關(guān)指標(biāo) 給藥后6周、12周測量大鼠血壓。末次給藥2 h后，3%苯巴比妥鈉腹腔注射麻醉后，腹主動(dòng)脈取血，分離血清，檢測腎素、ALD、AngⅡ、ACE、NO、ET-1含量；分離胸主動(dòng)脈，體外檢測血管舒張和收縮功能。

2 結(jié) 果

2.1 鴨跖草總黃酮對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠收縮壓的影響 給藥后6周、12周，模型組和各給藥組收縮壓高于正常組(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，卡托普利組、鴨跖草總黃酮各劑量組大鼠收縮壓均下降(P<0.05或P<0.01)。詳見表1。

表1 鴨跖草總黃酮對(duì)原發(fā)性高血壓大鼠收縮壓的影響(±s) 單位：mmHg

2.2 各組不同苯腎上腺素濃度胸主動(dòng)脈血管收縮率比較 與正常組比較，模型組和各給藥組主動(dòng)脈血管收縮率增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，卡托普利組、鴨跖草總黃酮各劑量組胸主動(dòng)脈血管收縮率下降(P<0.05或P<0.01)。詳見表2。

表2 各組不同苯腎上腺素濃度胸主動(dòng)脈血管收縮率比較(±s) 單位：%

2.3 各組不同乙酰膽堿濃度胸主動(dòng)脈血管舒張率比較 與正常組比較，模型組和各給藥組胸主動(dòng)脈血管舒張率下降(P<0.01)。與模型組比較，卡托普利組、鴨跖草總黃酮各劑量組胸主動(dòng)脈血管舒張率增強(qiáng)(P<0.05)。詳見表3。

表3 各組不同乙酰膽堿濃度胸主動(dòng)脈血管舒張率比較(±s) 單位：%

2.4 各組大鼠血清腎素、ALD、AngⅡ、ACE含量比較 與正常組比較，模型組和各給藥組血清腎素、ALD、AngⅡ、ACE含量升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，卡托普利組、鴨跖草總黃酮各劑量組血清腎素、ALD、AngⅡ、ACE含量降低(P<0.05或P<0.01)。詳見表4。

表4 各組大鼠血清腎素、ALD、AngⅡ、ACE含量比較(±s)

2.5 各組大鼠血清NO、ET-1含量比較 與正常組比較，模型組和各給藥組血清NO含量降低、ET-1含量升高(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，卡托普利組、鴨跖草總黃酮各劑量組大鼠血清NO含量增加，ET-1含量降低(P<0.05或P<0.01)。詳見表5。

表5 各組大鼠血清NO、ET-1含量比較(±s)

3 討 論

RAAS功能障礙在高血壓發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。高血壓病程中，RAAS處于過度激活狀態(tài)，腎素通過腎靜脈大量進(jìn)入到血液循環(huán)，刺激肝臟生成α球蛋白的血管緊張素原，進(jìn)而在腎素水解下生成血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)，經(jīng)肺循環(huán)ACE催化將其轉(zhuǎn)化為AngⅡ，導(dǎo)致全身微動(dòng)脈收縮，動(dòng)脈血壓升高[6-7]。腎上腺皮質(zhì)球狀帶受到刺激后，血管緊張素(Ang)生成增多，促進(jìn)ALD分泌，進(jìn)而激活RAAS，引起血壓升高[8]。血管管腔直徑及血管緊張程度對(duì)血壓有重要的影響，一般由血管平滑肌的收縮狀態(tài)決定，血管平滑肌收縮狀態(tài)主要由Ca2+內(nèi)流和外流及血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的NO、超極化因子、前列腺素等因子決定[9-10]。本研究結(jié)果顯示，鴨跖草總黃酮能降低高血壓大鼠血壓及血清腎素、ALD、AngⅡ、ACE含量，同時(shí)胸主動(dòng)脈在苯腎上腺素刺激下收縮功能得到抑制，在乙酰膽堿刺激下舒張功能明顯增強(qiáng)。提示鴨跖草總黃酮可能通過調(diào)節(jié)RAAS及相關(guān)因子，改善胸主動(dòng)脈收縮和舒張功能，從而對(duì)血壓發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。

血管內(nèi)皮功能障礙是高血壓發(fā)病的重要誘發(fā)因素。NO是由內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的，可擴(kuò)散性擴(kuò)張血管，維持血管張力，調(diào)節(jié)血壓穩(wěn)定，正常生理狀態(tài)下，NO使內(nèi)皮下血管平滑肌細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，發(fā)揮抗血管壁增殖的作用[11-12]。高血壓發(fā)病中，NO釋放減少，進(jìn)而減少內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)生成，維持血管張力和調(diào)節(jié)血壓穩(wěn)定的作用減低[13]。ET-1作為ET中的一種活性肽，具有較強(qiáng)的縮血管作用，與NO之間失衡，進(jìn)而發(fā)生血管內(nèi)皮功能障礙，且與血壓呈正相關(guān)[14-15]。本研究結(jié)果顯示，鴨跖草總黃酮可降低高血壓大鼠血清ET-1含量，增加NO含量。提示鴨跖草總黃酮調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞功能是發(fā)揮降血壓作用的重要途徑之一。

綜上所述，鴨跖草總黃酮對(duì)高血壓大鼠有較好的降血壓效果，其作用可能通過改善胸主動(dòng)脈收縮和舒張功能紊亂，調(diào)節(jié)RAAS中紊亂的腎素、ALD、AngⅡ、ACE水平及內(nèi)皮細(xì)胞功能NO、ET-1含量發(fā)揮降壓作用。