非肌層浸潤性膀胱癌患者Pyk2蛋白陽性表達(dá)情況與其預(yù)后的關(guān)系探討

劉克旭

佳木斯市中心醫(yī)院泌尿外科 (黑龍江 佳木斯 154002)

泌尿系統(tǒng)常見惡性腫瘤之一為膀胱癌，隨著生活方式的改變、日常壓力的增大等原因該疾病發(fā)病率逐漸上升，非肌層浸潤性膀胱癌是初發(fā)膀胱癌主要患病類型(約70%)，患者臨床表現(xiàn)主要以無痛血尿?yàn)橹鳎蝠つす逃袑友茇S富、淋巴管遍布，該類型膀胱癌轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較大，且經(jīng)手術(shù)治療后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)亦較高，整體預(yù)后較差[1]，及時(shí)進(jìn)行腫瘤標(biāo)記物檢測有助于病情進(jìn)展、預(yù)后的客觀評(píng)估。甲胎蛋白、血管內(nèi)皮生長因子等常規(guī)腫瘤標(biāo)記物在膀胱癌病情及預(yù)后評(píng)估中特異性略有不足，而隨著富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(proline rich protein tyrosine kinase 2，Pyk2)臨床研究的加深，其對(duì)于腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后評(píng)估等方面的優(yōu)勢逐漸顯現(xiàn)[2]，但是關(guān)于非肌層浸潤性膀胱癌Pyk2異常表達(dá)的報(bào)道較少，本文就此展開探討，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2017年9月至2019年6月于本院接受治療的非肌層浸潤性膀胱癌患者78例為觀察對(duì)象，以回顧性研究方式展開探討，常規(guī)資料中男性49例、女性29例，年齡40～73(58.69±7.28)歲，單發(fā)病灶51例、多發(fā)27例，平均直徑(3.95±1.02)cm，臨床分期中Ⅰ期18例、Ⅱ期29例、Ⅲ期31例，分化程度中高分化29例、中分化28例、低分化21例，腫瘤標(biāo)記物檢測結(jié)果中人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)陽性者47例、陰性者31例，轉(zhuǎn)移情況中骨轉(zhuǎn)移10例、肺轉(zhuǎn)移6例、肝轉(zhuǎn)移5例。

納入標(biāo)準(zhǔn)：均為原發(fā)性非肌層浸潤性膀胱癌；均經(jīng)影像學(xué)、病理學(xué)等確診；均接受手術(shù)治療且過程順利。排除標(biāo)準(zhǔn)：轉(zhuǎn)移性非肌層浸潤性膀胱癌；臨床資料缺失；合并免疫性疾??；合并動(dòng)脈夾層的等嚴(yán)重心血管病變；合并其他系統(tǒng)腫瘤。

1.2 方法78例患者均參加手術(shù)切除，將獲取的腫瘤標(biāo)本按步驟處理，加入Pyk2抗體靜置12h，取相應(yīng)免疫組化試劑盒并遵操作說明完成Pyk2蛋白檢測，Pyk2陽性為胞漿(或者胞核)呈現(xiàn)黃色、棕褐色、棕色顆粒樣物，無則為陰性，結(jié)果至少由兩名病理科醫(yī)生進(jìn)行判定，異議病例則由第三名高年資醫(yī)生診斷。顯微鏡下觀察Pyk2表達(dá)水平，以10個(gè)陽性細(xì)胞數(shù)量的視野為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算單個(gè)標(biāo)本中Pyk2表達(dá)情況。所有患者最長隨訪時(shí)間均為24個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo)統(tǒng)計(jì)Pyk2檢出情況，包括陽性例數(shù)占比及Pyk2平均水平。分析Pyk2與疾病臨床特征(如年齡、性別、分期、腫塊大小、分化程度等)兩者間的關(guān)聯(lián)性；比較Pyk2陽性人群與常規(guī)表達(dá)人群的預(yù)后差異，指標(biāo)包括膀胱癌復(fù)發(fā)率、無病生存期(disease free survival，DFS)、無進(jìn)展生存期(progression free sur- vival，PFS)及總生存期(total survival，OS)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析數(shù)據(jù)均錄入SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)及精確概率Fisher檢驗(yàn)，其中年齡分布等比較采用Ridit分析，計(jì)量資料組間比較采取t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為0.05。

2 結(jié) 果

2.1 Pyk2檢出情況78例膀胱癌患者中Pyk2蛋白陽性者59例，占比75.64%，陰性者19例，比例24.36%。表達(dá)水平為(20.36±5.17)個(gè)/LP。

2.2 Pyk2表達(dá)情況與臨床信息間的關(guān)聯(lián)分析Pyk2陽性表達(dá)與否與患者性別、平均年齡、年齡分布、腫塊直徑、HER2及骨轉(zhuǎn)移無直接關(guān)系(P＞0.05)；但是與當(dāng)前腫瘤分期、腫塊分化程度有關(guān)(P＜0.05)，見表1。

表1 分析Pyk2、臨床特征之間的關(guān)系

2.3 預(yù)后分析隨訪結(jié)束時(shí)，57例(73.08%)患者未出現(xiàn)復(fù)發(fā)，21例(26.92%)復(fù)發(fā)，疾病進(jìn)展死亡者5例(6.41%)，其中包括Pyk2陽性者4例、陰性者1例。Pyk2陽性組復(fù)發(fā)率明顯高于陰性組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；且DFS、PES及OS均低于對(duì)照組(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組預(yù)后情況比較

3 討 論

酪氨酸蛋白激酶(tyrosine protein kinase，TPK)與多種腫瘤發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)聯(lián)這一觀點(diǎn)已經(jīng)得到臨床認(rèn)證[3]，TPK本身參與細(xì)胞生長、分化過程，其過高的活性表達(dá)或者發(fā)生過度磷酸化后可促使細(xì)胞異常增生，干擾細(xì)胞正常凋亡過程，最終激發(fā)腫瘤組織形成；而Pyk2隸屬于黏著斑激酶，本質(zhì)為非受體型TPK，因此對(duì)包含Src同源結(jié)構(gòu)域(即SH2結(jié)構(gòu)域)的底物蛋白能促使其磷酸化改變，因Pyk2是廣泛散布于胞漿、聚集于核周的，且可胞漿、細(xì)胞核內(nèi)自由出入，從而連接了胞漿信息及細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)分子[4]，影響細(xì)胞正常代謝最終推動(dòng)腫瘤形成。人體腎臟、脾臟、腦組織、神經(jīng)組織、造血系統(tǒng)、睪丸、小腸等部位均有Pyk2的表達(dá)，大部分情況下Pyk2無需受體或其他酶類就可在細(xì)胞外整合素、各類生長因子、細(xì)胞因子等信號(hào)源下激活，并參與細(xì)胞內(nèi)肌醇脂信號(hào)通路、絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號(hào)通路、jak(janus tyrosine kinase)-STAT(signal transducer and activator of Tranion)信號(hào)通路及富組胺酸糖蛋白(histamine rich glycoprotein，HRG)介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)等多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，上述通路中多條可控制細(xì)胞代謝及轉(zhuǎn)移，進(jìn)而形成相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)[5]。不同系統(tǒng)腫瘤病變其Pyk2水平略有不同，李玲玲等[6]納入研究的45例舌鱗狀細(xì)胞癌患者Pyk2均處于高水平，左凱等[7]研究中肝癌患者Pyk2亦為上調(diào)狀態(tài)，本研究75.64%患者為陽性，表達(dá)水平(20.36±5.17)個(gè)/LP高于韓健樂等[8]報(bào)道中癌旁組織Pyk2水平(5.19±1.89)個(gè)/LP；NASER[9]統(tǒng)計(jì)的胃癌患者病變組織中Pyk2則為低表達(dá)甚至無表達(dá)，但在正常癌旁胃粘膜組織中有一定表達(dá)水平，且表達(dá)水平隨著腫瘤惡性程度的加重而降低，表明不能完全依賴Pyk2高表達(dá)或低表達(dá)對(duì)所有腫瘤患者病情現(xiàn)狀進(jìn)行而一刀切的判斷[10]，應(yīng)綜合考慮Pyk2生理性分布、其他腫瘤標(biāo)記物及生物學(xué)指標(biāo)。

在Pyk2、腫瘤患者臨床信息兩者間相關(guān)性分析中，Pyk2蛋白高表達(dá)與腫瘤惡性程度、分化程度均有明顯相關(guān)性，表明Pyk2表達(dá)水平在非肌層浸潤性膀胱癌疾病進(jìn)展占據(jù)重要地位，較高水平Pyk2抑制了凋亡因子在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)能力，使得腫瘤細(xì)胞大量繁殖而凋亡進(jìn)程變慢[11]，促使膀胱癌持續(xù)進(jìn)展。Pyk2參與TPK受體及正常細(xì)胞內(nèi)各類激素、神經(jīng)遞質(zhì)等信號(hào)分子的整合與傳導(dǎo)，Pyk2作為信號(hào)通路中的上游信號(hào)，高含量Pyk2促使下游信號(hào)被無差別廣泛調(diào)節(jié)[12]，進(jìn)而對(duì)細(xì)胞增殖強(qiáng)度、遷移能力等有重要促進(jìn)作用，使得轉(zhuǎn)移出現(xiàn)、預(yù)后不佳，且有研究證明[13]，針對(duì)骨腫瘤患者使用Pyk2抑制劑是有效的，在控制腫瘤生長速度的同時(shí)促進(jìn)正常骨的形成，因此可認(rèn)為Pyk2表達(dá)情況與原發(fā)腫瘤是否發(fā)生骨轉(zhuǎn)移有一定關(guān)聯(lián)，本研究中Pyk2陽性患者最終發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的病例數(shù)僅略高于Pyk2陰性組，但未構(gòu)成統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.055)，可能與樣本量較少、隨訪時(shí)間較短有關(guān)。MOUSAWI FATEMA等[14]的研究直接闡述了Pyk2由細(xì)胞外信號(hào)激活后可介入整合素αVβ3參與的細(xì)胞粘附過程及破骨細(xì)胞的活力調(diào)節(jié)，進(jìn)一步表明Pyk2異常表達(dá)對(duì)骨腫瘤發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)性。HER2與配體結(jié)合后發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象改變[15]，參與TPK介導(dǎo)的各類信號(hào)通路并參與腫瘤形成與發(fā)展進(jìn)程，表1中顯示Pyk2與HER2并不存在相關(guān)性，筆者分析可能與樣本量過少有關(guān)，其次可能與兩者均為細(xì)胞增殖、抗凋亡的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素有關(guān)[16]。在Pyk2與膀胱癌預(yù)后關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果中，Pyk2陽性組腫瘤復(fù)發(fā)率顯著高于陰性組，其DFS、PES、OS均明顯短于后者，表明Pyk2表達(dá)同樣與預(yù)后有有所關(guān)聯(lián)，非肌層浸潤性膀胱癌患者Pyk2水平越高，其預(yù)后越差。

綜上所述，非肌層浸潤性膀胱癌患者的Pyk2處于高表達(dá)狀態(tài)，高表達(dá)結(jié)果與當(dāng)前腫瘤嚴(yán)重分級(jí)、分化程度等有一定相關(guān)性，對(duì)患者預(yù)后判斷亦有一定指導(dǎo)作用。未行Pyk2高表達(dá)、低表達(dá)判定及相關(guān)探討是本研究不足之處。