ALDH1、SOX2表達(dá)與卵巢漿液性腫瘤預(yù)后相關(guān)性

崔艷超 李 勤 崔艷平 王 夏 姜 虹

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽,712046)；2.陜西中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院；3.西北婦女兒童醫(yī)院

卵巢癌是女性死亡率高的惡性腫瘤，卵巢漿液性腫瘤是子宮外女性生殖道最常見的組織學(xué)腫瘤類型[1]。缺少可靠的特異性標(biāo)志物[2]，有75%的卵巢癌患者首次確診就是晚期且預(yù)后不良[3]。盡管科學(xué)發(fā)展推動了許多其他癌癥患者預(yù)后的改善，但在過去50年里惡性卵巢腫瘤患者的總體生存率并沒有根本改變[4]。乙醛脫氫酶1(ALDH1)是肺癌、胰腺癌、前列腺癌、頭頸部癌的一種癌癥干細(xì)胞標(biāo)志物[5]；ALDH1是卵巢癌的預(yù)后標(biāo)志，表達(dá)增加與預(yù)后不良相關(guān)的研究最多[6]。1994年，作為SOX家族成員之一的SOX2基因在人類中被發(fā)現(xiàn)并表征[7]，目前為止已在多種上皮源性的腫瘤中檢測到SOX2表達(dá)增強(qiáng)，例如空腔鱗狀細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌、結(jié)腸直腸癌、和卵巢癌等[7]。在卵巢癌中，多項研究[8]證明SOX2的表達(dá)從良性、交界性到惡性逐漸增加，且與卵巢癌不良臨床結(jié)局相關(guān)[9]。然而，ALDH1和SOX2在卵巢漿液性腫瘤組織中的表達(dá)還未見研究。因此，本研究檢測卵巢漿液性腫瘤組織中ALDH1、SOX2表達(dá)，分析二者在卵巢漿液性腫瘤中的作用以及與患者預(yù)后的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017年6月—2018年6月在本院手術(shù)治療的卵巢漿液性腫瘤患者79例為研究對象，術(shù)中收集患者病理組織標(biāo)本送病理分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：①參照世界衛(wèi)生組織 2014年診斷標(biāo)準(zhǔn)病理診斷為卵巢漿液性腫瘤；②本院手術(shù)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有其他惡性腫瘤等重大疾??；②入院前有放療、化療等；③臨床資料不完整。本研究經(jīng)過院道德倫理委員會批準(zhǔn)通過，樣品采集均取得受試者知情同意。

1.2 檢測方法

1.2.1免疫組織化學(xué)染色將收集的3種不同病理組織切片常規(guī)脫蠟，高壓修復(fù)，磷酸緩存液(PBS)沖洗后加入一抗(ALDH1兔多克隆抗體(ab2781119)，SOX2兔多克隆抗體(ab2781119)，均購自上海谷研實業(yè)有限公司)4℃過夜，再次PBS沖洗，加入二抗37℃孵育20 min，行DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明后封片。高表達(dá)對照為已知的高表達(dá)病理組織切片，低表達(dá)對照為PBS代替一抗。

1.2.2免疫組化結(jié)果評價標(biāo)準(zhǔn)SOX2主要表達(dá)于子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞核，ALDH1主要表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)。根據(jù)染色強(qiáng)度和高表達(dá)細(xì)胞百分比綜合評分：無著色為0分，淡棕黃色為1分，棕黃色為2分，深棕黃色為3分；高表達(dá)細(xì)胞占比0～5%為0分，5%～24%為1分，25%～49%為2分，50%～74%為3分，≥75%為4分。兩種評分相加≤3分為低表達(dá)，>3分為高表達(dá)。

1.3 預(yù)后隨訪

從患者病理確診日起，門診或電話定期隨訪，觀察患者生存時間，術(shù)后2年內(nèi)每3個月進(jìn)行1次隨訪，第3年開始6個月隨訪1次，終點(diǎn)事件為患者死亡。隨訪截止時間為2021年6月。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

根據(jù)病理結(jié)果分為卵巢漿液性癌(惡性組，54例)，年齡52.4±6.2歲；卵巢交界性漿液性腫瘤(交界性組，15例)，年齡52.4±6.1歲；卵巢漿液性囊腺瘤(良性組，10例)，年齡51.9±6.3歲。根據(jù)FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期15例、Ⅱ期7例、Ⅲ期32例、Ⅳ期25例。按照病理組織學(xué)分級，高分化30例、中分化25例、低分化24例；絕經(jīng)38例、未絕經(jīng)41例。

2.2 ALDH1與SOX2蛋白的表達(dá)

在79例卵巢漿液性腫瘤組織標(biāo)本中，ALDH1、SOX2蛋白在惡性組、交界性組、良性組病理組織中高表達(dá)率均依次降低(均P<0.05)。見表1。

表1 各組病理組織中ALDH1、SOX2蛋白表達(dá)比較[例(%)]

2.3 ALDH1、SOX2表達(dá)相關(guān)性

卵巢漿液性腫瘤組織中ALDH1、SOX2表達(dá)存在明顯關(guān)系(P<0.05)，見表2。經(jīng)GEPIA數(shù)據(jù)庫檢索分析發(fā)現(xiàn)，ALDH1、SOX2二者表達(dá)水平呈正相關(guān)(P<0.05)。見圖1。

表2 ALDH1與SOX2表達(dá)關(guān)系

圖1 GEPIA數(shù)據(jù)庫分析患者病理組織中ALDH1、SOX2表達(dá)相關(guān)性

2.4 ALDH1與SOX2蛋白表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)關(guān)系

病理組織中ALDH1與SOX2蛋白表達(dá)與患者年齡無關(guān)(P>0.05)。與患者腫瘤FIGO分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、病理分級、盆腔侵犯、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、Ki-67指數(shù)有關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 病理組織中ALDH1、SOX2蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)關(guān)系[例(%)]

臨床病理參數(shù)例數(shù)ALDH1高表達(dá)(n=45) 低表達(dá)(n=34) χ2 P SOX2高表達(dá)(n=51) 低表達(dá)(n=28) χ2 P 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5239(86.7)13(38.2)20.1930.00042(82.4)10(35.7)17.4780.000FIGO分期23.3470.00018.5250.000 Ⅰ+Ⅱ223(6.7)19(55.9)6(11.8)16(57.1) Ⅲ+Ⅳ5742(93.3)15(44.1)45(88.2)12(42.9)病理分級19.3430.0008.5270.014 高3020(44.4)10(29.4)25(49.0)5(17.9) 中2520(44.4)5(14.7)15(29.4)10(35.7) 低245(11.1)19(55.9)11(21.6)13(46.4)盆腔侵犯5040(88.9)10(29.4)29.4880.00038(74.5)12(42.9)7.7950.005大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移5542(93.3)13(38.2)27.7980.00040(78.4)15(53.6)5.2820.022Ki67指數(shù)陽性6043(95.6)17(50.0)22.0040.00045(88.2)15(53.6)11.8910.001

2.5 影響患者預(yù)后的單因素分析

單因素分析顯示，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、盆腔侵犯、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、Ki-67指數(shù)、ALDH1、SOX2蛋白表達(dá)均與患者預(yù)后有關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 卵巢漿液性腫瘤患者預(yù)后影響單因素分析 [例(%)]

2.6 -Kaplan-Meier生存分析

本研究79例患者，末次隨訪日期2021年6月30日，共30例死亡，49例存活。Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示，ALDH1蛋白高表達(dá)組患者3年累積生存率低于低表達(dá)組(χ2=41.112，P=0.000)，患者3年累積生存率SOX2蛋白高表達(dá)組低于低表達(dá)組(χ2=32.519，P=0.000)。見圖2。

圖2 不同ALDH1、SOX2表達(dá)患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

上皮性卵巢癌是最致命的婦科惡性腫瘤，給女性身心健康帶來嚴(yán)重威脅[10]。在疾病早期缺乏特定的癥狀是導(dǎo)致高死亡率重要因素。多數(shù)患者診斷時已到晚期[11]。發(fā)病原因復(fù)雜，遺傳、輸卵管上皮種植、絕經(jīng)晚等均是卵巢癌發(fā)生的危險因素[12]。盡管在診斷和手術(shù)方面取得了新的進(jìn)展，以及化療方案的發(fā)展，但在過去40年中晚期上皮性卵巢癌5年生存率仍保持在12%。尋找治療卵巢漿液性腫瘤的新靶點(diǎn)及評估病情發(fā)展及預(yù)后是卵巢漿液性腫瘤研究的重點(diǎn)。

ALDH1是一種解毒酶，參與早期干細(xì)胞分化過程中視黃醇氧化成視黃酸的過程。此外，ALDH1被認(rèn)為是癌癥干細(xì)胞和祖細(xì)胞標(biāo)記物嗎，在多種惡性腫瘤中表達(dá)[13]，包括人乳腺癌。高水平ALDH1活性預(yù)示著乳腺癌預(yù)后不良[14]。有研究發(fā)現(xiàn)ALDH1能夠通過對卵巢上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)錄基因的激活促進(jìn)上皮細(xì)胞異常持續(xù)增殖，從而降低癌細(xì)胞的錯配修復(fù)能力[15]。錢茹等[16]發(fā)現(xiàn)ALDH1在卵巢癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)，促進(jìn)了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。本研究發(fā)現(xiàn)ALDH1蛋白在卵巢漿液性癌組織中呈高表達(dá)，在惡性組、交界性組、良性組患者病理組織中高表達(dá)率逐漸降低；表達(dá)與患者年齡無關(guān)，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、病理分級、盆腔侵犯、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、Ki-67指數(shù)陽性有關(guān)，提示ALDH1可能參與了卵巢良性腫瘤的癌變過程。人類SOX2基因編碼317個氨基酸的蛋白質(zhì)[17]，最初被發(fā)現(xiàn)可以維持胚胎干細(xì)胞的多能性，最近被證明與一系列惡性腫瘤有關(guān)。大量研究表明，SOX2在多種類型腫瘤中促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲[18]。高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展或多種癌癥的不良預(yù)后相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)SOX2蛋白在卵巢漿液性癌中呈高表達(dá)，在惡性組、交界性組、良性組病理組織中的表達(dá)率分別為83.33%、26.67%、20.00%依次降低，與患者FIGO分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、病理分級、盆腔侵犯、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、Ki-67指數(shù)陽性有關(guān)，提示，SOX2可能影響卵巢漿液性癌的發(fā)生發(fā)展。本研究進(jìn)一步分析，卵巢漿液性腫瘤組織中ALDH1與SOX2表達(dá)水平呈正相關(guān)，提示ALDH1和SOX2可能存在某種機(jī)制影響著卵巢漿液性癌變進(jìn)程。本研究因素分析顯示，F(xiàn)IGO分期、淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、盆腔侵犯、大網(wǎng)膜轉(zhuǎn)移、Ki-67指數(shù)、ALDH1、SOX2蛋白表達(dá)均與巢漿液性腫瘤患者預(yù)后有關(guān)；Kaplan-Meier分析顯示，ALDH1、SOX2蛋白高表達(dá)患者3年累積生存率均低于低表達(dá)組，表明ALDH1、SOX2蛋白表達(dá)均與患者預(yù)后有關(guān)，提示二者可能通過某種機(jī)制共同參與卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生發(fā)展并影響患者預(yù)后。

綜上所述，ALDH1、SOX2在漿液性癌組織中呈高表達(dá)且二者表達(dá)正相關(guān)，與患者部分臨床病理參數(shù)和預(yù)后生存相關(guān)，具有重要的臨床意義。但是，本研究納入樣本量有限，可能存在一定誤差，后續(xù)講加大樣本量繼續(xù)驗證本研究結(jié)果。ALDH1與SOX2具體作用機(jī)制仍需通過細(xì)胞實驗深入研究。