奧美拉唑膠囊劑有關物質再評價

周臨 羅榮#

（1江西省醫(yī)療器械檢測中心 南昌 330029；2江西省藥物研究所 南昌 330029）

奧美拉唑（Omeprazole）化學名稱是5-甲氧基-2-{［（4甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基）-甲基］-亞磺?；鶀-1H-苯并咪唑，為苯并咪唑類質子泵抑制劑，是一種有效的抗消化性潰瘍藥，用于治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎等，具有療效高、耐受性好、復發(fā)率低等優(yōu)點[1]。圖1為奧美拉唑常見合成工藝流程圖[2]。

圖1 奧美拉唑常見合成工藝流程圖

為了保證藥物的質量和臨床用藥安全有效，對藥物中的雜質進行檢查很有必要?！稓W洲藥典》EP[3]和《英國藥典》BP[4]分別采用不加校正因子的主成分自身對照法和TLC法檢測奧美拉唑中的雜質，而《美國藥典》USP[5]采用加校正因子的主成分自身對照法檢測奧美拉唑中的雜質，2020年版《中國藥典》二部[6]采用不加校正因子的主成分自身對照法檢測奧美拉唑中的雜質。為了更加準確的檢測奧美拉唑制劑中雜質的含量，本研究建立了加校正因子的主成分自身對照法同時檢測奧美拉唑腸溶膠囊中幾種特殊雜質（雜質A～E）的含量?，F(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津10A系列高效液相色譜儀（CLASS-VP色譜工作站）；Me5型電子分析天平（賽多利斯公司）；Waters Purifier實驗室超純水機。

1.2 試劑 磷酸氫二鈉和磷酸為分析純，甲醇和乙睛為色譜純，水為超純水。

1.3 試藥 雜質（A）：奧美拉唑硫醚-N-氧化物（Omeprazole Sulphane-N-Oxide）含量99.25%；雜質（B）：奧 美 拉 唑 砜-N-氧 化 物（Omeprazole Sulphone-N-Oxide）含量99.50%；雜質（C）：奧美拉唑-N-氧化物（Omeprazole-N-Oxide）含量99.60%；雜質（D）：奧美拉唑硫醚（Ufiprazole or Omeprazole Sulphane）含量99.50%；雜質（E）：奧美拉唑砜（Omeprazole Sulphone）含量99.93%。雜質對照品均由本單位自制，相關結構式見圖2，原料奧美拉唑（山東壽光藥業(yè)有限責任公司，含量99.90%），中間體苯并咪唑和氯化物。奧美拉唑腸溶膠囊（9個廠家共16個批號）。

圖2 奧美拉唑各雜質名稱及結構式

2 色譜方法

2.1 對照品溶液和供試品溶液、自身對照溶液的制備

2.1.1 對照品溶液制備 稱取各雜質對照品（雜質A 10.08 mg，雜質B 10.10 mg，雜質C 10.02 mg，雜質D 10.05 mg，雜質E 10.13 mg，苯并咪唑10.21 mg，氯化物10.10 mg），置于25 ml容量瓶中，用流動相適量超聲溶解并稀釋至刻度，作為溶液a，精密量取溶液a 1.0 ml，置于100 ml容量瓶中，用流動相稀釋成各含0.004 mg/ml的溶液，作為雜質對照品溶液，用于有關物質定量。稱取奧美拉唑對照品10.12 mg，量取溶液a 250μl，置于25 ml容量瓶中，用流動相適量超聲溶解，稀釋制成含奧美拉唑0.40 mg/ml和各雜質0.004 mg/ml的溶液，作為混合對照品溶液，用于雜質色譜峰定位。

2.1.2 供試品溶液制備 稱取奧美拉唑腸溶膠囊內容物0.20 g，置于10 ml容量瓶中，加流動相適量超聲溶解，濾過，取續(xù)濾液，用流動相稀釋制成含奧美拉唑約0.40 mg/ml的溶液，即得。

2.1.3 自身對照溶液制備 精密量取供試品溶液1.0 ml，置于100 ml容量瓶中，加入流動相稀釋成含奧美拉唑0.004 mg/ml（1%）的溶液，作為自身對照溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱：Phenomenex Luna C8柱（150 mm×4.6 mm），Boston Crest C8柱（150 mm×4.6 mm）。流動相為乙腈：0.01 M磷酸氫二鈉（磷酸調節(jié)pH至7.6）（25：75），流速為1.0 ml/min，檢測波長為280 nm，柱溫為30℃。國內外藥典中奧美拉唑的有關物質及其色譜條件見表1。

表1 國內外藥典中奧美拉唑的有關物質及其色譜條件

2.3 系統(tǒng)適用性試驗 吸取混合對照品溶液注入液相色譜儀，查看色譜圖，奧美拉唑峰的保留時間約為13 min，奧美拉唑峰與各雜質峰的分離度均符合規(guī)定（＞1.0）。見圖3。

圖3 混合對照品色譜圖

3 高效液相色譜（HPLC）方法的確定

3.1 色譜柱的選擇 試驗中我們分別選擇了C8色譜柱系統(tǒng)（Phenomenex Luna C8柱，150 mm×4.6 mm）和C18色譜柱系統(tǒng)（安捷倫C18柱，150 mm×4.6 mm），結果在C8色譜柱系統(tǒng)和C18色譜柱系統(tǒng)下奧美拉唑峰與各雜質峰之間分離度均良好。

3.2 色譜條件的選擇 參照中國藥典2020年版二部奧美拉唑項下有關物質檢查法，以及借鑒相關文獻資料[7～14]，最終確定以乙腈：0.01 M磷酸氫二鈉（磷酸調節(jié)pH至7.6）（25：75）為流動相，在該色譜條件下，各雜質峰與主峰之間均能達到良好分離。

3.3 檢測波長的選擇 國外藥典以及《中國藥典》2020年版二部中奧美拉唑的有關物質項下，檢查波長大部分為280 nm，取奧美拉唑及各雜質進行紫外掃描，結果也均在280 nm左右有最大吸收波長，因此本研究確定在280 nm處測定各雜質的含量。

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3.4 色譜圖保留時間的確定 通過試驗我們發(fā)現(xiàn)在主峰的出峰時間3倍以后基本沒有出現(xiàn)雜質峰，因此確定色譜圖的保留時間為主峰出峰時間的3倍。

3.5 專屬性破壞試驗 通過幾種破壞試驗的結果能夠看出，奧美拉唑在高溫破壞和光照破壞的條件下相對比較穩(wěn)定，產生的雜質較少；而在酸破壞（0.1 M鹽酸溶液）、堿破壞（0.1 M氫氧化鈉溶液）和氧化破壞（30%雙氧水溶液）的條件下容易降解產生較多雜質。

3.5.1 酸破壞試驗 取本品約0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲使其溶解，加0.1 M鹽酸10 ml，放置1 h，再水浴加熱5 min，加0.1 M氫氧化鈉10 ml中和，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取1～10 ml于棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，取續(xù)濾液作為酸破壞樣品溶液，進樣。見圖4。

圖4 奧美拉唑酸破壞色譜圖

3.5.2 堿破壞試驗 取本品約0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲使其溶解，加0.1 M氫氧化鈉10 ml，放置1 h，再水浴加熱5 min，加0.1 M鹽酸10 ml中和，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取1～10 ml于棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，取續(xù)濾液作為堿破壞樣品溶液，進樣。見圖5。

圖5 奧美拉唑堿破壞色譜圖

3.5.3 氧化破壞試驗 取本品約0.2 g，置于50 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超聲使其溶解，加30%雙氧水5 ml，放置30 min，加甲醇至刻度，搖勻，精密吸取1～10 ml于棕色量瓶中，加甲醇至刻度，取續(xù)濾液作為氧化破壞樣品溶液，進樣。見圖6。

圖6 奧美拉唑氧化破壞色譜圖

3.5.4 高溫破壞試驗 取本品適量，在120℃高溫下放置2 h，稱取適量，加甲醇制成0.4 mg/ml的溶液，取續(xù)濾液作為高溫破壞樣品溶液，進樣。見圖7。

圖7 奧美拉唑高溫破壞色譜圖

3.5.5 光照破壞試驗 取本品適量，在LX4500光照強度下放置約7×24 h，稱取適量，加甲醇制成0.4 mg/ml的溶液，取續(xù)濾液作為光照破壞樣品溶液，進樣。見圖8。

圖8 奧美拉唑光照破壞色譜圖

3.7 檢測限和定量限 在280 nm下，奧美拉唑檢測限為1 ng（0.1μg/ml），定量限為4 ng（0.4μg/ml）；雜質C檢測限為1 ng（0.1μg/ml），定量限為4 ng（0.4μg/ml）。

3.8 供試品溶液的穩(wěn)定性 將供試品溶液在室溫環(huán)境分別放置0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、6 h后，分別進樣，結果發(fā)現(xiàn)供試品溶液在2 h內雜質含量變化不大，隨著放置時間的延長，最大單個雜質和總雜質的含量均有升高，表明供試品溶液不夠穩(wěn)定，樣品測試時應臨用新配。

3.9 線性范圍

3.9.1 奧美拉唑線性范圍 精密稱取奧美拉唑對照品（10.07 mg）置于100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，分別精密吸取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml至25.0 ml于棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。分別精密吸取適量注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，奧美拉唑進樣濃度（μg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明奧美拉唑在0.403～8.056μg/ml范圍內呈良好線性關系，回歸方程為：Y=17376X-880，相關系數r=0.999 9。

3.9.2 雜質C線性范圍 精密稱取雜質C對照品（10.16 mg）置于100 ml量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.2 ml、1.6 ml、2.0 ml至25.0 ml于棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得。分別精密吸取適量注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標，雜質C進樣濃度（μg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線。結果表明雜質C在0.406～8.128μg/ml范圍內呈良好線性關系，回歸方程為：Y=23703X-901，相關系數r=1.000 0。

3.1 0重復性 取同一批次的樣品，分別稱取6份平行樣，按2.1.2方法制備作為供試品溶液，依法測定，計算得重復性結果為雜質A含量0.14%，RSD為0.28%；雜質C含量0.14%，RSD為0.33%；其他雜質含量0.19%，RSD為0.27%。結果表明本試驗的重復性良好。

3.1 1加樣回收率試驗 稱取同一批次已知有關物質含量的樣品，分別稱取9份平行樣，置于10 ml量瓶中，分別加入高、中、低濃度的雜質C對照品，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，依法測定，計算得高、中、低三個濃度的回收率分別為96.22%、93.49%、92.87%，平均回收率為94.19%，RSD為2.19%。結果表明方法的準確度良好。

3.1 2耐用性 采用色譜柱Agilent XDB-C18，4.6 mm×150 mm；Waters C18，3.9 mm×150 mm；Phenomenex Luna-C8，4.6 mm×150 mm分別進行試驗，測定同一批次樣品的有關物質含量，測定結果基本一致，本試驗表明本方法耐用性良好。

3.1 3各已知雜質的相對保留時間和校正因子 以奧美拉唑的保留時間為1，計算各雜質的相對保留時間和校正因子，校正因子（f）=As×Cr/Ar×Cs（As為雜質對照品的峰面積，Cr為待測成分對照品的濃度，Ar為待測成分對照品的峰面積，Cs為雜質對照品待測成分的濃度）。見表2。

表2 各已知雜質的相對保留時間和校正因子

4 結果

對總共9個廠家16批制劑采用以上方法進行試驗，結果發(fā)現(xiàn)，以上制劑中均檢出了奧美拉唑的雜質A，而奧美拉唑的中間產物氯化物和雜質B均未檢出。而通過不加校正因子的主成分自身對照法計算所得出的雜質含量結果與加校正因子的主成分自身對照法計算所得出的雜質含量結果相比較可以看出，由于不同的雜質檢測方法其最大檢測波長不一樣，雜質的峰面積不經過校正因子校正所計算出的結果不夠準確，定量測定容易產生誤差。見表3、表4。

表3 不加校正因子的主成分自身對照法結果（%）

表4 加校正因子的主成分自身對照法結果（%）

5 討論

奧美拉唑的化學性質較不穩(wěn)定，遇酸、熱和氧化劑、光照等均容易發(fā)生變質降解，尤其是對pH值比較敏感，特別是在酸性條件時奧美拉唑的化學結構容易發(fā)生變化，出現(xiàn)聚合和變色現(xiàn)象，因此建立一個合適的方法來檢測奧美拉唑及其制劑的有關物質非常重要。目前我國大部分化學藥物的質量標準中，檢查有關物質的方法主要有不加校正因子的主成分自身對照法、加校正因子的主成分自身對照法、面積歸一化法和雜質對照品法。這四種有關物質的檢測方法中，不加校正因子的主成分自身對照法由于不同的雜質檢測的最大響應波長不一樣，雜質峰面積不經校正因子校正所計算出的結果不夠準確，定量測定容易產生誤差；面積歸一化法測定的誤差較大，一般不用于藥品中微量雜質的檢查；而雜質對照品法雖然能夠準確測定藥品中的雜質含量，可需要長期提供對照品，而且雜質對照品價格較貴，有時候還不一定能夠買到；加校正因子的主成分自身對照法不需要長期提供標準物質，而且可以把不同的標準雜質對照品的濃度值轉化為固定的常數值，因此成為現(xiàn)階段有關物質測定比較理想的手段[15]。

本試驗建立的加校正因子的主成分自身對照法可以同時檢測奧美拉唑腸溶制劑中5種特殊雜質的含量，消除了雜質與主成分響應因子不同所引起的測定誤差，而且不必長期提供雜質對照品。結果表明，該方法可以準確測定奧美拉唑腸溶膠囊中有關物質的含量。