ICSI周期中卵母細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集體異常與胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局

王小飛 周 燕 涂銨素 鐘 影*

1.四川省成都市錦江區(qū)婦幼保健院(610016)；2.四川省成都西囡婦科醫(yī)院

卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)助孕治療中，胚胎質(zhì)量是影響妊娠結(jié)局的重要因素[1]。研究顯示[2]，卵母細(xì)胞的形態(tài)學(xué)指標(biāo)，例如胞漿滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及中央胞漿顆?；鶗?huì)影響胚胎形成和胚胎質(zhì)量。因此，在臨床治療中，卵母細(xì)胞形態(tài)學(xué)評(píng)估對(duì)預(yù)測不孕癥治療效果以及妊娠結(jié)局有積極意義。卵母細(xì)胞內(nèi)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集(sERC)是卵母細(xì)胞胞漿內(nèi)的一種異?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)聚集體，主要表現(xiàn)為卵母細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)大聚集體，外形呈圓形或扁平型。既往研究證實(shí)[3-4]，卵母細(xì)胞出現(xiàn)sERC可引起受精、胚胎發(fā)育異常，導(dǎo)致妊娠率降低以及出現(xiàn)新生兒異常。2011年歐洲人類生殖與胚胎學(xué)會(huì)專家建議[5]舍棄sERC異常的胚胎。但目前臨床對(duì)于sERC異常的胚胎細(xì)胞還未形成統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。研究顯示[6-7]，43%的治療中心未舍棄sERC異常的卵母細(xì)胞，且sERC異常的卵母細(xì)胞行胚胎移植后仍可分娩正常健康的新生兒。因此，sERC異常的卵母細(xì)胞是否會(huì)造成胚胎發(fā)育以及妊娠結(jié)局異常，有待進(jìn)一步研究[8]。本研究通過分析sERC對(duì)胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局的影響，為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采用回顧性研究，以2020年1月—2020年7月本院行ICSI助孕治療的患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合ICSI助孕治療；②新鮮取卵周期；③年齡30～40歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①常規(guī)行IVF治療；②行睪丸或附睪穿刺取精；③多囊卵巢綜合征；④術(shù)前遺傳學(xué)篩查?；颊呔炇鹬橥鈺?，本研究經(jīng)院倫理委員會(huì)論證通過。

1.2 研究方法

1.2.1控制性促排卵及取卵所有患者按照促排方案，使用GnRH激動(dòng)劑(果納芬，瑞士Merck Serono公司)75～225 IU/d以及GnRH拮抗劑(西曲瑞克，意大利Merck KGaA公司)0.25 mg/d皮下注射，再次使用卵泡刺激素刺激患者卵泡，根據(jù)B超監(jiān)測和血清雌二醇水平適當(dāng)調(diào)整藥物劑量。當(dāng)患者主導(dǎo)卵泡直徑達(dá)到18～20mm，行人絨毛膜性腺刺激素(艾澤，意大利Merck KGaA公司)250 μg皮下注射，38h后行陰道卵泡穿刺獲取卵母細(xì)胞[9]。

1.2.2sERC異常評(píng)估獲取卵細(xì)胞2h后，使用80IU/ml透明質(zhì)酸酶(美國Irvine Scientific公司)對(duì)顆粒細(xì)胞進(jìn)行消化，培養(yǎng)箱培養(yǎng)2h，行ICSI操作。在倒置顯微鏡下對(duì)卵母細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行評(píng)估，在高倍顯微鏡下在細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)圓形以及扁平的盤狀物但內(nèi)未見液體，折光性相對(duì)較弱[10]為sERC陽性。在行ICSI操作中避免將精子注射到sERC中。

1.2.3觀察指標(biāo)①胚胎發(fā)育，獲卵數(shù)、成熟卵率、受精率以及優(yōu)胚率；②臨床結(jié)局，囊胚形成率、種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率以及活產(chǎn)率；③活產(chǎn)嬰兒畸形情況，主要包括多發(fā)畸形以及心血管畸形。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般情況

共納入患者120例，年齡(35.3±2.4)歲，不孕(4.4±3.0)年，Gn用量(29.4±2.6)支，基礎(chǔ)促黃體生成素(LH)4.11±1.20U/L。在獲得患者卵母細(xì)胞后，根據(jù)卵母細(xì)胞內(nèi)是否出現(xiàn)sERC分為sERC陽性組及sERC陰性組，兩組患者年齡、不孕周期、Gn用量及基礎(chǔ)LH水平無差異(P>0.05)。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2 兩組胚胎發(fā)育情況

兩組獲卵數(shù)、成熟卵率、受精率以及優(yōu)胚率均未見差異(均P>0.05)。見表2。

表2 兩組胚胎發(fā)育指標(biāo)比較[例(%)]

2.3 兩組臨床結(jié)局

兩組種植率無差異(P>0.05)，sERC陽性組囊胚形成率、臨床妊娠率、活產(chǎn)率均低于sERC陰性組，流產(chǎn)率高于sERC陰性組(均P<0.05)。見表3。

表3 兩組臨床結(jié)局分析[例(%)]

2.4 兩組活產(chǎn)嬰兒畸形情況

sERC陽性組發(fā)生活產(chǎn)兒多發(fā)畸形(1例，6.7%)以及心血管畸形(3例，20.0%)比例均高sERC陰性組(0例，0.0%)(1例，2.9%)(χ2=4.365，P=0.036)。

3 討論

卵母細(xì)胞周圍的顆粒細(xì)胞，在卵母細(xì)胞微環(huán)境的維持中發(fā)揮重要作用，對(duì)受精卵以及胚胎發(fā)育有重要作用[11]。有研究[12]證實(shí)，未成熟的卵母細(xì)胞以及周邊的顆粒細(xì)胞發(fā)生基因突變對(duì)妊娠結(jié)局以及胚胎發(fā)育有顯著意義。但在臨床治療中，對(duì)患者臨床診斷需要對(duì)卵母細(xì)胞以及周圍的顆粒細(xì)胞進(jìn)行共同培養(yǎng)后才能判定。國外研究[13]，對(duì)sERC陽性表達(dá)對(duì)胚胎發(fā)育尚存在一定爭議。有研究[14]分析sERC陽性異常表達(dá)為5.4%～23.1%；在卵母細(xì)胞sERC陽性分析，主要通過對(duì)患者卵母細(xì)胞的光學(xué)顯微鏡下觀察，但較小的sERC陽性細(xì)胞不易被發(fā)現(xiàn)[15]。所以臨床對(duì)sERC陽性異常表達(dá)分析存在一定誤差。

目前臨床對(duì)于sERC陽性異常表達(dá)機(jī)制尚不清晰。有研究認(rèn)為[16]，造成sERC陽性異常表達(dá)是由于患者的卵巢過度刺激造成，在HCG日雌二醇水平與sERC陽性表達(dá)情況呈顯著相關(guān)性。本研究中，兩組患者胚胎發(fā)育指標(biāo)中的獲卵數(shù)、成熟卵率、受精率以及優(yōu)胚率未見差異，取卵前LH水平未見差異，所以兩組患者的胚胎發(fā)育情況并不存在差異。正常生理作用下，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會(huì)對(duì)鈣離子的釋放進(jìn)行調(diào)節(jié)，在卵母細(xì)胞的成熟受精以及早期胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[17]。而sERC表達(dá)水平異?？赡軙?huì)刺激鈣離子的異常表達(dá)，導(dǎo)致受精率下降。本研究中兩組臨床結(jié)局分析顯示，sERC陽性患者的種植率、臨床妊娠率、流產(chǎn)率以及活產(chǎn)率均發(fā)生異常變化。國外研究[18]顯示，sERC陽性的卵母細(xì)胞分裂過程中，有絲分裂以及減數(shù)分裂的錯(cuò)誤率高于sERC陰性卵母細(xì)胞，所以卵裂的失敗可能導(dǎo)致胚胎染色體異常。而卵裂失敗的細(xì)胞在進(jìn)行滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育過程中會(huì)形成胎盤異常，如果這些細(xì)胞繼續(xù)發(fā)育會(huì)造成不良妊娠結(jié)局。本研究中出生嬰兒畸形情況sERC陽性組高于sERC陰性組。雖然2011年的歐洲人類生殖與胚胎學(xué)學(xué)會(huì)的指南明確指出[5]，不應(yīng)對(duì)sERC陽性的卵子進(jìn)行授精，但人們對(duì)SERa卵母細(xì)胞的看法，在丟棄與利用之間搖擺不定。相比自然周期，進(jìn)行ICSI操作發(fā)生印跡缺陷風(fēng)險(xiǎn)升高；同樣地，sERC陽性患者卵母細(xì)胞減數(shù)分裂及有絲分裂過程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤風(fēng)險(xiǎn)也升高。在臨床操作中很難判斷印記缺陷是由于實(shí)驗(yàn)方案造成，還是sERC陽性造成。因此，臨床治療中對(duì)相關(guān)指南[5]提出的舍棄sERC陽性卵母細(xì)胞的疑慮也具有一定依據(jù)。但就目前研究而言，sERC卵母細(xì)胞陽性患者的畸形情況呈升高趨勢，基于此，我們建議在臨床允許情況下，對(duì)sERC陽性的卵母細(xì)胞采取舍棄的措施。

本研究尚存在不足，包括樣本數(shù)量太少，研究中可能存在一定的誤差，同時(shí)納入研究對(duì)象時(shí)未對(duì)母體情況及精子質(zhì)量進(jìn)行限制，不能排除母體影響妊娠結(jié)局的因素，因此還需要大樣本、多中心研究和更加全面的納入和排除標(biāo)準(zhǔn)來證實(shí)本研究結(jié)果。此外，sERC形成的分子機(jī)制以及對(duì)卵母細(xì)胞和胚胎的影響還有待于進(jìn)一步研究, 對(duì)sERC陽性卵母細(xì)胞來源的嬰兒發(fā)育情況和安全性還需進(jìn)行多中心、長期隨訪觀察。

綜上所述，卵母細(xì)胞sERC異常表達(dá)對(duì)于胚胎發(fā)育及妊娠結(jié)局有一定影響，建議臨床允許情況下，以舍棄sERC陽性的卵母細(xì)胞為宜。