牛結(jié)節(jié)性皮膚病的診斷及防控

王同淑

（甘肅農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 蘭州 730020）

牛結(jié)節(jié)性皮膚病（lumpy skin disease，LSD），又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛疙瘩皮膚病或牛結(jié)節(jié)性皮炎，是一種牛的痘病，可通過蚊蠅蜱等吸血蟲媒叮咬傳播。臨診表現(xiàn)為患牛持續(xù)發(fā)熱、淺表淋巴結(jié)嚴(yán)重腫大、四肢組織水腫、皮膚出現(xiàn)邊界清晰的結(jié)節(jié)、口咽、會(huì)厭、舌及消化道黏膜出現(xiàn)痘性病變。是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH）規(guī)定的法定通報(bào)的動(dòng)物疫病，在我國，被規(guī)定為進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病的二類動(dòng)物傳染病。本病病原是牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV），屬于痘病毒科（Poxviridae）脊椎動(dòng)物痘病毒亞科（chordopoxrinae）山羊痘病毒屬（capripox virus，CaPV），與牛痘病毒（cowpox virus）不同屬，山羊痘病毒屬家族有三個(gè)成員，包括山羊痘病毒（GTPV）、綿羊痘病毒（SPPV）和LSDV，三者之間在血清學(xué)上有交叉保護(hù)作用。有山羊痘和綿羊痘感染人的報(bào)道，但結(jié)節(jié)性皮膚病病毒不感染人，不是人獸共患病。2019 年之前LSD在我國屬于牛的一種重要的外來新發(fā)病。該病最早在1929 年發(fā)生于贊比亞，1943 年后傳入南非，疫情分布具有地域性。LSD 于1988—1989 年在埃及和以色列首次發(fā)生。2012—2018 年，土耳其、俄羅斯等多個(gè)國家報(bào)告了LSD 疫情。我國領(lǐng)土與以上部分國家比鄰，這給我國LSD 防控造成了巨大威脅。2019 年8 月12 日確診LSD 跨境傳入我國新疆伊犁，之后疫情迅速擴(kuò)散傳播，嚴(yán)重影響我國養(yǎng)牛業(yè)的健康發(fā)展。為加強(qiáng)對(duì)其監(jiān)測(cè)與防控，本文對(duì)該病診斷和防控措施進(jìn)行綜述。

1 牛結(jié)節(jié)性皮膚病的診斷

1.1 流行病學(xué)診斷

LSDV 具有高度的宿主特異性，牛為本病的最易感動(dòng)物，LSD發(fā)生與牛的管理類型、性別、年齡、年均降雨量和飲水源有顯著的相關(guān)性；實(shí)踐證明，圍欄養(yǎng)牛場的牛群、2 歲以上的母牛、年降雨量大于等于1,000mm 的地域以及共用同一來源水的牛群，LSD 感染率更高；與牛品種品系、地區(qū)、牛群大小、是否接觸水牛和野生動(dòng)物無關(guān)。綿羊、山羊、家兔、長頸鹿和黑羚羊也可感染。自然感染潛伏期在2～5 周之間，人工感染潛伏期為4～12d，一般為7d?；疾∨！⒖祻?fù)病牛都可帶毒并排毒，是重要的傳染源，尤其康復(fù)?？蓭Ф境^21d，是比較危險(xiǎn)的感染來源。動(dòng)物感染后，可從其皮膚損傷病灶及皮膚結(jié)痂內(nèi)分離到病毒。本病可通過病牛與易感健康牛直接接觸傳播，也可通過間接接觸傳播，如易感牛通過接觸被病毒污染的飲水、飼料或污染物或通過吸血蟲媒叮咬、損傷的皮膚間接傳播，LSDV 可經(jīng)母牛胎盤垂直傳播，牛犢也可與母牛乳房及乳頭皮膚傷口接觸而被感染，主要的傳播途徑為蚊、蠅、虻、蜱等蟲媒吸血傳播，第二重要的傳播方式則是動(dòng)物之間的直接接觸傳播。該病的流行具有季節(jié)性，其流行和蚊蟲活躍時(shí)期具有相關(guān)性，每年6—9 月份發(fā)病率會(huì)明顯升高。以上流行病學(xué)特點(diǎn)為LSD 的初步診斷提供理論依據(jù)。

1.2 臨床診斷

不同個(gè)體臨床表現(xiàn)差異較大，這跟動(dòng)物的免疫力和感染的病毒含量有關(guān)。牛短時(shí)間內(nèi)體溫出現(xiàn)急劇升高至41℃以上，高熱稽留，眼鼻分泌物及流涎增多，體表的淋巴有肉眼可見的腫大，多見于肩前淋巴結(jié)，發(fā)熱48h 后皮膚可見大約10～50mm 的結(jié)節(jié)，有觸痛感，是牛結(jié)節(jié)性皮膚病典型的臨床表現(xiàn)。結(jié)節(jié)多見于牛的頭、頸、肩等位置，也可見于牛的四肢和腹部，在頭頸部皮膚最早出現(xiàn)。出現(xiàn)在牛四肢的結(jié)節(jié)，導(dǎo)致牛關(guān)節(jié)腫大，不愿走動(dòng)；公牛暫時(shí)性或持久性的不育；母牛易流產(chǎn)，牛的產(chǎn)量急劇下降，牛的生產(chǎn)性能受到影響；奶牛產(chǎn)奶量降低。結(jié)節(jié)可隨病程延長而消失，但通常在皮膚損傷處可結(jié)痂脫落，留下較深的潰瘍，引起昆蟲叮咬，損壞皮張，甚至因?yàn)槔^發(fā)細(xì)菌感染而導(dǎo)致動(dòng)物死亡。結(jié)節(jié)會(huì)深入皮膚各層和皮下組織，常侵入相鄰的肌肉層，因此潰瘍也可見于口角、口唇和口鼻內(nèi)部皮膚。以上LSD 主要的臨床特征為LSD 的初步診斷提供理論依據(jù)。

1.3 病理學(xué)診斷

剖檢可見其典型病變?yōu)楹粑篮拖纼?nèi)表面會(huì)出現(xiàn)結(jié)節(jié)病變，多見于口鼻、氣管、支氣管、陰道、包皮等處。LSDV 具有組織嗜性。淋巴結(jié)腫大并伴有淋巴增生、水腫充血、出血。心臟腫脹，心肌纖維充血、出血，有瘀血斑。肺部水腫，重癥病例出現(xiàn)胸膜炎伴有縱膈淋巴結(jié)腫大。腎臟表面有出血點(diǎn)。氣管黏膜充血，并有大量黏液。胃黏膜出血。小腸彌漫性出血。發(fā)病初期，LSDV 感染的細(xì)胞胞漿中可見十分明顯的嗜酸性包涵體。結(jié)合LSD 流行病學(xué)特點(diǎn)、臨床癥狀、病例剖檢大體變化以及組織學(xué)顯微變化可做出LSD 的初步判斷，值得注意的是，牛輕度感染時(shí)易與牛丘疹性口炎、偽牛痘、皮膚結(jié)核、牛痘病毒感染和牛原蟲病、盤尾絲蟲病等疫病混淆，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)確診。

1.4 實(shí)驗(yàn)室診斷

1）病原學(xué)診斷LSDV 具有細(xì)胞嗜性，可以在不同譜系或種的培養(yǎng)細(xì)胞中復(fù)制。LSDV 具有特殊形態(tài)結(jié)構(gòu)，可選擇羊睪丸細(xì)胞來分離鑒定LSDV。張敏敏等將采集來的病料處理后接種于羊睪丸細(xì)胞，羊睪丸細(xì)胞出現(xiàn)典型病變后，將細(xì)胞培養(yǎng)物通過透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)典型痘病毒形態(tài)的磚塊狀粒子。電鏡只能鑒定出病毒為痘病毒，不能精準(zhǔn)確認(rèn)病毒具體屬或者種，需聯(lián)合PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）、間接熒光抗體試驗(yàn)確診。

2）分子生物學(xué)診斷PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）、熒光定量PCR，可特異性檢測(cè)LSDV 的核酸，也可用于羊痘病毒屬牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒、山羊痘病毒、綿羊痘病毒的通用檢測(cè)，還可以區(qū)分LSDV 野毒株與疫苗株。取發(fā)病明顯期病牛皮膚結(jié)節(jié)、皮膚結(jié)痂、唾液、血液以及口鼻分泌物作為病料檢測(cè)病毒核酸確診。在發(fā)病早期，常采用PCR 技術(shù)檢測(cè)病毒的核酸，但隨著疾病發(fā)展，機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，臨床癥狀不典型或并不表現(xiàn)臨床癥狀，則PCR 很難檢測(cè)到病毒核酸，需結(jié)合血清學(xué)診斷方法而進(jìn)行綜合判定。

3）免疫學(xué)診斷免疫學(xué)診斷方法常用作檢測(cè)LSD 陽性牛全血中的抗體，檢測(cè)方法主要有間接免疫熒光抗體試驗(yàn)（IFAT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、病毒中和試驗(yàn)（VNT）和凝集試驗(yàn)（AT），最常用的檢測(cè)技術(shù)為VNT，只檢測(cè)中和抗體。ELISA 使用病毒蛋白或部分蛋白代替完整病毒作為包被抗原，檢測(cè)LSDV 抗體。采用LSDV P32 蛋白構(gòu)建的ELISA 方法，與VNT 相比，敏感性高達(dá)98%、特異性可高達(dá)99%，與完整病毒作為包被抗原構(gòu)建的ELISA 方法相比，數(shù)據(jù)一致性可高達(dá)100%，法國IDVET 公司商品化的雙抗原ELISA 試劑盒，特異性可高達(dá)99.7%，比VNT 敏感性更高。動(dòng)物可通過自然感染、康復(fù)后獲得特異性的抗體，也可通過疫苗免疫接種獲得特異性抗體，若利用血清學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)動(dòng)物全血中的抗體來診斷疫病，需注意區(qū)別動(dòng)物體內(nèi)特異性中和抗體是疫苗免疫接種還是野毒感染而獲得。

LSD 的最后確診要根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。符合流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化特點(diǎn)，判定為LSD 可疑病例。符合流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化的病例，電鏡形態(tài)學(xué)觀察、PCR 檢測(cè)、病毒中和試驗(yàn)和ELISA 試驗(yàn)結(jié)果中有一項(xiàng)為陽性，可判定為LSD 確診病例；樣品病毒分離培養(yǎng)、包涵體檢查為陽性，且電鏡形態(tài)學(xué)觀察、PCR、病毒中和試驗(yàn)和ELISA 試驗(yàn)檢測(cè)中有一項(xiàng)為陽性，可判定為LSD 確診病例。

2 防控措施

疫病防控一直貫徹“預(yù)防為主”的方針，為有效預(yù)防和控制LSD 的發(fā)生和流行，需采取綜合性防疫措施。做好平時(shí)的預(yù)防工作，可以預(yù)防疫病，一旦發(fā)生傳染病，也能將疫情控制在最小范圍內(nèi)，很快就地?fù)錅?。預(yù)防接種可有效的預(yù)防LSD 的發(fā)生和流行；吸血蟲媒為本病重要的傳播媒介，養(yǎng)殖場做好殺滅蚊蠅等生物媒介工作，切斷傳播途徑；加強(qiáng)宣傳教育，提高生物安全意識(shí)，加強(qiáng)生物安全管理。應(yīng)預(yù)先制定撲滅措施，封鎖疫區(qū)，禁止活牛調(diào)動(dòng)；要對(duì)LSD 確診牛立即捕殺，尸體無害化處理；采用國家批準(zhǔn)的山羊痘弱毒活疫苗對(duì)疫區(qū)假定健康牛進(jìn)行緊急免疫接種，建立免疫帶；同群牛隔離觀察，對(duì)陽性確診病例撲殺和對(duì)假定健康動(dòng)物緊急免疫接種后1 個(gè)月內(nèi)限制其移動(dòng)和調(diào)出；對(duì)養(yǎng)殖場用10%石灰水、20%草木灰水、2%燒堿水等進(jìn)行徹底消毒，殺滅疫點(diǎn)疫區(qū)的生物媒介。多關(guān)注國內(nèi)外LSD 疫情流行情況，儲(chǔ)備LSD 疫苗和診斷防控產(chǎn)品，科學(xué)地防控LSD，對(duì)疫情做到早發(fā)現(xiàn)、早報(bào)告、早確診和早處置，為養(yǎng)牛業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展保駕護(hù)航。