不良孕產(chǎn)史及不孕不育夫婦115例外周血異常染色體核型分析

介情情

河南省三門峽市中心醫(yī)院(472000)

染色體異常為導(dǎo)致不良孕產(chǎn)史、不孕不育、出生缺陷的重要遺傳因素，外表正常但攜帶異常染色體是引起其子代流產(chǎn)和死胎，導(dǎo)致新生兒死亡、先天性畸形重要因素[1]。引起染色體異常的機(jī)制：一方面可能是細(xì)胞分裂后期的染色體不分離或有絲分裂中各因素導(dǎo)致染色體出現(xiàn)斷裂、缺失甚至錯誤連接；另一方面是遺傳于表型正常的倒位/易位型攜帶者的親代[2]。予以染色體檢查可對不良孕產(chǎn)史及不孕不育患者進(jìn)行優(yōu)生優(yōu)育指導(dǎo)。本文主要分析本院病例資料，探討外周血異常染色體核型檢出與不良孕產(chǎn)史、不孕不育的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年7月—2020年12月在本院行遺傳咨詢的不良孕產(chǎn)史及不孕不育夫婦585對(1170例)，年齡20～43歲，其中男585例，平均年齡30.5歲；女585例，平均年齡29.7歲。就診原因?yàn)椴涣荚挟a(chǎn)史、不孕不育史。均在入院時仔細(xì)詢問患者不良孕產(chǎn)家族史、放射性物質(zhì)接觸史、服用藥物等，排除解剖異常因素。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批，患者簽署知情同意書。

1.2 染色體核型分析

應(yīng)用外周血染色體核型制備方法進(jìn)行分析。常規(guī)抽取其靜脈血2 ml，應(yīng)用肝素抗凝，在無菌條件下接種5 ml至含有2%植物凝集素(PHA)的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基，輕輕搖勻后，置37℃ CO2恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)68～72 h，終止培養(yǎng)前2 h滴加秋水仙素處理，經(jīng)枸櫞酸鈉低滲處理后，應(yīng)用甲醇、冰醋酸固定，滴片，胰酶消化分帶，Giemsa染色顯帶。對每例標(biāo)本計(jì)數(shù)20～30個分裂相，分析其中3～5個核型，選取1～2個攝影存檔。若有染色體異常則計(jì)數(shù)100個分裂象并加倍核型分析數(shù)目。依據(jù)《人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制》[3]進(jìn)行染色體核型描述與診斷。

1.3 統(tǒng)計(jì)處理

采用SPSS23.0對獲得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料應(yīng)用(%)表示，以χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 異常染色體核型檢出情況

585對(1170例)夫婦中，共檢出異常染色體核型115例，檢出率9.8%；115例異常染色體核型中，包括常染色體異常93例(80.9%)，數(shù)目異常26例(22.6%)，結(jié)構(gòu)異常67例(58.3%)，包括臂間倒位27例(23.5%)、易位23例(20.0%)、羅伯遜易位17例(14.8%)，倒位中9號倒位、7號倒位、6號倒位、1號倒位分別21例、3例、2例、1例；性染色體異常22例(19.1%)，其中染色體數(shù)目異常、染色體結(jié)構(gòu)異常、性反轉(zhuǎn)分別15例、6例、1例。見表1。

表1 異常染色體核型類型分析

異常類型核型例數(shù)異常類型核型例數(shù)46,XX,inv(7)(p12q11.2)145,XY,der(13;14)(q10;q10)246,XX,inv(9)(p11q12)1145,XY,der(21;22)(q10;q10)146,XY,inv(9)(p11q12)345,XY,der(14;22)(q10;q10)246,XY,inv(9)(p11q13)545,XX,der(15;15)(q10;q10)146,XY,inv(6)(p23q15),21pss245,XX,der(21;21)(q10;q10)146,XX,inv(1)(p11q12)145,XY,der(15;21)(q10;q10)1 易位2345,XX,der(21;22)(q10;q10)146,XX,t(4;15)(q13;q11)1性染色體異常2246,XY,t(2;5)(q35;q13)2 染色體數(shù)目異常1546,XY,t(1;10)(q23;p11.2)147,XXY746,XY,t(2;18)(q31;q21)147,XYY546,XY,t(7;11)(q32;q13)145,X146,XX,t(3;10)(p13;q24)147,XXX,t(8;11)(q13;q23)146,XX,t(8;18)(p11;q21)347,XXX146,XY,t(5;18)(q13;q21)1 染色體結(jié)構(gòu)異常646,XX,t(8;11)(q13;q23)146,X,del(Xp)[19]/45,X[11]246,XX,t(1;10)(q23;p11.2)246,X,del(X)(p11)246,XX,t(2;9)(q34;q11.3)146,XY,del(Y)(q11.23)146,XX,t(1;4)(q45;q27)146,X,del(X)(q26qter)146,XX,t(5;12)(q35.4;q23.5)1 性反轉(zhuǎn)46,XY146,XY,t(2;11)(q21;p15)1

2.2 不同性別患者染色體異常核型檢出情況

染色體異常核型檢出率男性(9.6%，56/585)與女性(10.1%，59/585)無差異(χ2=0.087，P>0.05)；男性性染色體數(shù)目異常占比高于女性，常染色體數(shù)目異常及結(jié)構(gòu)異常(倒位、易位、羅伯遜易位)、性染色體結(jié)構(gòu)異常、性反轉(zhuǎn)占比低于女性(P<0.05)。見表2。

表2 不同性別患者染色體異常核型檢出比較[例(%)]

2.3 染色體異常核型患者的臨床表現(xiàn)

染色體核型異常者臨床表現(xiàn)多為習(xí)慣性流產(chǎn)或胚胎停育(45例，39.1%)、胎兒染色體異常(18例，15.7%)、死胎與死產(chǎn)(16例，13.9%)、畸胎史(10例，8.7%)、產(chǎn)先天性疾病患兒(8例，7.0%)、無精子(10例，10.4%)、少精子與弱精子(6例，5.2%)。

3 討論

不良妊娠史包括反復(fù)流產(chǎn)、畸形胎兒、死胎、既往有染色體異常胎兒妊娠史與畸形兒出生史等[4-5]。既往有不良妊娠史或不孕不育的夫婦再妊娠時心理壓力大、精神易緊張，且再次妊娠時是否發(fā)生不良妊娠結(jié)局和既往有流產(chǎn)史、妊娠次數(shù)多等有密切關(guān)系[6]。染色體是遺傳物質(zhì)攜帶者，染色體異常是導(dǎo)致不孕不育及不良孕產(chǎn)史的重要因素[7-8]。對不孕不育及不良孕產(chǎn)史的夫婦進(jìn)行外周血染色體檢查十分必要。

染色體核型異常檢出率在各地區(qū)報(bào)道各異。劉曉光等[9]報(bào)道，河北省保定市某醫(yī)院3348例不孕不育患者中，異常核型檢出率為2.09%；程啟航等[10]報(bào)道浙江某地區(qū)342例不良孕產(chǎn)史及不孕不育患者染色體異常核型檢出率為9.06%；董國法等[11]報(bào)道，廣州地區(qū)1273例不良孕產(chǎn)史者染色體異常核型檢出率為10.37%；張素華等[12]報(bào)道揚(yáng)州地區(qū)5292例不良孕產(chǎn)史人群染色體核型異常檢出率為5.56%；其他地區(qū)報(bào)道的染色體核型異常檢出率為7.14%[13]、7.1%[14]。本次檢測染色體核型異常率為9.8%，差異之處可能與地域、環(huán)境因素、飲食習(xí)慣等不同有關(guān)。

劉曉飛等[15]報(bào)道，豫西地區(qū)1261對(2522例)不良孕產(chǎn)史夫婦中染色體核型異常176例，染色體多態(tài)性占50.0%，易位型占27.3%，性染色體數(shù)目異常占14.2%，倒位型占6.8%，標(biāo)記染色體占異常核型1.7%；孟倩等[16]報(bào)道，58例核型異常的不孕及不良孕產(chǎn)史夫婦中，染色體異常主要包括平衡易位、臂間倒位、多態(tài)性等。本次115例異常染色體核型中常染色體異常占80.9%，性染色體異常占19.1%，表明在不良孕產(chǎn)史及不孕不育夫婦中染色體核型異常以常染色體異常為主。

親代染色體異常改變可影響生育能力，或引起子代染色體易位及缺失，導(dǎo)致流產(chǎn)、胎停育、死胎等不良孕產(chǎn)史。易位為不良孕產(chǎn)史及不孕不育夫婦較常見的染色體結(jié)構(gòu)異常。本次易位占異常染色體核型的20.0%，其中平衡易位發(fā)生率高。平衡易位使遺傳物質(zhì)平衡受破壞，最終導(dǎo)致流產(chǎn)或死胎、畸形[17]。臂間倒位時，親代雜合子于減數(shù)分裂時配對、交換機(jī)會增加，重復(fù)及缺失部分更短，導(dǎo)致子代胚胎存活度更高，其中1、6、7、9號染色體縊痕染色質(zhì)區(qū)是容易發(fā)生自發(fā)、誘發(fā)斷裂部位，其數(shù)目增加或減少均可對染色體的次縊痕區(qū)著絲粒-動粒復(fù)合體形態(tài)變化、正常功能發(fā)揮產(chǎn)生影響，可產(chǎn)生非正倍體，尤其是9號染色體的臂間倒位最常見，一般認(rèn)為其是染色體多態(tài)性的表現(xiàn)，該病無遺傳效應(yīng)[19]。本次檢出的臂間倒位占異常染色體核型的23.5%，且以9號染色體臂間倒位為主(77.8%)，與一項(xiàng)天津地區(qū)[18]的報(bào)道結(jié)果相近。羅伯遜易位為平衡易位的特殊形式，本次檢出羅伯遜易位占14.9%。

染色體數(shù)目異常涉及的基因數(shù)量較大，常導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育或造成不良孕產(chǎn)史。本次檢出的常染色體中數(shù)目異常26例，以47,XXY型為主，47,XXY即Klineferter綜合征，也稱為先天性睪丸發(fā)育不良或XXY綜合征，其機(jī)制為患兒父親或母親生殖細(xì)胞減數(shù)分裂時X染色體不分離或受精卵有絲分裂不分離所致[18]。性別決定的關(guān)鍵是與卵子結(jié)合的精子類型(X或Y型)[19]，性染色體異常主要包括染色體數(shù)目異常、染色體結(jié)構(gòu)異常、性反轉(zhuǎn)，其中染色體數(shù)目異常涉及的基因數(shù)量較大常導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育或造成不良孕產(chǎn)史，而結(jié)構(gòu)異常指染色體或染色單體經(jīng)斷裂-重?fù)Q或互換機(jī)制，產(chǎn)生的染色體畸變及染色單體畸變；性反轉(zhuǎn)綜合征則是性別發(fā)育異常性遺傳疾病[20]。本次染色體數(shù)目異常、染色體結(jié)構(gòu)異常、性反轉(zhuǎn)分別15例、6例、1例，其中染色體數(shù)目異常占多數(shù)。

歐陽魯平等[21]發(fā)現(xiàn)，3025對不良孕產(chǎn)史夫婦中，染色體異常檢出率男性(12.8%)與女性(14.8%)無差異；而樊衛(wèi)民等[22]發(fā)現(xiàn)，在107例染色體異常核型的不孕不育患者中，男性性染色體數(shù)目異常率高于女性，女性多見低比例嵌合。本次染色體異常核型檢出率男性與女性未見差異，在異常核型構(gòu)成中男性的性染色體數(shù)目異常占比高于女性?？紤]是因?yàn)槟行陨臣?xì)胞形成時可產(chǎn)生攜帶有平衡易位的精子，但正常精子需經(jīng)過選擇，而女性卵子數(shù)量有限，故女性染色體異常檢出率要高于男性，染色體異常數(shù)目發(fā)生率更高。

孕早期胚胎停育為近年來不良妊娠的最主要表現(xiàn)，夫妻雙方的染色體核型異常為導(dǎo)致不良妊娠的重要原因。本次發(fā)現(xiàn)，染色體核型異常者臨床表現(xiàn)多為習(xí)慣性流產(chǎn)或胚胎停育、胎兒染色體異常、死胎與死產(chǎn)、畸胎史、產(chǎn)先天性疾病患兒、無精子、少精子與弱精子，與張?jiān)碌萚23]及劉惠玲等[24]報(bào)道結(jié)果相近，因而染色體異常為引發(fā)不孕不育、妊娠胎兒丟失、智力低下、不良孕產(chǎn)史等疾病的主要原因，也是孕前優(yōu)生遺傳咨詢的主要問題，開展孕前優(yōu)生遺傳咨詢及檢查，聯(lián)合染色體篩查與產(chǎn)前診斷，可防止染色體病患兒的出生。

綜上所述，本次1170例不良孕產(chǎn)史及不孕不育夫婦中，染色體異常核型檢出率為9.8%，其中常染色體異常較常見，尤其是數(shù)目異常及臂間倒位、易位、羅伯遜易位；有助于對不孕不育夫婦開展染色體核型分析及遺傳咨詢。