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    CMIA法在HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中的應(yīng)用價值

    2022-11-07 02:45:16
    罕少疾病雜志 2022年10期
    關(guān)鍵詞:化學(xué)發(fā)光抗原標(biāo)志物

    張 楠

    洛陽市第三人民醫(yī)院(洛陽職業(yè)技術(shù)學(xué)院第一附屬醫(yī)院)檢驗科 (河南 洛陽 471002)

    乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)作為乙肝患者常見病原體,其可導(dǎo)致患者病程遷延,治愈難度大,預(yù)后較差[1]。HBV感染可激活體液抗體應(yīng)答,血清中乙肝表面抗體(HBsAb)能清除血液中病毒顆粒,但抗體抗原形成免疫復(fù)合物,會沉積在肝細(xì)胞中,造成肝毛細(xì)血管堵塞,引起急性肝壞死,并會暴露肝特異性脂蛋白抗原,損害肝細(xì)胞[2]。同時免疫細(xì)胞可識別HBV,直接殺傷靶細(xì)胞,但細(xì)胞免疫低下無法有效清除病毒,造成慢性感染,而細(xì)胞免疫反應(yīng)過度會造成大量肝細(xì)胞損傷,產(chǎn)生重癥肝炎。此外,HBV作為傳染病毒,可經(jīng)性接觸、血液途徑、醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露傳播[3-4]。因此,應(yīng)盡早對HBV感染患者進(jìn)行確診,及時予以患者有效治療,避免病情加重,減輕肝損傷。乙肝五項指(HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb)是診斷HBV感染常用血清學(xué)指標(biāo)[5]。臨床常用酶聯(lián)免疫吸附法檢測乙肝五項,其操作簡單,但結(jié)果易受環(huán)境影響,準(zhǔn)確率較低[6-7]。隨著我國檢測技術(shù)發(fā)展,化學(xué)發(fā)光技術(shù)在HBV感染血清學(xué)標(biāo)志物檢測中廣泛應(yīng)用。微粒子化學(xué)發(fā)光法(CMIA)是結(jié)合免疫反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光系統(tǒng),通過化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原、抗體,進(jìn)行抗體、抗原定量檢測[8]。研究顯示,ELISA與化學(xué)發(fā)光法因方法學(xué)、放大信號等差異,在檢測數(shù)值方面存在差異[9]。本研究旨在探究CMIA法在HBV感染患者血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平檢測中的應(yīng)用價值,報道如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料選取2019年5月至2021年4月我院406例疑似HBV感染患者,男287例,女119例;年齡20~48歲,平均(34.12±6.33)歲;BMI18.5~28.6 kg/m2,平均(23.64±1.27)kg/m2。排除標(biāo)準(zhǔn):MOCA評分異常、惡性腫瘤、精神異常、其他病毒性疾病。

    1.2 檢測方法抽取清晨空腹肘靜脈血5mL,放入離心機(jī)中離心分離血清,3000r/min,離心10min,提取血清,-20℃冰箱保存。采用CMIA法測定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平,使用安圖A2000 Plus全自動化學(xué)發(fā)光儀,試劑盒由鄭州安圖公司提供,嚴(yán)格按照說明書操作。采用ELISA法測定血清HBsAb、HBsAg、HBeAb、HBeAg、HBcAb水平,使用安圖酶標(biāo)儀,試劑盒由上??迫A生物工程股份有限公司提供,嚴(yán)格按照說明書操作。CMIA法檢測陽性判定:HBsAb>10 mIU/mL,HBsAg>0.05 IU/mL,HBeAb>1 PEI U/mL,HBeAg>0.1 PEI U/mL,HBcAb>0.15 PEI U/mL。ELISA法檢測陽性判定:HBsAb>1 S/CO,HBsAg>1 S/CO,HBeAb<1 S/CO,HBeAg>1S/CO,HBcAb<1 S/CO。

    1.3 觀察指標(biāo)(1)根據(jù)美國國家臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)委員會(NCCLS)EP5-A文件中關(guān)于評價臨床定量測量方法精密度的要求,每日對標(biāo)本做2批實驗,間隔時間>2h,對樣品做雙份測定,抽取40對結(jié)果。檢測前室溫放置0.5h,再進(jìn)行檢測。統(tǒng)計分析檢測結(jié)果,計算變異系數(shù)(CV)。(2)對比CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果。(3)取ELISA法HBsAb、HBsAg 6點定標(biāo)液各200μl,根據(jù)不同濃度梯度加入5個試管內(nèi),0濃度為空白。抽取1份HBsAb、HBsAg陽性血清,用CMIA法檢測濃度,將HBsAb、HBsAg陽性血清各200 μl將入已知濃度試管,重復(fù)檢測2次,取平均值,回收率=各濃度點實測平均值/理論期望值×100%。(4)對比CMIA法與ELISA法檢測HBsAg最低濃度。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法通過SPSS 22.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,計量資料用(±s)表示,行t檢驗,計數(shù)資料用n(%)表示,行χ2檢驗,P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 HBV疑似患者血清學(xué)標(biāo)志物CV值的比較與ELISA法比較,CMIA法檢測HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物CV值較低,低差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

    表1 HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物檢測CV值比較(%)

    2.2 HBV疑似感染患者血清學(xué)標(biāo)志物符合率的結(jié)果CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清標(biāo)志物的符合率為99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%,見表2。

    表2 HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物的結(jié)果對比(%)

    2.3 CMIA法回收率測定HBsAb平均回收率為98.37%(96.76%~99.61%),HBsAg平均回收率為97.81%(94.92%~99.45%),見表3~表4。

    表3 不同濃度HBsAb回收率(%)

    表4 不同濃度HBsAg回收率(%)

    2.4 HBsAg最低濃度CMIA法檢測HBsAg最低濃度0.05IU/mL低于ELISA法0.16 IU/ml,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

    3 討 論

    HBV傳染性強,而我國為乙型肝炎高發(fā)國家,數(shù)據(jù)顯示,2015年我國HBV感染患者達(dá)3000萬[10]。常規(guī)檢測方法診斷HBV感染易出現(xiàn)漏診、誤診,診斷效果不太理想,影響疾病及時治療及控制HBV傳播; 盡管使用PCR擴(kuò)增乙肝病毒DNA進(jìn)行定量檢測是確診HBV感染的金標(biāo)準(zhǔn), 但其存在耗時長, 費用高等缺點,對于部分患者臨床接受程度有限。因此,需尋找一種準(zhǔn)確有效, 價格低廉快速HBV感染檢測方法,以提高診斷效果。

    乙肝五項指標(biāo)是HBV感染診斷常用檢測治療,可有效反映HBV感染狀態(tài),指導(dǎo)臨床診療。人體感染HBV后,血液中會存有大量HBsAg,是HBV感染的標(biāo)志之一[11]。HBsAb是HBV免疫的保護(hù)性抗體,由HBsAg誘導(dǎo)產(chǎn)生,較高濃度HBsAb可有效清除機(jī)體內(nèi)HBV,在乙肝疫苗接種后或 HBV感染恢復(fù)期出現(xiàn),是HBV感染特異性免疫標(biāo)志[12]。HBeAg作為第2種血清學(xué)抗原標(biāo)志物,可在軀體被HBV感染后被檢出,HBeAg檢出率升高,提示肝細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p傷,患者HBV傳染性強[13]。HBeAb是受HBeAg刺激產(chǎn)生的抗體。HBcAb也是HBV感染后人體出現(xiàn)的血清抗體,是一種敏感的血清學(xué)標(biāo)志。ELISA法是臨床HBV血清標(biāo)志物檢測常用方法。ELISA法是將可溶性抗體、抗原結(jié)合至固相載體上,根據(jù)一定的抗體只能與特定抗原結(jié)合,具有特異性,進(jìn)行免疫反應(yīng)定量、定性檢測。胡梅霞等[14]研究顯示,ELISA檢測HBsAg可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果,通過增加標(biāo)本的離心時間和提高離心速度可有效減少假陽性例數(shù)。ELISA法實驗步驟較多,標(biāo)本質(zhì)量、運輸過程、環(huán)境等多種因素可能影響檢測穩(wěn)定性,導(dǎo)致ELISA法檢測結(jié)果誤差較大,易出現(xiàn)假陽性。我國各級醫(yī)院ELISA法檢測自動化水平差異較大,基層醫(yī)院自動化水平低,影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。而CMIA法是在ELISA法、放射免疫分析法的基礎(chǔ)上改進(jìn)形成的新型檢測方法,CMIA法是通過微粒子擴(kuò)大抗體、抗原結(jié)合面積,結(jié)合免疫反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光系統(tǒng),等抗體或抗原反應(yīng),或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記抗原、抗體后,分離游離態(tài)化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物,加入其它相關(guān)物,引起化學(xué)發(fā)光,進(jìn)行抗體、抗原定量檢測[15-17]。CMIA法不僅有ELISA法檢測簡便、反應(yīng)時間短的特點,還具有放射免疫分析法靈敏、特異性強、用樣量少等特點。許麗楓等[18]研究發(fā)現(xiàn),CMIA法可實現(xiàn)全自動化的定量檢測,使乙肝五項檢測更快速、靈敏、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、少見模式少,可降低漏檢率,可為臨床早期診斷、有效治療及改善預(yù)后提供有價值的參考依據(jù)。本研究結(jié)果顯示,CMIA法檢測HBV感染患者乙肝五項CV值低于ELISA法(P<0.05),HBsAb平均回收率為98.37%,HBsAg平均回收率為97.81%,說明CMIA法應(yīng)用于HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中,檢測精密度高,回收率高??赡苁怯捎贑MIA法采用全自動化檢測,可減小手工操作對結(jié)果的影響,穩(wěn)定性高,有利于提高檢測精密度。此外,CMIA法與ELISA法檢測HBV感染患者血清標(biāo)志物的符合率為99.51%、99.75%、98.28%、99.75%、98.52%,具有高度一致性。而HBeAb、HBcAb存在一定差異,可能是由于檢測原理不同、原材料存在差異所致,不會明顯影響檢測結(jié)果。本研究還顯示,CMIA法檢測HBsAg最低濃度0.05 IU/ml低于ELISA法0.16 IU/ml,提示CMIA法可應(yīng)用于HBV感染患者低水平血清HBsAg檢測中,效果良好,有利于縮短“窗口期”時間。低水平HBsAg感染確診,可提高檢出率,便于及時控制傳染。

    綜上所述,CMIA法應(yīng)用于HBV感染患者血清學(xué)標(biāo)志物水平檢測中,檢測精密度高,回收率高,準(zhǔn)確度高,且用于低水平血清HBsAg檢測中,效果良好。

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