大鼠骶上不同節(jié)段脊髓損傷后神經(jīng)源性膀胱模型比較及尿流動力學分析

卓 越，許 明，鄧石峰，劉 瓊，彭嘉穎，唐麗亞，艾 坤*，張 泓*

（湖南中醫(yī)藥大學針灸推拿與康復學院，湖南 長沙 410208）

近年來，我國脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)的發(fā)病率日趨升高[1-2]。 神經(jīng)源性膀胱(neurogenic bladder, NB)是SCI 后常見的泌尿系并發(fā)癥，嚴重危害到患者遠期生存率及終身生活質(zhì)量[3]。 臨床上，超過80%的SCI 患者均屬于骶上脊髓損傷(supersacral spinal cord injury, SSCI)[4]。 根據(jù)尿道括約肌協(xié)同與否，SSCI 后的NB 可表現(xiàn)為逼尿肌反射亢進和逼尿肌-括約肌協(xié)同失調(diào)兩種主要類型，從而呈現(xiàn)以尿失禁為主或以尿潴留為主的兩種截然不同的癥狀表現(xiàn)，其治療方案與研究側(cè)重點也有所差別[5]。

動物實驗研究依賴于穩(wěn)定動物模型的建立，大鼠因其與人類生理病理情況高度相似且成本低廉、易于處理，成為目前SCI 后NB 的主要實驗動物[6]。在既往工作中，本團隊總結(jié)探索出了一套改良Hassan Shaker 脊髓完全性橫斷法，并分別建立了骶上與骶髓損傷后不同類型NB 大鼠模型[7-8]，且一直致力于研究電針治療該類疾病的療效及其作用機制，已取得部分成果[9-11]；國內(nèi)相關(guān)學者亦對骶上與骶髓損傷后NB 進行了較全面的比較與探索[12-13]。 然而，隨著研究逐漸深入發(fā)現(xiàn)，關(guān)于不同節(jié)段SSCI 導致兩種不同類型NB 大鼠模型的系統(tǒng)性對比分析尚少，故亟須對該問題進行探索研究。

膀胱儲排尿功能受到高位腦橋-皮質(zhì)排尿中樞和低位脊髓交感-副交感排尿中樞協(xié)同支配，根據(jù)不同節(jié)段SSCI 與脊髓交感-副交感排尿中樞的位置關(guān)系以及大鼠脊髓節(jié)段與椎骨解剖學對應范圍，本研究選擇第8 胸椎下（約對應T10 脊髓節(jié)段）和第10 胸椎下（約對應L1 脊髓節(jié)段）[14-15]脊髓完全性橫斷致NB 大鼠為模型，通過觀察每日手法排尿量及尿流動力學檢測，對比分析上述兩種不同節(jié)段SSCI后NB 的不同表現(xiàn)，驗證其與兩類NB 之間的關(guān)系，以期為該領域科研實驗動物模型的選擇提供一定的科學參考。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

SPF 級成年SD 雌性大鼠48 只（根據(jù)前期預實驗中約70%以上的成模率計算得出），體質(zhì)量250～280 g，由湖南中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供與飼養(yǎng)[許可證號：SYXK(湘)2019-0004]。 動物在溫度24～26 ℃、濕度50%～70%、12 h∶12 h 明暗交替、食水自取的條件下，適應性喂養(yǎng)1 周后進行分組。 首先，按隨機數(shù)字表法從48 只大鼠中抽取12 只作為假手術(shù)組，剩下的36 只大鼠再隨機分為模型1 組（第8 胸椎下脊髓橫斷）和模型2 組（第10 胸椎下脊髓橫斷），每組18 只。 本研究中實驗動物條件符合《實驗動物管理條例》要求，且實驗過程中對動物的處置嚴格依照《關(guān)于善待實驗動物的指導性意見》執(zhí)行。 本實驗方案已獲得湖南中醫(yī)藥大學實驗動物倫理委員會批準（倫理編號：LL2021091504）。

1.2 主要試劑與儀器

異氟烷(深圳市瑞沃德生命科技有限公司，100 mL，批號：R510-22)；生理鹽水（哈藥集團有限公司，300 mL，批號：C22010509）；青霉素鈉（哈藥集團有限公司，80 萬U/支，批號：220106）；乳酸鈉林格注射液（安徽環(huán)球藥業(yè)股份有限公司，500 mL，批號：20211218-2）；5%葡萄糖注射液（貴州天地藥業(yè)有限公司，500 mL，批號：20080802）；苦蘋果防舔防咬噴劑（美國Grannick公司，236 mL）；乳果糖口服溶液（荷蘭Abbott Biologicals B.V.公司，15 mL/袋，批號：H20171057）；醫(yī)用石蠟油（黑龍江省運加醫(yī)療科技有限公司，10 mL/支，批號：黑械注準2019214009）。 導尿管（上海上醫(yī)康鴿醫(yī)用器材有限責任公司，型號：F3）；MP-150 多通道生理記錄儀（美國BIOPAC 公司，型號：MP150-WSW）；微量注射泵（浙江史密斯醫(yī)學儀器有限公司，型號：WZ-50C6）。

1.3 造模方法及術(shù)后管理

1.3.1 造模方法 以Hassan Shaker 脊髓橫斷法[16]為基礎，結(jié)合本團隊前期經(jīng)驗[7-8]以及本研究中提出的優(yōu)化改良法進行骶上不同節(jié)段（第8 胸椎下/第10 胸椎下）脊髓完全性橫斷致NB 大鼠模型制備。具體如下：術(shù)前1 d，大鼠禁食不禁水；術(shù)前2 h，腹腔注射20 萬U 青霉素鈉預防術(shù)中及術(shù)后感染；使用3%～4%異氟烷誘導大鼠進入麻醉狀態(tài)，待其夾尾反射和角膜反射消失后行俯臥位溫和固定，然后調(diào)整麻醉濃度為2%～2.5%以維持術(shù)中麻醉狀態(tài)，隨后進行手術(shù)定位、備皮、鋪巾、消毒；從大鼠頭骨后正中線向下沿脊柱棘突觸摸到的第1 個明顯豎長突起處為第2 胸椎棘突，繼續(xù)沿此方向觸摸到第2 個中立位寬大突出處即為第10 胸椎棘突，以此為骨性標志再向上順摸2 個錐體棘突即可定位第8 胸椎（見圖1），本次實驗中脊髓橫斷處分別為第8 胸椎下和第10 胸椎下； 沿T8/T9 或T10/T11 錐體棘突縱向切開皮膚及皮下筋膜2～3 cm 后，使用玻璃分針鈍性分離棘突與椎板兩側(cè)肌肉，暴露T8/T9 或T10/T11 錐體棘突及相鄰椎弓，用顯微咬骨器從尾側(cè)向頭側(cè)咬開T8或T10 椎板及兩側(cè)椎弓根， 直至椎管內(nèi)脊髓充分暴露；將牙科彎鉤平頭輕穿過脊髓腹后部，用眼科剪以垂直方向沿彎鉤平頭整齊迅速地橫斷脊髓，并確認無神經(jīng)纖維殘留；確認大鼠生命體征無異常后，進行創(chuàng)口清理與逐層縫合。 假手術(shù)組大鼠僅切開并暴露T8 至T10 節(jié)段棘突與相鄰椎弓后立即縫合。

圖1 大鼠骨性標志定位

1.3.2 術(shù)后管理 （1）存活管理：術(shù)后立即將大鼠平送至電熱毯上，以頭尾四肢伸展俯臥位進行復溫，并使用肛溫計檢測體溫變化；待其蘇醒及生命體征平穩(wěn)后轉(zhuǎn)至單籠飼養(yǎng)，保持籠內(nèi)墊料干燥蓬松。 （2）喂養(yǎng)管理：術(shù)后當天僅予以10 mL 5%葡萄糖注射液對口滴食以補充能量，減輕消化及泌尿系統(tǒng)負擔；術(shù)后第2～3 天，開始逐漸輔以少量固體飼料喂養(yǎng)（小于20 g）；術(shù)后第4 天開始，恢復常規(guī)固體飼料喂養(yǎng)。（3）并發(fā)癥管理：術(shù)后第1～3 天，每隔12 h 皮下注射乳酸鈉林格注射液（20 mL/kg）以防止酸堿失衡和電解質(zhì)紊亂，每隔12 h 腹腔注射青霉素鈉（20 萬U/只）以抗感染和減輕膿血尿；術(shù)后第4～7 天，停用乳酸鈉林格注射液，青霉素鈉改為每24 h 使用1次；術(shù)后第8 天停用青霉素鈉，僅在有明顯感染癥狀時對癥使用；另外，術(shù)后至創(chuàng)口完全結(jié)痂前，每日均使用聚維酮碘消毒創(chuàng)口及周圍5 cm 皮膚，并用50%乙醇溶液擦拭大鼠腹部及雙下肢以防止壓瘡； 每日于大鼠后肢噴涂苦蘋果噴霧以預防大鼠啃食自殘。 （4）二便管理：術(shù)后第1 天開始，每隔8 h(即每日6:00、14:00、22:00)用Crede 法[7-8]人工輔助大鼠排尿；每次排尿結(jié)束后予以順時針手法按摩大鼠下腹部10 min，以促進排便和預防腸梗阻；對于術(shù)后已經(jīng)出現(xiàn)明顯便秘及腹脹的大鼠，予以乳果糖灌胃2 mL/d，嚴重時配合醫(yī)用石蠟油灌腸后揉腹導便。

1.4 模型評估

結(jié)合本團隊前期觀察以及國內(nèi)外相關(guān)研究，本實驗模型評估標準如下。

1.4.1 脊髓休克期及成模時間評估 造模術(shù)后大鼠會立即進入脊髓休克期，該期間動物生命體征及模型表征尚不穩(wěn)定，故需待脊髓休克期結(jié)束后才可出現(xiàn)穩(wěn)定性高的動物模型。本團隊前期研究已經(jīng)明確，SSCI 致NB 模型大鼠在術(shù)后1 周左右度過脊髓休克期[8]，穩(wěn)定成模時間約為術(shù)后第18 天[7]，故本研究在大鼠術(shù)后第19 天予以尿流動力學檢測。

1.4.2 后肢運動功能評估 造模術(shù)后至脊髓休克期內(nèi)大鼠后肢運動功能應完全性喪失，在前肢行走時后肢處于拖動狀態(tài)。 具體而言，由同一人采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)評分進行評估，即將大鼠放入籠盒之中，輕敲籠壁促其移動，并觀察其軀干和臀、膝、踝、足等關(guān)節(jié)活動及協(xié)調(diào)情況，評分范圍為0～21 分，0 分為雙后肢活動不可見，分數(shù)越高代表活動越正常[17]。 本研究中，大鼠術(shù)后BBB 評分應為0分；反之，則予以剔除。

1.4.3 膀胱肉眼形態(tài)及功能評估 造模術(shù)后至脊髓休克期內(nèi)，大鼠膀胱功能處于無反射期，自主排尿困難，尿潴留及膀胱脹大明顯，需手法輔助排尿；而脊髓休克期結(jié)束后，骶上不同節(jié)段脊髓損傷大鼠膀胱形態(tài)及功能會出現(xiàn)明顯差異。 具體而言，多數(shù)第8胸椎下脊髓橫斷大鼠膀胱脹大情況較脊髓休克期時減輕，但仍呈“橄欖”狀脹大，不能恢復自主排尿，僅偶有下腹部及籠內(nèi)墊料潮濕，呈尿潴留為主的癥狀表現(xiàn)；而多數(shù)第10 胸椎下脊髓橫斷大鼠膀胱脹大情況較脊髓休克期時明顯減輕，出現(xiàn)反射性排尿或漏尿明顯，且其下腹部及籠內(nèi)墊料經(jīng)常性潮濕，呈尿失禁為主的癥狀表現(xiàn)[7-8]。

1.4.4 其他評估 造模術(shù)后至整個實驗過程中，若大鼠出現(xiàn)死亡或恢復正常排尿功能以及出現(xiàn)明顯自殘、反復嚴重膿血尿、難以愈合性壓瘡等不良事件[7-8]，則及時記錄并予以剔除。

1.5 觀察指標及檢測方法

1.5.1 一般情況 觀察各組大鼠術(shù)后生存率及成模率情況，記錄期間不良事件情況及處理方式和處理結(jié)果。

1.5.2 每日手法排尿量 比較兩個模型組大鼠每日手法排尿（見圖2）的尿量變化情況，即造模術(shù)后第1～18 天大鼠每日3 次（6:00、14:00、22:00）用Crede法排出尿量的總和(均由同一人操作與記錄)。

圖2 每日手法排尿

1.5.3 尿流動力學 使用膀胱造瘺法進行測量，先用異氟烷（使用方式及參數(shù)設置同造模時）麻醉大鼠后行仰臥位固定，輕柔手法盡量排空膀胱內(nèi)尿液后，行下腹部備皮與消毒。 隨后經(jīng)三通管將MP-150 的測壓管與微量注射泵、F3 導尿管相連接，并準備好溫度為25～35 ℃的生理鹽水，設置6.0 mL/h 的速度準備膀胱灌注。 將F3 導尿管先平放于膀胱水平以設置MP-150 壓力模塊基線值，然后沿大鼠前正中線恥骨聯(lián)合上1 cm 處縱向切開2 cm 并暴露膀胱，于膀胱穹窿處用眼科剪剪開小口后，插入F3 導管至膀胱體內(nèi)正中，用2-0 手術(shù)線捆綁導管與膀胱開口處，確認無滲漏后用10 mL 注射器連接三通管空頭將膀胱內(nèi)殘余尿吸出并記錄為“殘余尿量”。 靜置30 min 后，開始灌注并電腦同步記錄膀胱壓力曲線情況。 重點觀察大鼠尿道口首次液體流出時的膀胱內(nèi)壓，即“漏尿點壓力”，以及此刻的灌注量，即“膀胱最大容量”。 待漏尿點出現(xiàn)后繼續(xù)灌注出4～5 個穩(wěn)定波形后結(jié)束檢測，記錄膀胱內(nèi)壓峰值，即“膀胱最大壓力”[7，9]。

1.6 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 23.0 軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，本研究中實驗結(jié)果以“±s”形式表示。計量資料若符合正態(tài)分布且方差齊，兩組比較使用兩樣本均數(shù)t 檢驗；三組間比較采用單因素方差分析，進一步兩兩比較用邦弗倫尼檢驗；方差不齊時使用塔姆黑尼檢驗；不符合正態(tài)分布時采用秩和檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.01 為差異有顯著統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

2.1.1 假手術(shù)組 12 只大鼠生命體征穩(wěn)定，無不良事件發(fā)生，存活率為100%。

2.1.2 模型1 組 18 只大鼠造模術(shù)后：1 只失血過多死亡；4 只大鼠出現(xiàn)便秘及腹脹，對癥處理后3 只存活、1 只死亡（見圖3）；1 只大鼠因左下肢啃食自殘后嚴重感染死亡。 該組大鼠最終存活15 只，經(jīng)模型評估13 只大鼠呈尿潴留為主要癥狀的NB 合格模型，故模型1 組存活率為83.3%、成模率為72.2%。 詳見表1。

2.1.3 模型2 組 18 只大鼠造模術(shù)后：1 只因體溫過低死亡；4 只大鼠先后出現(xiàn)膿血尿，抗炎處理后3只痊愈，1 只因膿腎死亡（見圖4）。 該組大鼠最終存活16 只，經(jīng)模型評估14 只大鼠呈尿失禁為主要癥狀的NB 合格模型，故模型2 組存活率為88.9%，成模率為77.8%。 詳見表1。

圖3 腸道脹滿及膀胱尿潴留明顯

圖4 尿液反流及泌尿系感染導致膿腎

2.2 每日手法排尿量比較

記錄模型1 組及模型2 組大鼠每日3 次手法排尿總量后發(fā)現(xiàn)：兩組大鼠手法排尿量在術(shù)后第4～5天達到峰值，隨后緩慢下降；術(shù)后第7～8 天，兩組大鼠手法排尿量明顯下降；隨后，模型1 組手法排尿量呈平穩(wěn)下降趨勢，并于術(shù)后第16～18 天趨于穩(wěn)定，而模型2 組手法排尿量呈快速下降趨勢，也于術(shù)后第16～18 天趨于穩(wěn)定。 詳見圖5。

對模型1 組及模型2 組大鼠每日手法排尿量進行統(tǒng)計分析后發(fā)現(xiàn)：兩組大鼠術(shù)后前7 日手法排尿量比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；從術(shù)后第8 天開始，模型1 組大鼠手法排尿量明顯多于模型2 組，兩組差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。 詳見圖6。

圖5 兩組模型大鼠術(shù)后第1～18 天每日手法排尿量情況

圖6 術(shù)后第1～18 天每日手法排尿量比較(±s，模型1 組n=13，模型2 組n=14)

表1 各組大鼠術(shù)后一般情況

2.3 尿流動力學比較

與假手術(shù)組和模型2 組比較，模型1 組膀胱最大容量及殘余尿量增多，差異均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），而模型2 組膀胱最大容量小于假手術(shù)組,差異有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），模型2 組較假手術(shù)組殘余尿量有增多趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；與假手術(shù)組比，模型1 組和模型2 組漏尿點壓力和膀胱最大壓力均升高，差異均有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01），模型1 組漏尿點壓力有高于模型2 組的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），模型1 組膀胱最大壓力較模型2 組更大，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。 詳見圖7。

3 討論

本研究結(jié)果提示，第8 胸椎下脊髓橫斷所致NB以逼尿肌-括約肌協(xié)同失調(diào)為主要類型，膀胱容量增大、排尿困難、殘余尿增多，尿潴留是其主要特征；而第10 胸椎下脊髓橫斷所致NB 以逼尿肌反射亢進為主要類型，膀胱容量相對變小、儲尿困難、殘尿量部分存在、尿失禁是其主要特征。完整的排尿周期分為儲尿期和排尿期兩個階段，正常膀胱儲排尿功能受中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周神經(jīng)系統(tǒng)的協(xié)同支配，即在高位腦橋-皮質(zhì)排尿中樞的控制下， 通過協(xié)調(diào)低位脊髓交感-副交感排尿中樞，調(diào)節(jié)脊髓交感、副交感神經(jīng)核及Onuf's 核的活動使支配膀胱的外周神經(jīng)協(xié)同的生理過程[14]。具體而言，膀胱外周神經(jīng)支配主要包括腹下神經(jīng)、盆神經(jīng)及陰部神經(jīng)。腹下神經(jīng)屬交感神經(jīng)，主要支配尿道內(nèi)括約?。ò螂最i、后尿道）及其興奮性收縮，實現(xiàn)儲尿期膀胱內(nèi)低壓和儲尿；盆神經(jīng)屬副交感神經(jīng)，主要支配膀胱逼尿肌及其興奮性收縮，實現(xiàn)排尿期膀胱內(nèi)壓上升直至尿液排出；而陰部神經(jīng)屬軀體神經(jīng)，主要支配尿道外括約肌，可在高位皮質(zhì)排尿中樞的協(xié)調(diào)下主觀性輔助控制膀胱儲排尿功能。

大鼠膀胱神經(jīng)支配結(jié)構(gòu)與人類相似，但其核團位置相對靠下，大鼠腹下神經(jīng)出自L1～L2 脊髓節(jié)段，大致對應其T10～T12 椎體范圍；盆神經(jīng)和陰部神經(jīng)出自L6～S1 脊髓節(jié)段，大致對應L1～L2 椎體范圍[14-15，18]。本研究中，第8 胸椎下脊髓橫斷造成的脊髓直接及繼發(fā)性損傷集中在T10 上下脊髓平面，此時高位排尿中樞對低位脊髓交感-副交感排尿中樞的協(xié)調(diào)性支配嚴重損害，出現(xiàn)高反射逼尿肌與高反射括約肌，即逼尿肌-括約肌協(xié)同失調(diào)[19]。第8 胸椎下脊髓橫斷造成NB 的病理本質(zhì)為逼尿肌無抑制性收縮過程中括約肌間斷或持續(xù)性舒張不能，其膀胱內(nèi)壓增大，但由于膀胱頸處括約肌梗阻，導致排尿困難，殘余尿增多，呈以尿潴留為主的癥狀表現(xiàn)，而大量殘余尿及長期尿潴留則會進一步引起膀胱容量的增大。 故尿流動力學可見其膀胱最大容量及殘余尿量明顯上升，膀胱最大壓力及漏尿點壓力顯著升高。第10 胸椎下脊髓橫斷造成的直接及繼發(fā)性損傷主要累及L1 上下脊髓平面，該損傷平面相對偏下，使得高位排尿中樞對脊髓交感排尿中樞的協(xié)同性控制得到一定程度保留，逼尿肌-括約肌協(xié)調(diào)情況相對較好，病理本質(zhì)以脊髓副交感排尿中樞過度興奮導致的逼尿肌反射亢進為主。 故該類NB 最大壓力及漏尿點壓力仍增高，但程度較前組輕，其以儲尿困難、膀胱容量相對變小為特征，并呈現(xiàn)出尿失禁為主的癥狀表現(xiàn)[20]，該組尿流動力學結(jié)果亦符合以上特征。 值得注意的是，本研究中雖然模型2 組殘余尿量與假手術(shù)組差異并無統(tǒng)計學意義，但考慮其膀胱容量相對縮小，依然可以認為其有部分殘余尿存在，這也與臨床實際情況相符合[21]。

圖7 各組大鼠尿流動力學指標比較(±s，假手術(shù)組n=12，模型1 組n=13，模型2 組n=14)

SSCI 后，大鼠會首先進入脊髓休克期，即與高位中樞分離后，橫斷平面以下脊髓所支配的內(nèi)臟和軀體反射、運動和感覺功能均明顯減退甚至消失,該時期可持續(xù)數(shù)小時至數(shù)周不等，通常脊髓損傷平面越高，脊髓休克期越長[22]。本團隊前期研究中已發(fā)現(xiàn)SSCI 模型大鼠脊髓休克期為期1 周左右[8]，本研究中也發(fā)現(xiàn)兩組SSCI 模型大鼠的每日手法排尿量均在術(shù)后第4～5 天到達頂峰，這是由于此時膀胱功能處于無反射期，逼尿肌及括約肌松弛癱瘓，無法有效排出尿液，出現(xiàn)代償性尿潴留狀態(tài)，故需依靠手法輔助排出大量尿液。 臨床而言，留置導尿管也是患者該時期的首選方案[23]。在術(shù)后第7～8 天，兩模型組大鼠每日手法排尿量明顯下降，說明此時膀胱收縮功能開始恢復，基本脫離脊髓休克期。 但由于高、低位排尿中樞間聯(lián)系受阻，逼尿肌會出現(xiàn)持續(xù)性無抑制性收縮，即逼尿肌反射亢進[24]，此時大鼠呈現(xiàn)反射性排尿模式，故術(shù)后第2 周開始，兩組SSCI 模型大鼠每日手法排尿量均呈下降趨勢。

因此，從SSCI 后膀胱的神經(jīng)源性及肌源性調(diào)控角度而言，本研究中兩種不同節(jié)段SSCI 所引起的NB 癥狀表現(xiàn)差異主要源于高位排尿中樞對低位脊髓交感排尿中樞調(diào)控的存廢，以及導致的逼尿肌-括約肌協(xié)同性問題[14]。 這亦可以解釋從術(shù)后第2 周開始，模型1 組大鼠每日排尿量下降趨勢平穩(wěn)，并最終于術(shù)后第16～18 天穩(wěn)定于尿潴留為主的病理狀態(tài)，而模型2 組大鼠每日排尿量下降趨勢迅速，并于術(shù)后第16～18 天穩(wěn)定于尿失禁為主的病理狀態(tài)的深層機制。 同時，本研究還佐證了本團隊前期發(fā)現(xiàn)的SSCI 后NB 大鼠模型在術(shù)后第18 天左右趨于穩(wěn)定的重要問題[7]，為后續(xù)該病動物實驗研究的開展奠定了良好的科學基礎。

NB 是SCI 后嚴重且難治性并發(fā)癥之一，此外，臨床上的SCI 患者還存在包括泌尿系感染、神經(jīng)源性胃腸功能障礙、壓瘡等在內(nèi)的一系列問題[23]，這些也在本研究的動物模型中得到較全面的展現(xiàn)，證明該模型制備法是可靠且貼合實際的。相應地，本研究為更好地關(guān)注膀胱功能，對術(shù)后存在膿血尿的泌尿系感染大鼠使用抗生素短期消炎處理，而反復感染的則予以剔除以免藥物影響實驗結(jié)果。 SCI 后胃腸道問題是該類動物模型死亡的重要因素，故本研究采用異氟烷吸入誘導大鼠麻醉，既滿足醫(yī)學動物倫理最新要求，也避免了既往水合氯醛所帶來的胃腸道刺激等副作用。同時，本研究對術(shù)后5 d 內(nèi)大鼠先予以營養(yǎng)性液體再逐漸配合固體飼料的喂養(yǎng)順序，有效減輕了其術(shù)后胃腸道負擔，并針對已存在腹脹及便秘的大鼠予以每日摩腹的預防措施，效果不佳者予以滲透性瀉劑乳果糖灌胃配合潤滑性瀉劑石蠟油灌腸。對壓瘡及啃食自殘大鼠則予以及時護理和苦味劑噴涂處理等。 以上優(yōu)化改良措施都進一步提高了動物術(shù)后存活率及成模率[7-8]。 此外，本研究結(jié)合術(shù)中觀察及相關(guān)文獻[25]后發(fā)現(xiàn)，大鼠脊椎上普遍存在易于體表定位的第2 胸椎棘突，而下方的第10 胸椎棘突高聳中立可觸及，且第9 胸椎及以上棘突方向朝尾側(cè)、第11～13 胸椎棘突朝頭側(cè),易于術(shù)中辨認。故相較于以往浮肋連接定位第13 胸椎后再向上逐個推按的易于出錯且繁雜的定位方式，本研究中優(yōu)化改良的手術(shù)定位方式，可以更快速精準地選定高位脊髓橫斷切口，縮短了手術(shù)時間，提高了造模效率。另外，本研究改用眼科平剪進行脊髓暴露后的橫斷，相比于刀片切割，其對神經(jīng)纖維的橫斷更為快速徹底，且降低了大量出血的風險，也減小了手術(shù)創(chuàng)面。

綜上所述，本研究優(yōu)化了SSCI 后NB 大鼠模型的制備及術(shù)后管理方案，提升了手術(shù)造模效率及術(shù)后動物存活率和成模率。 在此基礎上，結(jié)合膀胱儲排尿功能研究的金標準“尿流動力學”[26]分析后提出：第8 胸椎下脊髓橫斷所致NB 以逼尿肌-括約肌協(xié)同失調(diào)為主要類型，膀胱容量增大、排尿困難、殘余尿增多、尿潴留是其主要特征；第10 胸椎下脊髓橫斷所致NB 以逼尿肌反射亢進為主要類型，膀胱容量相對變小、儲尿困難、殘尿量部分存在、尿失禁是其主要特征。 高位排尿中樞對低位脊髓交感排尿中樞調(diào)控的存廢，導致逼尿肌-括約肌協(xié)同與否，是兩類NB 模型差異的重要原因。 該研究亦受制于樣本量偏小，動物個體差異難以控制，機制研究不夠深入以及模型觀察時間較短等限制，使得研究結(jié)果存在一定局限性，今后應結(jié)合動物平滑肌張力測定、神經(jīng)電生理、分子生物學等技術(shù)手段進一步加強本研究結(jié)論的客觀全面性。