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    一種生物色標(biāo)在冰余石蠟制片中的應(yīng)用體會

    2022-11-04 01:44:30李明顯劉紅英黃鎮(zhèn)棟鄭廣娟何青蓮
    關(guān)鍵詞:色標(biāo)石蠟切片

    李 曉,曹 卓,李明顯,劉紅英,黃鎮(zhèn)棟,鄭廣娟,何青蓮

    近年來隨著醫(yī)療水平的迅速發(fā)展,術(shù)中冷凍技術(shù)成為病理診斷不可或缺的手段之一,但由于冷凍制片的局限性,術(shù)中冷凍病理診斷存在一定的誤診率[1-2]。冰余術(shù)后石蠟切片技術(shù)能夠明確診斷,并進(jìn)一步佐證術(shù)中冷凍診斷的準(zhǔn)確性,為臨床后續(xù)治療提供可靠依據(jù)。實(shí)際工作中有時(shí)會出現(xiàn)兩者診斷相悖的情況[3],這是因?yàn)楸嘟M織經(jīng)脫水后難以還原冷凍的情況,從而導(dǎo)致原冷凍切面中具有診斷意義的病灶在石蠟切片中無法體現(xiàn)。為解決上述問題,本科室通過不斷實(shí)踐,運(yùn)用生物色標(biāo)來標(biāo)記乳腺癌切緣標(biāo)本的冷凍樣本頭,其能夠有效提高冰余包埋及切片的工作質(zhì)量和效率,從而提高冷凍診斷與石蠟診斷的符合率,現(xiàn)介紹如下。

    1 材料與方法

    1.1 材料收集2021年1~8月廣東省中醫(yī)院術(shù)中快速冷凍病理診斷為乳腺癌,且同時(shí)送檢乳腺癌切緣標(biāo)本進(jìn)行術(shù)中冷凍切片106例,隨機(jī)抽取53例作為實(shí)驗(yàn)組,53例作為對照組。對照組與實(shí)驗(yàn)組均由同一位病理技師分別應(yīng)用傳統(tǒng)方法與實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行術(shù)中快速冷凍切片的相關(guān)操作。

    1.2 主要設(shè)備及耗材Thermo NX70冷凍切片機(jī),漢谷醫(yī)療HRS-18C冷凍切片快速染色機(jī),SAKURA VIP6全自動組織脫水機(jī),SAKURA TEC5組織包埋機(jī),Leica RM2245石蠟切片機(jī),SAKURA全自動染色封片工作站,OLYNPUS BX51顯微鏡,SAKURA OCT包埋劑,BLADEX綠色生物色標(biāo),冰醋酸。

    1.3 方法(1)對照組(圖1):按照傳統(tǒng)方法將已完成術(shù)中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織固定于10%中性福爾馬林中,依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。(2)實(shí)驗(yàn)組(圖2):對于已完成術(shù)中冷凍診斷的乳腺癌切緣組織,用干凈棉簽蘸取適量綠色生物色標(biāo)涂抹于冷凍樣本頭的切面,放回冷凍切片機(jī)內(nèi)等待3 s,待生物色標(biāo)略干后,另取干凈的棉簽蘸取1%冰醋酸水溶液涂抹于冷凍樣本頭切面,等待6 s,待冰醋酸略干后,固定于10%中性福爾馬林中,依次脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、染色。

    圖1 A.對照組傳統(tǒng)未標(biāo)記冷凍樣本頭;B.未標(biāo)記組織石蠟包埋效果 圖2 A.實(shí)驗(yàn)組生物色標(biāo)標(biāo)記冷凍樣本頭;B.已標(biāo)記組織石蠟包埋效果

    2 結(jié)果

    對照組冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷判定為符合49例,基本符合3例,不符合1例,此例乳腺癌切緣組織冷凍切片HE染色結(jié)果為未見癌,石蠟切片HE染色結(jié)果為原位癌(圖3A、B),符合率為92.45%(表1);實(shí)驗(yàn)組冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷判定為符合53例,符合率為100%(表1),如冷凍切片與石蠟切片HE染色結(jié)果均為導(dǎo)管上皮不典型增生(圖3C、D)。

    表1 兩種方法冷凍切片與常規(guī)石蠟切片病理診斷符合情況

    圖3 兩種方法乳腺癌切緣標(biāo)本HE染色結(jié)果對比:A.對照組冷凍切片染色,未見癌;B.對照組石蠟切片染色,原位癌;C.實(shí)驗(yàn)組冷凍切片染色,可見導(dǎo)管上皮不典型增生;D.實(shí)驗(yàn)組石蠟切片染色,可見導(dǎo)管上皮不典型增生

    3 討論

    冷凍條件下,腫瘤組織內(nèi)的細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生改變,使得腫瘤細(xì)胞被拉長或破壞,而石蠟制片具有定位準(zhǔn)確、定量可測、定性可靠的特點(diǎn),一般術(shù)中冷凍切片質(zhì)量不及術(shù)后石蠟切片的質(zhì)量[4-6]。因此,冷凍診斷難以確診的標(biāo)本,經(jīng)過對冰余組織石蠟制片而變得容易診斷,比如術(shù)中診斷為可疑癌的病例在石蠟制片后可以確診為癌。然而由于冰余組織經(jīng)脫水后難以還原冷凍的情況,特別是乳腺癌切緣標(biāo)本等較小的組織,石蠟包埋時(shí)冰余組織切面不易辨認(rèn),本對照組采用傳統(tǒng)方法時(shí)發(fā)生冷凍切面與其對應(yīng)石蠟切面不一致的情況,嚴(yán)重時(shí)可造成診斷結(jié)果不一致。因此對于乳腺癌切緣等較小組織,從取材、包埋、切片等步驟都應(yīng)注意哪一面是“真正的切緣”[7]。本實(shí)驗(yàn)組借助生物色標(biāo)涂墨標(biāo)記冷凍切面的方法,能清晰明確地標(biāo)記冷凍切面,即“真正的切緣”,使冷凍切面與石蠟切面一一對應(yīng),提高包埋質(zhì)量和效率,進(jìn)而提高術(shù)中冷凍切片與術(shù)后石蠟切片病理診斷的符合率。

    使用生物色標(biāo)以標(biāo)記冷凍切面的方法不僅適用于乳腺癌切緣標(biāo)本,也適合于其他組織的冷凍標(biāo)本切面標(biāo)記,特別是甲狀腺微小乳頭狀癌的標(biāo)記。由于甲狀腺微小乳頭狀癌結(jié)節(jié)直徑小于10 mm[8],如果用生物色標(biāo)標(biāo)記出結(jié)節(jié)所在的位置,可提醒技術(shù)員包埋時(shí)高度重視,注意包埋切面并仔細(xì)包埋平整,還有助于技術(shù)員切片時(shí)少修,以切到涂墨的結(jié)節(jié)為準(zhǔn),防止過度修蠟把結(jié)節(jié)修沒了。應(yīng)用生物色標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記時(shí)需注意以下幾點(diǎn):(1)在涂抹生物色標(biāo)的時(shí)候要均勻,并且需要其稍微干燥后再進(jìn)行下一步操作,避免卸樣本頭時(shí)由于OCT包埋劑的融化導(dǎo)致生物色標(biāo)浸染到標(biāo)本冷凍切面的反面而影響實(shí)驗(yàn)。(2)若冷凍切緣中存在較小的癌結(jié)節(jié)或具有診斷意義的小病灶,標(biāo)記切緣時(shí)對該區(qū)域進(jìn)行準(zhǔn)確、重點(diǎn)地涂墨,這樣在石蠟包埋及石蠟切片時(shí)都能為技術(shù)員提供必要的提醒作用,從而保護(hù)了組織的重點(diǎn)部位,防止造成同一標(biāo)本冷凍與石蠟切片前后診斷不一致的醫(yī)療差錯(cuò)。

    綜上所述,術(shù)中冷凍制片后使用生物色標(biāo)涂墨以標(biāo)記冷凍切面的方法在乳腺癌切緣標(biāo)本等較小組織的冰余石蠟制片中起到較好的提醒效果,提高了冰余石蠟制片質(zhì)量,為提高病理診斷的準(zhǔn)確率提供了重要依據(jù)。

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