2014—2021 年云南省普洱市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對

張容萍，魯富有，馬娜，付航，楊子江，陳景仙，張海楠

（普洱市動物疫病預(yù)防控制中心，云南普洱 665000）

動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)動物疫病防控策略與技術(shù)措施的制定和實(shí)施[1]，是法定的承擔(dān)動物疫病診斷、監(jiān)測、流行病學(xué)調(diào)查等職能的獸醫(yī)機(jī)構(gòu)。依托動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)的獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室作為開展具體工作的技術(shù)支撐機(jī)構(gòu)，其技術(shù)水平的高低直接影響轄區(qū)內(nèi)動物疫病的防控效果，關(guān)系畜牧業(yè)的發(fā)展。因此提升獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力，對脫貧攻堅(jiān)、鄉(xiāng)村振興以及維護(hù)公共衛(wèi)生安全具有重要意義。

獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部加強(qiáng)各級實(shí)驗(yàn)室建設(shè)和管理的重要抓手，是加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的有效方法之一[2]。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和云南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳相關(guān)要求，普洱市動物疫病預(yù)防控制中心積極組織各級獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室參加檢測能力比對工作。本文分析了2014—2021 年普洱市各級獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對結(jié)果，以期為進(jìn)一步提高實(shí)驗(yàn)室檢測能力，提升獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室綜合水平奠定基礎(chǔ)[3]。

1 材料與方法

1.1 比對范圍

2014—2021 年，普洱市參加實(shí)驗(yàn)室檢測能力比對的市級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室、邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室以及縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室（通過考核驗(yàn)收）數(shù)量見表1。

表1 2014—2021 年參比實(shí)驗(yàn)室數(shù)量 單位：個(gè)

1.2 比對項(xiàng)目、方法和標(biāo)準(zhǔn)

每年設(shè)置3～5 個(gè)比對項(xiàng)目，涉及非洲豬瘟、口蹄疫、高致病性禽流感、豬瘟、小反芻獸疫、豬偽狂犬病、布魯氏菌病和馬傳染性貧血等動物疫病的病原核酸和抗體檢測。檢測方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、血凝和血凝抑制試驗(yàn)（HA-HI）、虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）、試管凝集試驗(yàn)（SAT）、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID）等。檢測程序均依照國家標(biāo)準(zhǔn)或國家參考實(shí)驗(yàn)室推薦方法（表2）進(jìn)行。

1.3 比對樣品和試劑

比對樣品由云南省動物疫病預(yù)防控制中心統(tǒng)一制備、質(zhì)控、編號、分裝和發(fā)放。每個(gè)比對項(xiàng)目設(shè)置5～6 份盲樣（2017 年每個(gè)比對項(xiàng)目設(shè)置5 份盲樣），每管分裝量為單次試驗(yàn)量的3～4 倍，每份盲樣容量一致，在外觀上無差異。普洱市動物疫病預(yù)防控制中心每年派專人在規(guī)定時(shí)間內(nèi)統(tǒng)一領(lǐng)取全市參比實(shí)驗(yàn)室的比對盲樣和試劑，置于有冰袋的冷藏箱中，并在12 h 內(nèi)送達(dá)參比實(shí)驗(yàn)室。

表2 2014—2021 年普洱市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室參比項(xiàng)目、方法和標(biāo)準(zhǔn)

1.4 結(jié)果判定

以云南省動物疫病預(yù)防控制中心提供的檢測結(jié)果為判定標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 比對結(jié)果報(bào)送

參加比對的獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室在收到樣品3 d 內(nèi)完成檢測，并將檢測結(jié)果報(bào)至云南省動物疫病預(yù)防控制中心。

2 結(jié)果

2.1 市級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室

2014—2021 年市級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室共參加了25 個(gè)比對項(xiàng)目，檢測147 份比對樣品。結(jié)果（表3～4）顯示：檢測正確樣品143份，平均正確率為97.3%；2014—2021 年正確率分別為100%、100%、100%、100%、94.4%、100%、91.7%、94.4%；不同檢測方法正確率分別為ELISA 100%、SAT 100%、AGID 100%、PCR/qPCR 94.4%、HA-HI 93.6%；不同比對項(xiàng)目正確率分別為新城疫病毒抗體檢測100%、O 型口蹄疫病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測100%、豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測100%、馬傳染性貧血病毒抗體檢測100%、非洲豬瘟病毒核酸檢測94.4%、H5/H7/H9亞型禽流感病毒抗體檢測92.8%。

2.2 邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室

2014—2021 年3 個(gè)邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室共參加了25 個(gè)比對項(xiàng)目，檢測423 份比對樣品。結(jié)果（表5～6）顯示：檢測正確樣品405份，平均正確率為95.7%；2014—2021 年正確率分別為94.4%、94.4%、94.4%、93.3%、98.1%、98.1%、98.1%、94.4%；不同檢測方法正確率分別 為SAT 100%、ELISA 98.1%、HA-HI 94.3%、AGID 88.9%、PCR/qPCR 83.3%；不同比對項(xiàng)目正確率分別為豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測100%、豬瘟病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測98.3%、O 型口蹄疫病毒抗體檢測96.9%、H5/H7/H9 亞型禽流感病毒抗體檢測94.4%、新城疫病毒抗體檢測94.4%、馬傳染性貧血病毒抗體檢測88.9%、非洲豬瘟病毒核酸檢測83.3%。

表3 2014—2021 年市級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室不同檢測方法比對結(jié)果

表4 2014—2021 年市級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室不同比對項(xiàng)目正確率統(tǒng)計(jì) 單位：%

2.3 縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室

普洱市共有7 個(gè)縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室，有6 個(gè)通過獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核驗(yàn)收，于2018 年開始參加能力比對。2018—2021年縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室共參加了12 個(gè)比對項(xiàng)目，檢測270 份比對樣品。結(jié)果（表7～8）顯示：檢測正確樣品259 份，平均正確率為95.9%；2018—2021 年正確率分別為91.7%、93.1%、100%、100%；不同檢測方法正確率分別為ELISA 100%、SAT 95.0%、HA-HI 91.1%；不同比對項(xiàng)目正確率分別為O 型口蹄疫病毒抗體檢測100%、豬偽狂犬病毒抗體檢測100%、小反芻獸疫病毒抗體檢測100%、豬瘟病毒抗體檢測100%、布魯氏菌抗體檢測95.0%、H5/H9 亞型禽流感病毒抗體檢測91.1%。

表5 2014—2021 年邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室不同檢測方法比對結(jié)果

表6 2014—2021 年邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室不同比對項(xiàng)目正確率統(tǒng)計(jì) 單位：%

3 分析與討論

3.1 獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室以考促建成效明顯

按照云南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳要求，考核驗(yàn)收合格的獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室方可參加能力比對。市級實(shí)驗(yàn)室和3 個(gè)邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室均于2012 年通過了獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室考核，思茅、寧洱、景東、鎮(zhèn)沅4 個(gè)縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室于2017 年通過了考核，墨江和景谷2 個(gè)縣級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室于2018 年通過了考核。截至2021 年，全市共有10 個(gè)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室通過考核驗(yàn)收。8 年間，參比實(shí)驗(yàn)室范圍覆蓋了所有通過考核驗(yàn)收的10 個(gè)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室。市級、邊境動物疫情監(jiān)測站、縣（區(qū)）級實(shí)驗(yàn)室的檢測平均正確率分別為97.3%、95.7%、95.9%，整體檢測水平較高。能力比對促進(jìn)了各級實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)與升級，參比項(xiàng)目在原來常規(guī)的HA-HI、ELISA、SAT、AGID 等血清學(xué)項(xiàng)目基礎(chǔ)上增加了PCR 和qPCR 方法，各級實(shí)驗(yàn)室檢測能力和水平得到穩(wěn)步提升。

表7 2018—2021 年縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室不同檢測方法比對結(jié)果

3.2 HA-HI 檢測能力薄弱

HA-HI 作為禽流感病毒抗體檢測的常規(guī)方法，是每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須過關(guān)的檢測項(xiàng)目，但各級實(shí)驗(yàn)室的HA-HI 檢測正確率偏低，且年度間正確率表現(xiàn)不穩(wěn)定。2014—2021 年，市級實(shí)驗(yàn)室HA-HI平均正確率為93.6%，其中只有5 年的正確率為100%；邊境動物疫情監(jiān)測站實(shí)驗(yàn)室年均正確率為94.3%，只有1 年所有參比實(shí)驗(yàn)室正確率均為100%；縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室年均正確率為91.1%，只有2 年所有參比實(shí)驗(yàn)室均為100%。以上數(shù)據(jù)說明各實(shí)驗(yàn)室對HA-HI 檢測方法的掌握和運(yùn)用能力依然有所欠缺。究其原因，可能是HA-HI 屬于定量試驗(yàn)，對試劑（1%雞紅細(xì)胞懸液等）、環(huán)境（溫度等）、耗材（反應(yīng)板質(zhì)量等）、儀器（移液器校準(zhǔn)等）等要求較高，以致試驗(yàn)正確率難以保證。

表8 2018—2021 年縣（區(qū)）級動物疫病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室不同比對項(xiàng)目正確率統(tǒng)計(jì) 單位：%

3.3 病原學(xué)檢測能力不足

在普洱市的11 個(gè)獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室中，目前只有市級、瀾滄縣和孟連縣3 個(gè)實(shí)驗(yàn)室可開展病原學(xué)檢測，其余實(shí)驗(yàn)室均因未配備相關(guān)設(shè)施設(shè)備而無法開展此項(xiàng)工作。主要原因是，普洱市位于我國西南邊陲，經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平不高，本級財(cái)政不具備充分支持縣（區(qū)）級建立分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的能力，導(dǎo)致病原學(xué)檢測能力大大不足，無法滿足動物疫病防控需求。

4 建議

經(jīng)過持續(xù)8 年開展檢測能力比對工作，普洱市獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室檢測水平有了很大提升，以考促建卓有成效。但普洱市地處邊境一帶，邊境線長（480 km），境外動物疫情傳入壓力大、防控難度高，實(shí)驗(yàn)室的檢測能力和設(shè)施建設(shè)還有待加強(qiáng)。為了進(jìn)一步提升實(shí)驗(yàn)室綜合水平，更好地為動物疫病防控和維護(hù)公共衛(wèi)生安全提供技術(shù)支撐，提出如下建議。

4.1 培養(yǎng)專業(yè)素質(zhì)強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)工作人員

當(dāng)前基層獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室面臨工作人員少，平均年齡大，理論知識過于落后，操作儀器設(shè)備不熟練，優(yōu)秀人才激勵(lì)政策過于單一等問題。有關(guān)部門應(yīng)重視基層隊(duì)伍的發(fā)展建設(shè)，通過政策傾斜，職稱評定等鼓勵(lì)措施調(diào)動工作人員積極性，通過招聘、培養(yǎng)高校畢業(yè)生，實(shí)現(xiàn)團(tuán)隊(duì)梯度建設(shè)和人才儲備。業(yè)務(wù)部門需加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室人員技術(shù)培訓(xùn)，開展相關(guān)法律法規(guī)、實(shí)驗(yàn)室生物安全、技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)和實(shí)驗(yàn)操作等專題培訓(xùn)，加強(qiáng)與上下級、平級單位間的學(xué)習(xí)交流，建立一支業(yè)務(wù)專、素養(yǎng)高的實(shí)驗(yàn)室檢測人才隊(duì)伍。

4.2 加大實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)費(fèi)投入力度

普洱市地處我國西南邊陲，經(jīng)濟(jì)發(fā)展水平不高，部分縣（區(qū)）未把監(jiān)測經(jīng)費(fèi)納入財(cái)政預(yù)算，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室無固定監(jiān)測經(jīng)費(fèi)或經(jīng)費(fèi)不足。應(yīng)提高對基層實(shí)驗(yàn)室的重視，加大對動物疫病監(jiān)測資金的投入，按照實(shí)際情況，根據(jù)畜禽養(yǎng)殖比例確認(rèn)資金份額，每年歸納至各級政府的財(cái)政預(yù)算；同時(shí)，畜牧獸醫(yī)主管部門制定針對性監(jiān)督措施，保證監(jiān)測資金在基層專款專用，落實(shí)到實(shí)處，避免資金被占用或挪用。

4.3 加快獸醫(yī)系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室的管理體系建設(shè)

大多數(shù)基層實(shí)驗(yàn)室缺乏完善的管理體系或不能按體系有效運(yùn)行。應(yīng)根據(jù)實(shí)際工作條件，不斷完善實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系，實(shí)現(xiàn)對儀器設(shè)備、檢驗(yàn)人員、培訓(xùn)考核、檔案資料、糾正與預(yù)防、質(zhì)量保障、試劑耗材等的全面規(guī)范化管理；同時(shí)，加快完善生物安全管理體系，優(yōu)化《實(shí)驗(yàn)室廢棄物及污染物無害化處理制度》《儀器設(shè)備使用管理制度》《藥品試劑使用管理制度》《實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度》《菌（毒）種管理制度》等管理制度，并嚴(yán)格按照技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范開展實(shí)驗(yàn)室工作。