流行性出血病的全球流行及分布

羅倩敏，韋麗，韓佃剛，葉玲玲，楊云慶，董俊，張沖，李靜，尹尚蓮，李瑤瑤，何昌霖，董仙蘭，李丹丹，唐曉萍，艾軍

（1.昆明海關技術中心，云南昆明 650200；2.昆明海關技術中心大理分中心，云南大理 671000；3.?？诤ｊP技術中心，海南?？?570311；4.昆明市技術合同認定登記站，云南昆明 650021）

流行性出血?。╡pizootic haemorrhagic disease，EHD）是由流行性出血病病毒（epizootic haemorrhagic disease virus，EHDV）引起的，經(jīng)庫蠓叮咬傳播的非接觸性反芻動物傳染病[1]。EHD主要影響野生和家養(yǎng)反芻動物。白尾鹿（Odocoileus virginianus）感染EHDV 后可發(fā)生嚴重的出血性疾病，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、乏力、食欲不振、流涎過多、面部水腫以及結(jié)膜和口腔黏膜充血、冠狀炎和口炎，發(fā)病率和死亡率很高，是影響白尾鹿健康的重要疾病之一；騾鹿、黑尾鹿和叉角羚羊等感染EHDV后發(fā)生的癥狀較輕，死亡率低；牛、綿羊感染后，產(chǎn)奶量減少，發(fā)生流產(chǎn)或產(chǎn)畸形胎，從而引起巨大生產(chǎn)損失[2]。世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）將EHD 列入了須通報動物疫病名錄[1]。本文對EHD的病原學特征及流行特征進行綜述，以期為EHD防控提供借鑒。

1 病原學特征及傳播媒介

1.1 病原學特征

EHDV 屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬，在遺傳學和形態(tài)學上都與藍舌病病毒（BTV）相似。EHDV 基因組包含10 段線性雙鏈（ds）RNA（Seg-1—Seg-10），編碼7 種結(jié)構蛋白（VP1—VP7）和4 種非結(jié)構蛋白（NS1、NS2 和NS3/NS3a）。結(jié)構蛋白VP1、VP3、VP4、VP6 和VP7 形成病毒核心顆粒，而VP2 和VP5 形成病毒粒子外殼層。VP2 和VP7 分別是決定血清型和血清群的兩種主要蛋白質(zhì)[3]。Seg-3將EHDV 毒株分為兩種地域型（topotype），中國、日本和澳大利亞毒株屬東方型（eastern），美洲和非洲毒株屬西方型（western）[4]。不同地域型同一種毒株在致病性方面也存在差異。例如，在日本出現(xiàn)的EHDV-2 毒株對牛有致病性，而在北美洲流行的同源毒株則沒有[5]。

EHDV 在高溫下極不穩(wěn)定，50 ℃ 3 h，60 ℃15 min 即可失活；在pH6.0～8.0 下敏感，pH6.8～9.5穩(wěn)定，pH4.0 以下以及pH10 以上迅速失活；對乙醚和氯仿等脂質(zhì)溶劑具有抗性，容易被β-丙內(nèi)酯、2%戊二醛、酸、2%氫氧化鈉、2%～3%次氯酸鈉、碘伏和酚類化合物滅活；試驗[5]發(fā)現(xiàn)：在不同溫度條件下，EHDV在血液和組織樣本中有不同反應，-70、4 和20 ℃條件下EHDV 表現(xiàn)穩(wěn)定，可長期保存活力，-20 ℃時表現(xiàn)不穩(wěn)定；對紫外線和γ 輻射線具有抵抗力。

EHDV 最初在淋巴管內(nèi)皮細胞和引流部位感染的淋巴結(jié)中復制。然后，通過血流傳播到其他部位復制，如淋巴結(jié)和脾臟。體外研究[5]表明，EHDV 復制可能依賴于單核細胞。目前，全球各地分離到的EHDV 血清型至少有9 種，包括EHDV-1、EHDV-2、EHDV-4—EHDV-10（表1）。

1.2 傳播媒介

EHD 是蟲媒傳染病，多種因素會影響蟲媒攝入、維持和傳播病原體的能力。雌性庫蠓C.sonorensis可能會在吸食感染鹿的血液時攝入EHDV，但并非所有蠓都會傳播病毒（表2 列出的為已經(jīng)確認能夠傳播EHDV 的庫蠓屬）。蟲媒攜帶并傳播EHDV 的可能性受許多遺傳和環(huán)境因素影響，如攝入的病原體數(shù)量、昆蟲的免疫反應和媒介-病原體基因型相互作用等[12]。

2 全球流行及分布

2.1 美洲

據(jù)報告，在已知的血清型中，美洲僅存在EHDV-1、2 和6 型。C.sonorensis是北美洲唯一被確認的EHDV 傳播媒介。EHDV 于1955 年首次在美國新澤西州的白尾鹿中被分離到，同年在美國密歇根州，1956 年在美國南達科他州，1962 年在加拿大艾伯塔省，1967 年在美國華盛頓州，1971 年在美國西南部的白尾鹿中均分離到該病毒[13]。

表1 全球EHDV 血清型分離情況[6-11]

2006 年在美國印第安納州和伊利諾伊州發(fā)現(xiàn)的EHDV-6，是澳大利亞EHDV-6（CSIRO 753）和北美EHDV-2（艾伯塔?。┙M合的一種新型重組毒株[14]。2008 年在美國堪薩斯州和德克薩斯州，2009 年在美國密蘇里州和密歇根州，2010 年在法屬瓜德羅普，均分離到EHDV-6，表明該病毒已經(jīng)越冬[5，15]。2012 年美國15 個州發(fā)生了大規(guī)模的多血清型EHDV 感染疫情，導致牛臨床發(fā)病和死亡；隨后，2013 年又暴發(fā)了小范圍疫情，病死率高達26%[6]。

2013 年，在進口到特立尼達加勒比島的無癥狀牛中發(fā)現(xiàn)EHDV-6。該病毒的10 個片段中，有8個來自于美國EHDV-6 印第安納毒株（該毒株是含有澳大利亞EHDV-6 片段的重組毒株），另外的第4 段來自澳大利亞的EHDV-2 毒株，第8 段與美國新澤西EHDV-1 毒株核苷酸同源性最高（90.4%）。這種重組病毒可能來自美洲，在那里它從一種局部循環(huán)的EHDV 毒株中獲得了第8 片段。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)，該毒株在與美國當?shù)亓餍械腅HDV-2 毒株重組之前，就已在加勒比海地區(qū)傳播，并可能從加勒比海或南美洲向北傳播至北美洲[16]。

Allen等[17]對加拿大安大略省（2016—2019年）家畜血清進行EHDV 抗體檢測，檢出15 頭牛（9.0%）呈EHDV-2 血清陽性。在法屬圭亞那，分離出EHDV-1、EHDV-6；在厄瓜多爾，295 頭牛血液樣本中檢測到EHDV 抗體，陽性率為81.3%，血清型為EHDV-1 和EHDV-6[18]。在墨西哥的白尾鹿中，EHDV 抗體陽性率為72%；在美國德克薩斯州的白尾鹿中，EHDV 抗體陽性率為90%[19]。在美國佛羅里達州，使用RT-qPCR 方法對2016—2020 年死亡的養(yǎng)殖白尾鹿進行EHDV 血清型鑒定，發(fā)現(xiàn)EHDV-1 占19%，EHDV-2 占55%，EHDV-6占27%（表3）。

表3 2016—2020 年對佛羅里達州鹿場死亡白尾鹿EHDV 的血清型鑒定[20]

據(jù)WOAH-WAHIS 數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計，2010 年以來美洲有4 個國家或地區(qū)報告發(fā)生EHD，分別是法屬瓜德羅普、法屬圭亞那、加拿大、巴西（表4）。

根據(jù)WOAH 報告和相關文獻報道，美洲EHDV 主要流行于北美洲南部和南美洲北部的加勒比地區(qū)，包括美國、加拿大、法屬圭亞那、墨西哥等國家或地區(qū)。這與它們發(fā)達的牛羊養(yǎng)殖業(yè)以及濕潤的大陸性氣候有關。美洲是白尾鹿原產(chǎn)地，其中北美洲國家不僅有野生白尾鹿，還有提供鹿角等傳統(tǒng)裝飾物的小型農(nóng)場人工飼養(yǎng)白尾鹿。這是美洲地區(qū)EHDV 流行并向外傳播的重要因素之一。

表4 EHDV 在美洲的流行情況統(tǒng)計

2.2 亞洲

1959 年在日本分離的EHDV-2（茨城）是首次證明對牛有致病性的EHDV 毒株[14]。當時該病毒導致4 000 頭牛感染死亡，并在受影響地區(qū)的39 000 頭牛身上造成高發(fā)病率[21]。2006 年從以色列牛中分離出來的EHDV-7 被證實起源于非洲[22]。該病毒由西、北向南傳播至位于以色列、巴勒斯坦、約旦交界處的死海，并沿約旦裂谷向北傳播[5]。2015 年、2016 年在以色列分別發(fā)現(xiàn)了EHDV-6 和EHDV-1，其中EHDV-1 與尼日利亞毒株親緣關系密切[23]。EHDV-2（茨城）、EHDV-6和EHDV-7 分別在日本、土耳其和以色列引起牛病，而相同血清型在澳大利亞則不能引發(fā)牛病[5，24]。有報道[15]稱，在巴林分離到的EHDV-6（318 株）與“西方型”病毒同源性較高，而與“東方型”病毒同源性較低。

和東華等[25]對我國云南省邊境地區(qū)牛進行EHDV 血清學調(diào)查，發(fā)現(xiàn)8 個市（縣）的抗體陽性率為72.7%～98.75%，檢出6 種血清型，分別為EHDV-1、2、5、6、7、8?？苊懒岬萚26]對云南省進行EHDV 流行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)11 個縣（市）的抗體陽性率為49.3%～91.3%，檢出6 種血清型，分別為EHDV-2、5、6、7、8、10。我國分離到的EHDV-1、6、10 與日本毒株親緣關系較近[4，10，27]。研究人員對土耳其南部的綿羊和牛進行了血清調(diào)查，發(fā)現(xiàn)EHDV-1 陽性率分別為0.4%和0.9%，EHDV-2陽性率分別為6.5%和4.5%[19]。

據(jù)WOAH-WAHIS 數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計，2006 年以來，亞洲通報EHDV 感染的國家共有3 個，分別是土耳其（烏沙克、穆拉、馬尼薩、伊茲密爾、代尼茲利、布爾杜爾、艾丁、安塔利亞）、以色列（耶路撒冷區(qū)、耶路撒冷分區(qū)、塔拉巴、以色列專屬經(jīng)濟區(qū)、北部區(qū)、中央?yún)^(qū)、海法、南部區(qū)、戈蘭）和日本（熊本、鹿兒島）。具體數(shù)據(jù)見表5。

表5 EHDV 在亞洲的流行情況統(tǒng)計

綜上，亞洲EHDV 流行主要集中在日本、以色列、土耳其，它們都是亞洲牛羊養(yǎng)殖業(yè)發(fā)達的國家。疫情也佐證了EHDV 能夠大規(guī)模侵襲牛羊，造成疫病發(fā)生和死亡的事實。我國在云南省邊境地區(qū)，從牛體內(nèi)分離到6 個EHDV 血清型，牛抗體陽性率也較高，表明我國邊境地區(qū)已遭受境外EDHV 侵襲。

2.3 非洲

2004 年，摩洛哥報告了由EHDV-6（318 株）引起的疫情。2006 年，同一血清型導致該國再次暴發(fā)疫情，發(fā)病率為18.0%，病死率為2.2%；同年EHDV-6 在阿爾及利亞和突尼斯引起疫情[5]。2006 年對在突尼斯傳播的EHDV-6 毒株S2、S3、S6、S7和S10核苷酸序列比較發(fā)現(xiàn)，這5 個片段與在同一地理區(qū)域（非洲、阿拉伯半島和印度洋）分離的EHDV 毒株具有共同的起源[28]。Sailleau等[15]對留尼汪島分離到的EHDV-6 毒株基因組第2 段序列進行分析，發(fā)現(xiàn)2003 年與2009 年在該島引起流行的毒株有高度同源性。這些數(shù)據(jù)表明，相同的毒株已經(jīng)在島上傳播了7 年。經(jīng)序列比較發(fā)現(xiàn)，留尼汪島流行的EHDV-6 毒株與2006—2007 年在地中海盆地流行的EHDV-6 毒株密切相關。

肯尼亞小牛中的EHDV 抗體陽性率為64%，留尼汪島牛羊中的EHDV 抗體陽性率為38%[29]。2016 年在埃及牛群中檢出了EHDV 陽性抗體，血清型為EHDV-1[30]。Cosseddu等[31]研究發(fā)現(xiàn)，毛里塔尼亞駱駝中的EHDV 陽性率高達73%。Mahmoud等[14]調(diào)查了利比亞的EHDV 血清流行情況，檢測了2015 年采集的855 份血液樣本，發(fā)現(xiàn)EHDV 總體血清流行率約為4%，其中小型反芻動物血清陽性率顯著高于牛，綿羊的血清流行率高于其他物種，由此可知綿羊可能在EHDV 流行中發(fā)揮重要作用。Mejri等[32]在突尼斯不同地區(qū)采集了牛和單峰駝血清樣本進行EHDV 抗體篩查，發(fā)現(xiàn)2012—2013 年采集的牛樣品中EHDV 抗體陽性率最高（表6）[32]。

表6 突尼斯2007—2014 年EHDV 流行情況[32] 單位：份

依據(jù)WOAH-WAHIS 數(shù)據(jù)統(tǒng)計，非洲共有5個國家或地區(qū)通報發(fā)生EHDV 感染，分別是突尼斯（宰格萬、托澤爾、希里亞奈、西迪布茲德、斯法克斯、斯貝特拉、尼拜爾、莫娜斯提爾、馬努巴、馬赫迪那、卡賽林、凱魯萬、堅杜巴、比澤太、本阿魯斯、巴賈、阿里亞納）、摩洛哥（東部區(qū)、中南區(qū)、中北區(qū)）、阿爾及利亞（麥迪亞、拉格瓦特、杰勒法）、法屬留尼汪、納米比亞（哈達普）。具體數(shù)據(jù)見表7。

表7 EHDV 在非洲的流行情況統(tǒng)計

綜上所述，非洲EHDV 流行集中在北非地區(qū)的地中海沿岸國家，主要影響牛、駱駝和小型農(nóng)場的綿羊。北非地區(qū)EHDV 的流行對地中海周邊國家和歐洲其他區(qū)域形成嚴重威脅。在印度洋的法屬留尼汪，EHDV-6 流行時間很長，它與地中海盆地國家流行毒株具有同源性。

2.4 歐洲和大洋洲

至今，WOAH-WAHIS 數(shù)據(jù)庫中未有歐洲和大洋洲通報發(fā)生EHDV 感染的相關數(shù)據(jù)。但據(jù)相關文獻記載，澳大利亞目前存在6 種EHDV 血清型，包括EHDV-1、2、5、6、7 和8[16，33]。庫蠓C.imicola是較常見的傳播EHDV 的媒介物種，其雖然是一種亞非物種，但已在南歐建立了自己的地位，目前廣泛分布于葡萄牙，西班牙巴利阿里群島，法國南部大陸、科西嘉島，意大利大陸、撒丁島、西西里島，希臘大陸，土耳其安納托利亞以及附近的幾個希臘島嶼。C.obsoletus和C.punctatus廣泛分布于北歐和中歐的大部分地區(qū)。C.schultzei在非洲和中東廣泛分布，但在歐洲，只有希臘南部大陸的南阿提卡才有記錄[5]。

歐洲雖然沒有EHD 病例報告，但在其周邊亞非國家卻有疫情發(fā)生，對歐洲形成傳入風險。在地中海盆地以及留尼汪島流行的EHDV-6 和EHDV-7對牛具有高致病性，表明除EHDV-2 外，其他血清型也可能對家畜致病，并可能產(chǎn)生相當大的經(jīng)濟損失[21]。此外，在地中海盆地，已報告了4 種EHDV 血清型，如土耳其的EHDV-1、EHDV-2 和EHDV-6，阿爾及利亞、摩洛哥和突尼斯的EHDV-6，以色列和約旦的EHDV-7[14]。這些血清型在地中海盆地的出現(xiàn)也顯著增加了EHDV 入侵中歐和北歐的風險[20]。

值得注意的是，EHDV 與20 世紀90 年代末流行的BTV 存在驚人的相似性。在此期間，一些最初在阿爾及利亞、突尼斯、土耳其和以色列傳播的BTV 血清型能夠穿越地中海，通過西部、東部和南部走廊入侵南歐[5]。

2.5 全球分布變化

EHDV 在世界范圍內(nèi)廣泛傳播，2011 年以前EHDV 影響北美洲和中美洲，南非和中非，以及中東、大洋洲的澳大利亞和東南亞地區(qū)[5]。截至目前，EHDV 在原有區(qū)域不斷向外擴散。據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)[5]以及上述情況匯總：北美洲的EHDV 由美國向北擴散到加拿大達艾伯塔省、安大略省；在南美洲，EHDV 已經(jīng)擴散至厄瓜多爾、法屬瓜德羅普、特立尼達和多巴哥、法屬圭亞那和巴西，流行的3 種EHDV 血清型至今未變（表8）。在非洲，EHDV已擴散至法屬留尼汪、西非毛里塔尼亞以及北非東北部的埃及和利比亞，血清型由原來的3 種增加至4 種。在亞洲，EHDV 已擴散至中國、日本、以色列，血清型由原來的3 種增加至7 種。在大洋洲，EHDV 目前仍局限在澳大利亞，沒有擴散現(xiàn)象，血清型也沒有增加。全球EHDV 血清型流行變化見表8。

3 全球傳播風險因素

3.1 野生宿主種群規(guī)模擴大

最初，EHDV 的易感宿主主要是野生鹿，尤其是北美洲的白尾鹿。白尾鹿原產(chǎn)于美洲，曾瀕臨滅絕，2015 年被列入《世界自然保護聯(lián)盟瀕危物種紅色名錄》。目前白尾鹿在南美洲數(shù)量仍然稀少，但在北美洲如美國、加拿大，由于對白尾鹿的保護，其數(shù)量逐漸增多，增加了感染和傳播EHDV的風險。

表8 全球EHDV 血清型流行分布變化

3.2 傳播方式發(fā)生變化

EHDV與BTV在全球的傳播區(qū)域和傳播媒介相似，兩者的共同媒介包括C.imicola、C.brevitarsis、C.bolitinos、C.obsoletus、C.gulbenkiani、C.magnus、C.sonorensis和C.stellifer。隨著EHDV 在全球的持續(xù)流行傳播，這兩種疫病在一個國家的共同傳播正頻繁發(fā)生[5]。由于蟲媒種群擴大，病毒血清型增加，EHDV 對牛羊的致病性也開始提高。牛羊規(guī)?；B(yǎng)殖量大、養(yǎng)殖密集，隨商業(yè)貿(mào)易可遠距離調(diào)運，一旦染疫，EHDV 不僅可在區(qū)域內(nèi)迅速傳播，也可跨洲傳播，因此養(yǎng)殖牛羊?qū)⒊蔀槠渲饕獋魅驹春蛡鞑ブ黧w。

3.3 病毒基因發(fā)生重配

EHDV 屬于環(huán)狀病毒。環(huán)狀病毒具有巨大的遺傳多樣性以及相似遺傳基因序列，不僅本身可發(fā)生變異產(chǎn)生新的病毒，而且其他入侵的基因與病毒本身存在的基因發(fā)生重組，促進了新重組子代的出現(xiàn)和傳播。

3.4 人為因素促進病毒變異

人類對病毒病的防控行為，如使用減毒活疫苗，過度環(huán)境消殺等，可促使病毒變異或出現(xiàn)流行特征變化，以適應新環(huán)境生存。這包括：病毒通過媒介蠓傳播能力的變化，與地方性病毒重新組合，產(chǎn)生新的遺傳變異后代，毒株變異表現(xiàn)新的流行特性，等等。

3.5 氣候變化引起傳播媒介活躍、范圍變廣

氣候變暖導致EHDV 傳播媒介地理范圍分布變廣，EHDV 在原有區(qū)域不斷向外擴散，使原來沒有節(jié)肢動物傳播病毒的地區(qū)也出現(xiàn)了EHDV，從而導致EHD 全球分布加速。

4 全球控制措施

人類行為導致的動物遷徙和全球貿(mào)易流通的加速，使EHDV 迅速形成了全球流行傳播趨勢。WOAH-WAHIS 數(shù)據(jù)庫收集匯總了2017—2021 年全球?qū)HD 的15 項控制措施：宰前宰后檢 疫（ante and post-mortem inspections）、疫 病報告（disease notification）、常規(guī)監(jiān)測（general surveillance）、監(jiān)測（monitoring）、移動控制（movement control）、篩檢（Screening）、野生動物宿主控制（control of wildlife reservoirs）、病媒控制（control of vectors）、病媒生物監(jiān)測（vector surveillance）、目的性監(jiān)測（targeted surveillance）、區(qū)域區(qū)劃（zoning）、邊境防控（precautions at the borders）、清群和無害化處理（selective killing and disposal）、撲殺（stamping out）、宰殺（slaughter）。不同國家或地區(qū)實施的措施略有不同（圖1），其中日本實施的措施最多（8項），多項措施的綜合利用使日本長期未發(fā)生過大規(guī)模疫情；其次澳大利亞為7 項，自1977—1992年分離出6 種血清型以來，至今的30 年內(nèi)，血清型沒有發(fā)生任何變化，有效阻斷了新血清型EHDV侵入。

5 啟示

圖1 2017—2021 年EHDV 在全球國家/地區(qū)層面的控制措施

近年來，EHDV 在全球流行傳播，各種EHDV 血清型及其載體的地理分布范圍不斷擴大，感染的嚴重程度和頻率逐漸增加，給反芻動物養(yǎng)殖帶來了新挑戰(zhàn)。目前我國邊境地區(qū)已發(fā)現(xiàn)牛羊EHDV 感染，為有效防范EHDV 傳入，建議我國：（1）強化EHDV野生宿主動物活動區(qū)域管控監(jiān)測，防止野生動物與家養(yǎng)動物接觸；（2）加強低洼灌木天然草場改造，削弱傳播媒介生存環(huán)境；（3）加強邊境地區(qū)的EHD 監(jiān)測，嚴厲打擊動物走私、逃檢行為，降低病毒傳入風險；（4）研發(fā)EHDV檢測技術，提高檢測水平，做好EHDV 滅活疫苗研發(fā)儲備。