CMIA法在HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中的應(yīng)用價值

張 楠

洛陽市第三人民醫(yī)院(洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)檢驗科 (河南 洛陽 471002)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)作為乙肝患者常見病原體，其可導(dǎo)致患者病程遷延，治愈難度大，預(yù)后較差[1]。HBV感染可激活體液抗體應(yīng)答，血清中乙肝表面抗體(HBsAb)能清除血液中病毒顆粒，但抗體抗原形成免疫復(fù)合物，會沉積在肝細(xì)胞中，造成肝毛細(xì)血管堵塞，引起急性肝壞死，并會暴露肝特異性脂蛋白抗原，損害肝細(xì)胞[2]。同時免疫細(xì)胞可識別HBV，直接殺傷靶細(xì)胞，但細(xì)胞免疫低下無法有效清除病毒，造成慢性感染，而細(xì)胞免疫反應(yīng)過度會造成大量肝細(xì)胞損傷，產(chǎn)生重癥肝炎。此外，HBV作為傳染病毒，可經(jīng)性接觸、血液途徑、醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露傳播[3-4]。因此，應(yīng)盡早對HBV感染患者進(jìn)行確診，及時予以患者有效治療，避免病情加重，減輕肝損傷。乙肝五項指(HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb)是診斷HBV感染常用血清學(xué)指標(biāo)[5]。臨床常用酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝五項，其操作簡單，但結(jié)果易受環(huán)境影響，準(zhǔn)確率較低[6-7]。隨著我國檢測技術(shù)發(fā)展，化學(xué)發(fā)光技術(shù)在HBV感染血清學(xué)標(biāo)志物檢測中廣泛應(yīng)用。微粒子化學(xué)發(fā)光法(CMIA)是結(jié)合免疫反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，通過化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原、抗體，進(jìn)行抗體、抗原定量檢測[8]。研究顯示，ELISA與化學(xué)發(fā)光法因方法學(xué)、放大信號等差異，在檢測數(shù)值方面存在差異[9]。本研究旨在探究CMIA法在HBV感染患者血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平檢測中的應(yīng)用價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2019年5月至2021年4月我院406例疑似HBV感染患者，男287例，女119例；年齡20～48歲，平均(34.12±6.33)歲；BMI18.5～28.6 kg/m2，平均(23.64±1.27)kg/m2。排除標(biāo)準(zhǔn)：MOCA評分異常、惡性腫瘤、精神異常、其他病毒性疾病。

1.2 檢測方法抽取清晨空腹肘靜脈血5mL，放入離心機(jī)中離心分離血清，3000r/min，離心10min，提取血清，-20℃冰箱保存。采用CMIA法測定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平，使用安圖A2000 Plus全自動化學(xué)發(fā)光儀，試劑盒由鄭州安圖公司提供，嚴(yán)格按照說明書操作。采用ELISA法測定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平，使用安圖酶標(biāo)儀，試劑盒由上?？迫A生物工程股份有限公司提供，嚴(yán)格按照說明書操作。CMIA法檢測陽性判定：HBsAb＞10 mIU/mL，HBsAg＞0.05 IU/mL，HBeAb＞1 PEI U/mL，HBeAg＞0.1 PEI U/mL，HBcAb＞0.15 PEI U/mL。ELISA法檢測陽性判定：HBsAb＞1 S/CO，HBsAg＞1 S/CO，HBeAb＜1 S/CO，HBeAg＞1S/CO，HBcAb＜1 S/CO。

1.3 觀察指標(biāo)(1)根據(jù)美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會(NCCLS)EP5-A文件中關(guān)于評價臨床定量測量方法精密度的要求，每日對標(biāo)本做2批實驗，間隔時間＞2h，對樣品做雙份測定，抽取40對結(jié)果。檢測前室溫放置0.5h，再進(jìn)行檢測。統(tǒng)計分析檢測結(jié)果，計算變異系數(shù)(CV)。(2)對比CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果。(3)取ELISA法HBsAb、HBsAg 6點定標(biāo)液各200μl，根據(jù)不同濃度梯度加入5個試管內(nèi)，0濃度為空白。抽取1份HBsAb、HBsAg陽性血清，用CMIA法檢測濃度，將HBsAb、HBsAg陽性血清各200 μl將入已知濃度試管，重復(fù)檢測2次，取平均值，回收率=各濃度點實測平均值/理論期望值×100%。(4)對比CMIA法與ELISA法檢測HBsAg最低濃度。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法通過SPSS 22.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料用(±s)表示，行t檢驗，計數(shù)資料用n(%)表示，行χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HBV疑似患者血清學(xué)標(biāo)志物CV值的比較與ELISA法比較，CMIA法檢測HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物CV值較低，低差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物檢測CV值比較(%)

2.2 HBV疑似感染患者血清學(xué)標(biāo)志物符合率的結(jié)果CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清標(biāo)志物的符合率為99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%，見表2。

表2 HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果對比(%)

2.3 CMIA法回收率測定HBsAb平均回收率為98.37%(96.76%～99.61%)，HBsAg平均回收率為97.81%(94.92%～99.45%)，見表3～表4。

表3 不同濃度HBsAb回收率(%)

表4 不同濃度HBsAg回收率(%)

2.4 HBsAg最低濃度CMIA法檢測HBsAg最低濃度0.05IU/mL低于ELISA法0.16 IU/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討 論

HBV傳染性強，而我國為乙型肝炎高發(fā)國家，數(shù)據(jù)顯示，2015年我國HBV感染患者達(dá)3000萬[10]。常規(guī)檢測方法診斷HBV感染易出現(xiàn)漏診、誤診，診斷效果不太理想，影響疾病及時治療及控制HBV傳播; 盡管使用PCR擴(kuò)增乙肝病毒DNA進(jìn)行定量檢測是確診HBV感染的金標(biāo)準(zhǔn)， 但其存在耗時長， 費用高等缺點，對于部分患者臨床接受程度有限。因此，需尋找一種準(zhǔn)確有效, 價格低廉快速HBV感染檢測方法，以提高診斷效果。

乙肝五項指標(biāo)是HBV感染診斷常用檢測治療，可有效反映HBV感染狀態(tài)，指導(dǎo)臨床診療。人體感染HBV后，血液中會存有大量HBsAg，是HBV感染的標(biāo)志之一[11]。HBsAb是HBV免疫的保護(hù)性抗體，由HBsAg誘導(dǎo)產(chǎn)生，較高濃度HBsAb可有效清除機(jī)體內(nèi)HBV，在乙肝疫苗接種后或 HBV感染恢復(fù)期出現(xiàn)，是HBV感染特異性免疫標(biāo)志[12]。HBeAg作為第2種血清學(xué)抗原標(biāo)志物，可在軀體被HBV感染后被檢出，HBeAg檢出率升高，提示肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷，患者HBV傳染性強[13]。HBeAb是受HBeAg刺激產(chǎn)生的抗體。HBcAb也是HBV感染后人體出現(xiàn)的血清抗體，是一種敏感的血清學(xué)標(biāo)志。ELISA法是臨床HBV血清標(biāo)志物檢測常用方法。ELISA法是將可溶性抗體、抗原結(jié)合至固相載體上，根據(jù)一定的抗體只能與特定抗原結(jié)合，具有特異性，進(jìn)行免疫反應(yīng)定量、定性檢測。胡梅霞等[14]研究顯示，ELISA檢測HBsAg可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果，通過增加標(biāo)本的離心時間和提高離心速度可有效減少假陽性例數(shù)。ELISA法實驗步驟較多，標(biāo)本質(zhì)量、運輸過程、環(huán)境等多種因素可能影響檢測穩(wěn)定性，導(dǎo)致ELISA法檢測結(jié)果誤差較大，易出現(xiàn)假陽性。我國各級醫(yī)院ELISA法檢測自動化水平差異較大，基層醫(yī)院自動化水平低，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。而CMIA法是在ELISA法、放射免疫分析法的基礎(chǔ)上改進(jìn)形成的新型檢測方法，CMIA法是通過微粒子擴(kuò)大抗體、抗原結(jié)合面積，結(jié)合免疫反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，等抗體或抗原反應(yīng)，或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原、抗體后，分離游離態(tài)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物，加入其它相關(guān)物，引起化學(xué)發(fā)光，進(jìn)行抗體、抗原定量檢測[15-17]。CMIA法不僅有ELISA法檢測簡便、反應(yīng)時間短的特點，還具有放射免疫分析法靈敏、特異性強、用樣量少等特點。許麗楓等[18]研究發(fā)現(xiàn)，CMIA法可實現(xiàn)全自動化的定量檢測，使乙肝五項檢測更快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、少見模式少，可降低漏檢率，可為臨床早期診斷、有效治療及改善預(yù)后提供有價值的參考依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，CMIA法檢測HBV感染患者乙肝五項CV值低于ELISA法(P＜0.05)，HBsAb平均回收率為98.37%，HBsAg平均回收率為97.81%，說明CMIA法應(yīng)用于HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中，檢測精密度高，回收率高?？赡苁怯捎贑MIA法采用全自動化檢測，可減小手工操作對結(jié)果的影響，穩(wěn)定性高，有利于提高檢測精密度。此外，CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清標(biāo)志物的符合率為99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%，具有高度一致性。而HBeAb、HBcAb存在一定差異，可能是由于檢測原理不同、原材料存在差異所致，不會明顯影響檢測結(jié)果。本研究還顯示，CMIA法檢測HBsAg最低濃度0.05 IU/ml低于ELISA法0.16 IU/ml，提示CMIA法可應(yīng)用于HBV感染患者低水平血清HBsAg檢測中，效果良好，有利于縮短“窗口期”時間。低水平HBsAg感染確診，可提高檢出率，便于及時控制傳染。

綜上所述，CMIA法應(yīng)用于HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中，檢測精密度高，回收率高，準(zhǔn)確度高，且用于低水平血清HBsAg檢測中，效果良好。