貴陽地區(qū)新生兒遺傳代謝疾病串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查分析

楊 雪 李林潔 張曉怡 劉興宇 湯賢英

貴州省貴陽市婦幼保健院(550003)

遺傳代謝病是因基因突變導(dǎo)致的細(xì)胞膜功能異常和酶缺陷，不僅易造成機體生化代謝紊亂，還可造成終身殘疾，誘發(fā)不可逆神經(jīng)系統(tǒng)損傷，嚴(yán)重影響出生人口素質(zhì)[1]。項東順[2]研究顯示，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是篩查新生兒患病的重要途徑。串聯(lián)質(zhì)譜篩查實現(xiàn)了多種疾病檢測，可提高實驗效率性和準(zhǔn)確性，從而盡早發(fā)現(xiàn)基因缺陷，最大程度上降低該病危害[3]。雖然串聯(lián)質(zhì)譜推廣價值較高，但在應(yīng)用過程中可受到采血時間、營養(yǎng)攝入、新生兒成熟度及新生兒代謝狀態(tài)等多種因素影響，出現(xiàn)陽性漏篩，干擾了臨床結(jié)果判讀[4]。目前串聯(lián)質(zhì)譜對新生兒遺傳代謝疾病監(jiān)測作用已得到臨床證實，但影響初篩陽性率因素研究較少。本文回顧性分析了新生兒遺傳代謝疾病初篩情況，分析初篩陽性新生兒特征，為提高本地區(qū)出生缺陷干預(yù)水平提供參考。

1 資料與方法

1.1 資料來源

經(jīng)本院倫理委員會審批，收集2015年11月16日—2019年12月31日來自于貴陽地區(qū)新生兒干血濾紙片樣本105742例及臨床資料，剔除缺失及錯誤數(shù)據(jù)。

1.2 檢測方法

①儀器設(shè)備：主要設(shè)備WATERS XEVO TQD；PerkinElmer非衍生化多種氨基酸、肉堿和琥珀酰丙酮測定試劑盒；數(shù)據(jù)來源博圣信息管理系統(tǒng)。②樣本采集：采集新生兒足跟外側(cè)或內(nèi)側(cè)血液標(biāo)本，制作成濾紙干血片(直徑>8mm)，自然通風(fēng)晾干，4℃保存，送檢。③串聯(lián)質(zhì)譜篩查：使用全自動打孔儀取圓形血片(直徑3.2mm)，放入96孔V底微孔板中，加入內(nèi)標(biāo)工作液(100μl)，置45℃ 45min震蕩孵育，轉(zhuǎn)移至無包被潔凈微孔中，封板檢測。對可疑陽性標(biāo)本復(fù)查1次，若復(fù)查結(jié)果與第一次相同需召回再次復(fù)查；若第一次檢測結(jié)果高于截斷值需復(fù)查；對復(fù)查結(jié)果異常者行基因檢測或氣相色譜檢測，確診疾病。

1.3 觀察指標(biāo)

分析2015—2019年、不同地區(qū)初篩陽性率，對比初篩陽性組和陰性組新生兒性別、出生孕周、出生體重情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)處理。計數(shù)資料用(%)表示，χ2檢驗；采用二元logistic回歸分析。檢驗水準(zhǔn)a=0.05。

2 結(jié)果

2.1 新生兒遺傳代謝病篩查

2015年11月16日—2019年12月31日累計初篩新生兒105 742例，男性56 281例，女性49 428例；胎齡>42周646例，37～41周101 295例，<37周3450例；出生體重≥4000g 4648例，2500g～3999g 94 500例，<2500g 3036例。正常104 329例；陽性1413例，初篩陽性率1.34%。初篩陽性召回率70.28%，確診14例，總發(fā)病率1/7553。14例中，苯丙酮尿癥4例(0.38/萬)、短鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥3例(0.28/萬)、異丁酰輔酶A脫氫酶缺乏癥2例(0.19/萬)、原發(fā)性肉堿缺乏癥2例(0.19/萬)，中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥、短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥、酪氨酸血癥 I 型各1例，發(fā)生率均為0.09/萬。

2.2 疾病高發(fā)基因突變類型

苯丙酮尿癥：苯丙氨酸羥化酶基因；異丁酰輔酶A脫氫酶缺乏癥：乙酰輔酶A脫氫酶8基因c.286G>A、c.887G>A、c.289G>A和c.904C>T；原發(fā)性肉堿缺乏癥：人源重組蛋白P01基因c.1195C>T；中鏈酰基輔酶A脫氫酶缺乏癥：重組人中鏈?；o酶A脫氫酶基因c.668T>C、c.1247T>C；短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥：短鏈?；o酶A脫氫酶基因c.1148G>A、c.1072G>A；c.981_983delGAC和c.1031A>G；ACADSB基因c.1165A>G；酪氨酸血癥 I 型：延胡索二酰乙酰乙酸酶基因 c.509G>T等。

2.3 不同年份、不同地區(qū)初篩情況

2015—2019年新生兒遺傳代謝疾病初篩陽性率分別為1.15%(62/5396)、0.63(192/30488)、0.88%(199/22617)、2.40%(531/22125)、1.71%(429/25116)。來自于貴陽市北部、西部地區(qū)(白云區(qū)、清鎮(zhèn)市、修文縣)初篩陽性率相對較高；東部、南部地區(qū)(南明區(qū)、開陽縣、花溪區(qū))初篩陽性率相對較低；觀山湖區(qū)雖地處貴陽市西部但初篩陽性率較低。見表1。

表1 貴陽市不同地區(qū)新生兒遺傳代謝疾病初篩陽性情況分布[例(%)]

2.4 初篩陽性與陰性新生兒基本資料

初篩陽性與陰性新生兒性別無差異(P>0.05)，出生孕周、新生兒出生體重有差異(P<0.05)。見表2。

表2 初篩陽性與陰性新生兒基本資料比較[例(%)]

2.5 二元logistic回歸分析

以“初篩是否陽性”作為因變量(1=初篩陽性；0=初篩陰性)，將“出生孕周、新生兒體重”為自變量，納入二元logistic回歸模型。結(jié)果顯示，早產(chǎn)、低體重兒為遺傳代謝病新生兒特征因素(P<0.05)。見表3、表4。

表3 因素變量賦值

表4 logistic回歸分析

3 討論

遺傳代謝病主要是因基因突變導(dǎo)致體內(nèi)受體、膜、蛋白、代謝酶發(fā)生異常病變，引發(fā)一系列臨床癥狀[5-6]。多發(fā)生在嬰幼兒期和新生兒期，若處理不及時可造成腦部和神經(jīng)系統(tǒng)損傷，影響新生兒健康生長發(fā)育[7-8]。串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)是目前篩查遺傳代謝病常用方法，為疾病確診、擬定治療方案提供科學(xué)依據(jù)，實現(xiàn)一次檢測多種疾病的目的[9-10]。封紀(jì)珍[11]研究顯示，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)能夠及時篩查出原發(fā)性肉堿缺乏癥、甲基丙二酸血癥、苯丙酮尿癥等多種新生兒遺傳代謝性疾病。

本研究對貴陽市范圍新生兒資料分析顯示，2015—2019年共初篩105 742例，初篩陽性率在2018年相對較高。在各個送樣地區(qū)中，總體而言貴陽市北部、西部地區(qū)初篩陽性率相對較高，而貴陽市東部、南部地區(qū)初篩陽性率相對較低。有學(xué)者[12]對江津市新生兒疾病篩查結(jié)果分析顯示，嘉平鎮(zhèn)、幾江街道、慈云鎮(zhèn)、石門鎮(zhèn)、永興鎮(zhèn)疾病篩出率相比于其他市區(qū)更高。說明遺傳病的發(fā)生可能與不同地區(qū)、不同時期有關(guān)，但具體機制有待深入研究。提示臨床，可通過串聯(lián)質(zhì)譜篩查實現(xiàn)“一次實驗檢測多種疾病”目的，為遺傳代謝病篩查提供技術(shù)支持。

本文分析，早產(chǎn)兒、低出生體重是初篩陽性新生兒的特征因素。低體重兒多為早產(chǎn)兒，可致腎上腺、肝臟、腎臟等器官功能發(fā)育不成熟[13]。為降低新生兒遺傳性代謝疾病發(fā)生，需注重：①廣泛開展新生兒遺傳性代謝性疾病的宣傳教育工作，強化家屬復(fù)診、就診意識[14]；②構(gòu)建新生兒疾病篩查網(wǎng)絡(luò)、制定新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范、對新生兒疾病篩查實施全面質(zhì)量管理；③注重管理，一方面廣泛開展串聯(lián)質(zhì)譜新生兒遺傳代謝病篩查，另一方面積極治療，建議有關(guān)部門在條件允許下設(shè)立項基金，以保證患病兒童及早就診治療。

總而言之，本次調(diào)查的貴陽地區(qū)多種遺傳代謝病有一定患病率，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)篩查新生兒多種遺傳代謝性疾病中有較好效果。早產(chǎn)兒、低體重兒有更高的發(fā)生可能，應(yīng)高度重視早產(chǎn)兒、低體重兒篩查；加強出生缺陷防治體系，減少多種遺傳代謝病帶來的危害，提高出生人口素質(zhì)。