結(jié)直腸癌患者的GSTP1基因類型及其臨床意義

宣 斌, 王益民

(河北省秦皇島市第一醫(yī)院普外科, 河北 秦皇島 066000)

結(jié)直腸癌發(fā)病率位于所有惡性腫瘤疾病第4位，且隨著飲食結(jié)構(gòu)、環(huán)境、生活習(xí)慣等改變，發(fā)病率有上升趨勢(shì)[1]。手術(shù)是臨床治療結(jié)直腸癌的有效手段，研究報(bào)道，結(jié)直腸癌術(shù)后5年生存率低，對(duì)于晚期、復(fù)發(fā)的結(jié)直腸癌則以化療為主，常見化療藥物包括伊利替康、奧沙利鉑等[2]。隨著新輔助化療在臨床的應(yīng)用，結(jié)直腸癌化療總有效率得到了提升，延長(zhǎng)了患者生存期。近年來研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌患者對(duì)化療方案及毒性作用呈現(xiàn)出明顯的個(gè)體差異，考慮與遺傳多態(tài)性對(duì)藥物代謝、轉(zhuǎn)運(yùn)、作用靶點(diǎn)等的影響有關(guān)[3]。臨床強(qiáng)調(diào)對(duì)結(jié)直腸癌患者治療前應(yīng)行基因檢測(cè)，根據(jù)基因檢測(cè)結(jié)果選擇合理的化療藥物，以改善患者預(yù)后。作為多功能藥物代謝酶，谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P-1(GSTP1)在人體腫瘤組織中有著廣泛的分布，尤其是上皮來源的惡性腫瘤，陽性表達(dá)率高，其對(duì)藥物代謝途徑相關(guān)酶表達(dá)有著直接的影響，但關(guān)于GSTP1基因?qū)Y(jié)直腸癌的影響及意義尚不明確?；诖耍芯渴占?0例結(jié)直腸癌患者，觀察其GSTP1基因類型及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料:回顧性收集2014年1月至2022年1月秦皇島市第一醫(yī)院收治的80例結(jié)直腸癌病例，男性43例，女性37例；年齡26～76歲，平均年齡(58.32±6.27)歲，體重43～83kg，平均(63.28±5.68)kg。納入標(biāo)準(zhǔn)：①CT、MRI及病理學(xué)診斷確診為結(jié)直腸癌。②年齡≥18歲；③患者交流無障礙，可配合研究；④資料齊全，無重大器質(zhì)性疾病；⑤可收集到患者完整的臨床檢查資料；⑥患者符合化療指征；⑦至少存在一個(gè)可測(cè)量病灶；⑧預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：①重要臟器嚴(yán)重受損；②合并精神類疾病；③合并其他類型惡性腫瘤疾病；④存在全身感染癥狀者；⑤不耐受化療方案；⑥免疫功能異?；蚰系K；⑦有聽覺、語言交流障礙，不能與醫(yī)師有效溝通；⑧合并家族史、遺傳性結(jié)直腸癌患者。剔除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料缺失者；②患者中途自愿退出者；③失訪者?；颊呒凹覍賹?duì)研究目的、流程表示了解，加入研究均屬自愿，研究申請(qǐng)得到秦皇島市第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，醫(yī)患雙方就研究相關(guān)事項(xiàng)達(dá)成一致，家屬簽訂知情同意書。

1.2方 法

1.2.1GSTP1基因I105V位點(diǎn)基因檢測(cè):研究所用苯酚氯仿由湖北成豐化工有限公司提供，PCR聚合酶與限制性內(nèi)切酶試劑盒由沃德夫聚合物(上海)有限公司提供，無水乙醇來源于無錫源之泉化工產(chǎn)品有限公司，TRIzol試劑來源于廣州濟(jì)恒醫(yī)藥科技有限公司。CRC患者初治階段即未行化療治療前，采集外周血4mL，基因組DNA提取采用苯酚氯仿法，將其置入-20℃冰箱環(huán)境中保存，采用PCR-RFLP法對(duì)GSTP1基因I105V位點(diǎn)基因分型進(jìn)行檢測(cè)。上游引物：5'-CCCCAGTGACTGTGTGTT-GA-3'，下游引物:5'-CAAGAAGCCCCTTTCTTT-GT-3'，產(chǎn)物為225bp，產(chǎn)物經(jīng)過孵育、消化，結(jié)合條帶數(shù)量對(duì)基因型作出判斷：可見2條帶表示AA型，可見3條帶表示AG型，可見1條帶表示GG型。

1.2.2化療方法:患者均予以以?shī)W沙利鉑為主的化療方案治療，治療第1天，按照85mg/m2的劑量給予奧沙利鉑(成都長(zhǎng)青制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20020647)靜脈滴注，于2h內(nèi)滴注完畢。亞葉酸鈣[廣東嶺南制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20013091，規(guī)格：5mg(以亞葉酸計(jì))]，400mg/m2實(shí)施靜脈滴注；5-FU(齊魯制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H37023697，規(guī)格：50mg/10mL)采用靜脈推注的方式，劑量400mg/m2。之后按照1200mg/m2的劑量予以5-FU2持續(xù)靜滴，時(shí)間為48h。治療2周為1個(gè)周期，共進(jìn)行6個(gè)周期治療。

1.2.3GSTP1表達(dá)檢測(cè):選取18例組織標(biāo)本分別檢測(cè)結(jié)直腸癌組織和癌旁組織(距病灶2cm的組織)GSTP1基因表達(dá)情況，上游引物：5'-CTAGTTTGCCCAAGGTCAAG-3'，下游:5'-AGCCACCTGAGGGGTAAG-3'，產(chǎn)物擴(kuò)增后為493bp。采用PCR檢測(cè)，計(jì)算GSTP1 mRNA相對(duì)表達(dá)量，共進(jìn)行3次實(shí)驗(yàn)，取平均值。

1.3觀察指標(biāo):①通過GSTP1基因檢測(cè)，判斷其類型。②對(duì)比基因突變組(GSTP1基因突變組)、基因野生型組(GSTP1基因野生型組)的臨床及病理特征。③對(duì)比兩組臨床療效，隨訪毒副作用、無進(jìn)展生存期。完全緩解：經(jīng)過治療后目標(biāo)病灶消失且未出現(xiàn)新病灶、癥狀消失，臨床指標(biāo)正常；部分緩解：目標(biāo)病灶減少30%以上維持1個(gè)月；疾病穩(wěn)定：目標(biāo)病灶未縮小或<30%，但未增大、無新病灶；疾病進(jìn)展：目標(biāo)病灶增加或出現(xiàn)新病灶?？傆行?完全緩解率+部分緩解率。④選取18例結(jié)直腸癌患者(9例突變型、9例野生型)組織標(biāo)本分別檢測(cè)結(jié)直腸癌和癌旁組織GSTP1表達(dá)情況。

2 結(jié) 果

2.180例患者GSTP1基因檢測(cè)結(jié)果分析:經(jīng)過基因檢測(cè)顯示，GSTP1基因編碼的I105V位點(diǎn)野生型45例(基因野生型組)，56.25%；突變型35例(43.75%)，將其作為基因突變組。

2.2兩組患者臨床病理特征對(duì)比分析:基因突變組與基因野生型組在年齡、性別、腫瘤分型、組織學(xué)分型、生長(zhǎng)方式、浸潤(rùn)深度、神經(jīng)侵犯、脈管癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者臨床病理特征比較

2.3兩組患者化療效果比較:基因突變組患者的臨床資料總有效率明顯低于基因野生型組，差異有顯著性(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者臨床療效比較n(%)

2.4兩組患者毒副作用比較:兩組患者毒副作用發(fā)生情況比較，差異均無顯著性(P>0.05)。見表3。

表3 兩組患者毒副作用發(fā)生情況比較n(%)

2.5基因突變組與基因野生型組無進(jìn)展生存期比較:隨訪患者無進(jìn)展生存期，基因突變組(4.39±1.24)年明顯低于基因野生型組(6.49±2.15)年，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=5.147，P<0.05)。

2.6結(jié)直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達(dá)情況:選取18例組織標(biāo)本分別檢測(cè)結(jié)直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達(dá)情況，結(jié)果顯示結(jié)直腸癌組織GSTPlmRNA相對(duì)表達(dá)量(0.339±0.032)，高于癌旁組織的(0.243±0.025)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=15.070，P<0.05)。

3 討 論

姑息性切除與化療是臨床治療結(jié)直腸癌的常見手段，隨著醫(yī)療衛(wèi)生技術(shù)的進(jìn)步，臨床治療結(jié)直腸癌的化療方案增多，但化療效果呈現(xiàn)出個(gè)體差異，并非所有患者均能夠從中獲益。因此掌握結(jié)直腸癌患者臨床療效及預(yù)后影響因素尤為重要。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，化療敏感性對(duì)化療結(jié)果有著直接的影響?；熕幬锎x相關(guān)酶的基因位點(diǎn)呈現(xiàn)出多態(tài)性變化，會(huì)對(duì)酶功能產(chǎn)生影響，進(jìn)而對(duì)藥物代謝、化療效果產(chǎn)生影響[4]。作為Ⅱ相代謝酶，GSTP1與親電子細(xì)胞毒性藥物結(jié)合后，能夠強(qiáng)化水溶性，對(duì)化療藥物代謝具有一定的促進(jìn)作用[5]。以往有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)，GSTP1基因A>G堿基替代會(huì)引起GSTP1酶第105位氨基酸改變，表現(xiàn)為異亮氨酸向纈氨酸的突變，降低酶穩(wěn)定性與催化活性[6]。GSTP1基因存在野生型與突變型之分，前者主要是從大自然中獲得，非人工誘變產(chǎn)生；后者則是生物體受到人為誘發(fā)因素影響導(dǎo)致個(gè)體突變產(chǎn)生的細(xì)胞、病毒粒子。兩種基因型來源不同、性質(zhì)不同，其對(duì)結(jié)直腸癌患者的影響尚未得到證實(shí)[7]。本研究對(duì)80例結(jié)直腸癌患者GSTP1基因進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示野生型45例(基因野生型組)，56.25%，突變型35例(43.75%)，與國(guó)外學(xué)者研究結(jié)果一致[8]。

本研究對(duì)比了兩種基因型在各項(xiàng)臨床病理特征方面的差異，結(jié)果顯示均無顯著差異，表明GSTP1基因多態(tài)性可能并不會(huì)影響到結(jié)直腸癌的病理發(fā)展。以往有學(xué)者提出，GSTP1基因多態(tài)性與結(jié)直腸癌易感性相關(guān)，本研究結(jié)果與之不一致，考慮是人種、地域等因素造成的結(jié)果差異[9]。研究對(duì)比了基因突變組與基因野生型組在化療治療效果及無進(jìn)展生存期方面的差異，顯示基因突變組均低于基因野生型組，但兩組毒副作用差異不大，提示與GSTP1基因突變型相比，野生型患者預(yù)后更好，化療治療效果更好。有學(xué)者在研究中提出不同GSTP1基因型應(yīng)用不同化療方案所獲益也呈現(xiàn)出一定的差異，突變型更適用以?shī)W沙利鉑為主的化療，野生型則更能夠從伊立替康化療方案中獲益，但關(guān)于其機(jī)制尚需要進(jìn)一步深入研究[10]。

另外，本研究選取18例組織標(biāo)本分別檢測(cè)結(jié)直腸癌和癌旁組織GSTP1基因表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)結(jié)直腸癌GSTP1表達(dá)顯著高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示GSTP1基因在結(jié)直腸癌中呈現(xiàn)出高表達(dá)。但本研究病例較少，所得結(jié)果可能有所偏倚，后續(xù)仍需大樣本研究，挖掘其臨床價(jià)值，更好地服務(wù)于臨床。

綜上所述，不同GSTP1基因類型的結(jié)直腸癌臨床病理特征無明顯差異，但對(duì)結(jié)直腸癌患者化療治療效果及預(yù)后均會(huì)產(chǎn)生一定的影響，野生型預(yù)后更好，在化療方案中獲益更大。臨床上應(yīng)加強(qiáng)GSTP1基因檢測(cè)，結(jié)合患者基因型選擇合理化療方案，提升治療效果。