基于HPTT軸探討補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方調(diào)節(jié)EAMG大鼠免疫系統(tǒng)平衡的機(jī)制

王強(qiáng)，況時祥，李若照，婁金波，錢憶家，雍波，劉運(yùn)權(quán)

重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）是由于乙酰膽堿受體抗體（acetylcholine receptor antibody，AchR-Ab）破壞神經(jīng)肌肉突觸后膜乙酰膽堿受體而誘發(fā)的自身免疫性疾病，臨床主要表現(xiàn)為患者四肢近端無力、眼瞼下垂、復(fù)視和吞咽障礙等癥狀［1-2］。MG病情反復(fù)，遷延難愈，多合并甲狀腺功能異常等其他自身免疫性疾病，嚴(yán)重者可危及生命。目前臨床治療主要采用大劑量腎上腺皮質(zhì)激素，但不良反應(yīng)較大［3］。MG屬中醫(yī)“痿證”范疇，基本病機(jī)為臟腑肌肉筋脈損傷。該病起于脾虛，累及于腎，兼有水濕濁毒內(nèi)生，治療上應(yīng)予補(bǔ)脾益腎為主，化濕解毒貫穿始終。補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方以補(bǔ)中益氣湯為基礎(chǔ)方，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)辨證選藥，旨在脾腎雙補(bǔ)，化瘀祛濕，改善MG癥 狀［4］。下 丘 腦-垂 體-甲 狀 腺-胸 腺（hypothalamus-pituitary-thyroid-thymus，HPTT）軸是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)3個主要軸之一，是MG調(diào)節(jié)的主要傳出通路［5-6］。從HPTT軸調(diào)控胸腺自身免疫層面來揭示MG發(fā)病機(jī)制可能是治療MG的突破口［7］。本研究擬通過建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力（experimental autoimmune myasthenis gravis，EAMG）大鼠模型，探討補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方通過HPTT軸調(diào)節(jié)EAMG大鼠免疫系統(tǒng)的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動物：清潔級Lewis雌性大鼠120只，9～10周齡，體質(zhì)量180～200 g，購自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SYXK（吉）2021-0006。主要試劑：補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方（中藥配方顆粒，黃芪6 g，黨參6 g，蒼術(shù)2.2 g，土茯苓4 g，陳皮2 g，升麻2.2 g，丹參3.6 g，淫羊藿1.5 g，鎖陽2.2 g，生地4 g，制附片3.5 g）由廣東一方制藥有限公司生產(chǎn)，貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥房提供；醋酸潑尼松片購自辰欣藥業(yè)股份有限公司（國藥準(zhǔn)字H37021900，規(guī)格：5 mg）；注射用異戊巴比妥鈉購自上海上藥新亞藥業(yè)有限公司（國藥準(zhǔn)字H31021725，規(guī)格：0.1 g），鼠源性AchR-sα亞基97-116肽段序列（R97-116）由西安美聯(lián)生物技術(shù)有限公司合成；CD4、CD25、Foxp3流式抗體購自英國Abcam；蘇木素（H9627）、水溶性伊紅Y（71014544）購自美國Sigma，大鼠AchR-Ab酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測試劑盒購自FineTest；血清三碘甲狀腺原氨酸（T3）、甲狀腺素（T4）、促甲狀腺激素（TSH）、促甲狀腺激素釋放激素（TRH）、腫瘤壞死因子（TNF）-β、白細(xì)胞介素（IL）-4和IL-10檢測試劑盒購自北京北方生物技術(shù)研究所。主要儀器：RM 2016輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)購自德國Leica公司、BX53型生物顯微鏡購自奧林巴斯公司、JT-12J電腦生物組織脫水機(jī)和包埋機(jī)購自武漢俊杰電子有限公司、C2500-R-230V微型高速離心機(jī)購自美國Labnet公司、ICV-450電熱恒溫培養(yǎng)箱購自日本ASONE公司、Multiskan MK3全自動酶標(biāo)儀購自美國Thermo scientific公司、FC500流式細(xì)胞分析儀購自美國Beckman Coulter公司、1260高效液相色譜儀購自美國Agilent公司。

1.2動物分組、造模及給藥將120只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對照組，模型組，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方低、中、高劑量組和西藥組，每組20只。將大鼠飼養(yǎng)在溫度（25±2）℃、濕度50%±10%、光/暗循環(huán)12 h的SPF級動物房中，普通顆粒飼料，自由取食和飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)6周。實(shí)驗(yàn)經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物福利倫理委員會批準(zhǔn)。第6周末，復(fù)制EAMG實(shí)驗(yàn)動物模型［8］，首先將鼠源性R97-116、完全福氏佐劑（CFA）、磷酸鹽緩沖液（PBS）按1∶1.5∶1.5體積比充分混勻制成免疫乳劑。取200 μL制備好的免疫乳劑皮下注射至大鼠足墊、腹部、背部等部位，對照組皮下注射等量PBS進(jìn)行首次免疫。首次免疫后30及45 d，重新制備免疫乳劑（體積比R97-116∶CFA∶PBS=1∶3∶3），再取制備好的免疫乳劑200 μL強(qiáng)化接種，對照組在相同部位注射等量PBS。造模成功2周后進(jìn)行灌胃治療，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方低、中、高劑量組大鼠分別灌胃4.75、7.12、9.49 g/kg，西藥組大鼠灌胃5.4 mg/kg醋酸潑尼松片，灌胃體積為10 mL/kg，模型組和對照組大鼠灌胃等體積生理鹽水，1次/d，連續(xù)灌胃4周。

1.3對各組大鼠行為學(xué)的觀察（1）各組大鼠體質(zhì)量變化。（2）Lennon評分［9］：建模前、建模后和末次給藥后對各組大鼠進(jìn)行Lennon評分。Lennon評分分為4級：0級，大鼠無明顯肌無力表現(xiàn)；1級，大鼠撕咬無力，四肢力量減弱，在光滑地面上大鼠前肢打滑，日?；顒訙p少且容易疲勞；2級，大鼠行動明顯無力，休息時脊背隆起，腳趾明顯彎曲，頭尾下垂，動作笨拙，行走不穩(wěn)；3級，大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重?zé)o力現(xiàn)象，無撕咬動作，呼吸困難，瀕死甚至已死亡。癥狀居中間者分別評為0.5、1.5、2.5級。

1.4標(biāo)本采集實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，將每組大鼠均分成2部分，一部分給予0.3%異戊巴比妥鈉1 mL麻醉處死，心臟采血，分離血清，-20℃冰箱保存待用；大鼠取胸腺置于預(yù)冷生理鹽水中洗滌，將胸腺放于KRT緩沖液中洗滌、研磨，并以60目尼龍網(wǎng)過濾，濾液1 200 r/min離心10 min，棄上清液。另一部分大鼠頸椎脫臼處死后立即放入乙醇中浸泡消毒，無菌條件下取出胸腺組織，剝離脂肪、血管和結(jié)締組織，洗滌，去除血細(xì)胞，置于盛有PBS培養(yǎng)皿中。采用Follicol法制備胸腺單核細(xì)胞懸液，用無菌注射器針芯和200目不銹鋼篩網(wǎng)研磨組織獲得單細(xì)胞懸液。4℃、800 r/min離心10 min，棄上清液，取細(xì)胞層，破裂紅細(xì)胞，PBS液洗2遍，臺盼藍(lán)染色液法檢測所分離細(xì)胞的活力＞90%。

1.5蘇木精-伊紅（HE）染色評估胸腺組織病理變化常溫下梯度乙醇對胸腺組織進(jìn)行脫水處理，二甲苯透明后的組織塊浸蠟、包埋。包埋好的蠟塊經(jīng)切片，脫蠟后放入蘇木素染液染色5 min，自來水浸洗返藍(lán)，將切片放入1%水溶性伊紅染液中染色5 min，水洗浸洗30 s，風(fēng)干后中性樹膠封片，最后鏡檢。

1.6ELISA檢測血清AchR-Ab含量將實(shí)驗(yàn)結(jié)束時收集的血樣以500×g離心15 min，取上清液，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書檢測AchR-Ab水平。

1.7胸腺Treg細(xì)胞特征性表面標(biāo)志物及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)檢測取1.4制備的胸腺單核細(xì)胞懸液，使用流式細(xì)胞分析儀檢測EAMG大鼠胸腺中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例。使用TNF-β、IL-4和IL-10 ELISA試劑盒檢測大鼠血清Treg細(xì)胞相關(guān)因子水平，嚴(yán)格按照說明書分別加入各個試劑盒和待測樣組分，酶標(biāo)儀檢測光密度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣本TNF-β、IL-4和IL-10含量。

1.8HPTT軸功能損傷指標(biāo)檢測采用放射免疫分析法，按試劑盒說明書測定大鼠血清T3、T4、TSH和TRH水平；將大鼠斷頭取腦，冰盤上剖取皮層，勻漿，采用高效液相層析電化學(xué)檢驗(yàn)法測定大鼠大腦皮層去甲腎上腺素（NE）含量；取大鼠下丘腦，加入1 mol/L鹽酸充分勻漿，采用放射配基分析法測定下丘腦T3受體（T3R）含量。

1.9統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間均數(shù)比較用單因素方差分析（ANOVA）；組間多重比較時方差齊選用LSD-t法，方差不齊選用Tamhane’s T2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量和行為學(xué)變化建模前各組大鼠體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；建模后，對照組大鼠的體質(zhì)量大于其余5組（P＜0.05）；給藥后，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組和西藥組大鼠體質(zhì)量較模型組升高（P＜0.05），見表1。建模前各組大鼠Lennon評分均為0分；建模后，各建模組大鼠Lennon評分較對照組升高（P＜0.05）；給藥后，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方低、中、高劑量組和西藥組Lennon評分較模型組均降低，且高劑量組和西藥組Lennon評分較低、中劑量組降低（P＜0.05），見表2。

Tab.1 Changes of body mass of rats in each group表1各組大鼠體質(zhì)量變化情況（n=20，g，±s）

Tab.1 Changes of body mass of rats in each group表1各組大鼠體質(zhì)量變化情況（n=20，g，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F建模前190.33±1.73 191.14±2.02 189.69±1.46 190.72±1.47 190.38±1.78 191.34±2.41 2.117建模后278.08±2.63 205.21±5.29a 201.44±3.00a 211.13±6.19a 209.66±5.46a 203.87±2.72a 928.100＊＊給藥后303.92±2.49 193.88±2.86a 208.63±3.04a 213.69±4.29ab 227.15±2.94ab 229.40±3.21ab 295.100＊＊

Tab.2 Changes of Lennon scores in each group表2各組大鼠Lennon評分變化（n=20，分，±s）

Tab.2 Changes of Lennon scores in each group表2各組大鼠Lennon評分變化（n=20，分，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與低劑量組比較，d與中劑量組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F建模前0 0 0 0 0 0-建模后0 2.1±0.3a 2.0±0.4a 1.9±0.5a 2.1±0.4a 2.2±0.3a 57.410＊＊給藥后0 2.5±0.3a 1.7±0.3ab 1.6±0.3ab 1.1±0.2abcd 1.2±0.2abcd 117.100＊＊

2.2 各組胸腺組織病理變化HE染色結(jié)果顯示，對照組胸腺細(xì)胞排列整齊，無淋巴細(xì)胞壞死。模型組皮質(zhì)區(qū)淋巴細(xì)胞變性壞死，髓質(zhì)區(qū)胸腺小體消失，細(xì)胞數(shù)量減少；補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方低、中、高劑量組及西藥組大鼠胸腺皮質(zhì)區(qū)和髓質(zhì)區(qū)細(xì)胞數(shù)量明顯增多，并且補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方的劑量越高，細(xì)胞數(shù)量增多越明顯。見圖1。

Fig.1 Pathological changes of thymus tissues assessed by HE staining(×200)圖1 HE染色評估胸腺組織病理變化（×200）

2.3 胸腺Treg細(xì)胞特征性表面標(biāo)記物表達(dá)與對照組相比，模型組大鼠胸腺CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例下降（P＜0.05），CD4+CD25-Foxp3+和CD4+CD25+Foxp3-Treg細(xì)胞比例升高（P＜0.05）；與模型組相比，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組大鼠胸腺CD4+CD25+和CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞比例升高（P＜0.05），CD4+CD25-Foxp3+和CD4+CD25+Foxp3-Treg細(xì)胞比例下降（P＜0.05）。見表3。

2.4 各組大鼠血清AchR-Ab和胸腺Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子含量變化與對照組相比，模型組AchRAb、TNF-β、IL-4和IL-10水平明顯升高（P＜0.05）；與模型組相比，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組AchR-Ab、TNF-β、IL-4和IL-10水平明顯降低（P＜0.05），見表4。

2.5 各組大鼠HPTT軸相關(guān)指標(biāo)變化所有大鼠的T3、T4水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與對照組相比，模型組的T3R和NE水平下降（P＜0.05），TSH和TRH水平升高（P＜0.05）；與模型組相比，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組的T3R和NE水平升高（P＜0.05），TSH和TRH水 平 降 低（P＜0.05）。見表5。

Tab.3 Expression levels of characteristic surface markers of thymus Treg cells in each group of rats表3各組大鼠胸腺Treg細(xì)胞特征性表面標(biāo)志物表達(dá)（n=10，%，±s）

Tab.3 Expression levels of characteristic surface markers of thymus Treg cells in each group of rats表3各組大鼠胸腺Treg細(xì)胞特征性表面標(biāo)志物表達(dá)（n=10，%，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與低劑量組比較，d與中劑量組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F CD4+CD25+70.13±12.42 56.92±10.04a 61.82±11.78 67.99±14.52b 69.95±15.67bc 70.03±13.84bc 13.761＊＊CD4+CD25+Foxp3+75.58±12.64 49.21±6.02a 58.87±12.46a 63.77±13.40ab 71.24±12.78bcd 75.13±15.81bcd 6.857＊＊組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F CD4+Foxp3+98.61±4.69 95.48±3.59 95.91±4.38 96.42±3.25 97.16±4.08 95.27±3.05 1.032 CD4+CD25-Foxp3+27.19±9.63 45.12±4.11a 38.44±3.03a 30.18±4.19bc 29.78±3.46bc 28.09±2.72bc 19.461＊＊CD4+CD25+Foxp3-2.59±0.96 4.18±0.62a 3.52±0.73 3.25±0.69b 2.83±0.57b 2.79±0.80b 6.374＊＊

Tab.4 Comparison of serum levels of AchR-Ab and thymus Treg cell-related factors between the six groups of rats表4各組大鼠血清AchR-Ab和胸腺Treg細(xì)胞相關(guān)因子含量比較 （n=10，±s）

Tab.4 Comparison of serum levels of AchR-Ab and thymus Treg cell-related factors between the six groups of rats表4各組大鼠血清AchR-Ab和胸腺Treg細(xì)胞相關(guān)因子含量比較 （n=10，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與低劑量組比較，d與中劑量組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F AchR-Ab（pmol/L）0.23±0.05 0.45±0.04a 0.41±0.06a 0.38±0.05ab 0.26±0.08bcd 0.24±0.04bcd 30.516＊＊TNF-β（ng/L）58.26±6.69 89.18±9.59a 77.49±10.04ab 69.42±8.28abc 61.06±7.35bcd 59.56±6.57bcd 22.223＊＊IL-4（ng/L）42.13±9.73 68.83±15.83a 61.93±14.52a 58.24±12.34ab 49.39±11.53b 48.27±10.94b 6.143＊＊IL-10（ng/L）45.23±7.52 72.11±8.02a 68.37±9.46a 61.37±8.47ab 50.14±6.78bcd 48.63±7.41bcd 19.736＊＊

3 討論

HPTT軸調(diào)控胸腺自身免疫是MG發(fā)病的關(guān)鍵因素，絕大多數(shù)MG患者均伴有胸腺組織功能異常［10］。當(dāng)切除胸腺后，大鼠MG癥狀得以有效緩解和改善，提示MG的發(fā)生與胸腺異常密切相關(guān)［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，中、高劑量補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方對EAMG有良好的治療效果。綜合全方，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方發(fā)揮作用的可能機(jī)制為：其一，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方具有脾腎雙補(bǔ)的功效，MG以脾胃氣虛為本，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方使先天充養(yǎng)富足，后天生化有源，因而脾胃氣虛可得以有效緩解。其二，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方具有健脾化濕解毒，邪去正復(fù)等作用，用藥后氣血流暢，濕毒已去。其三，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方可以活血化瘀，通調(diào)氣血，增精益血，有利于肌力恢復(fù)。全方共奏使脾腎雙補(bǔ)，氣血通常，筋肉得養(yǎng)［12-13］。

本研究結(jié)果顯示，與對照組相比，建模后其他各組大鼠體質(zhì)量下降，Lennon評分升高，提示建模成功。給藥后，中、高劑量組和西藥組大鼠體質(zhì)量較模型組升高，Lennon評分下降，提示經(jīng)藥物治療后，從中劑量組開始治療已顯效。補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方低劑量組、中劑量組基本維持給藥前的肌無力癥狀或稍有好轉(zhuǎn)，但較給藥前癥狀變化不明顯。補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方高劑量組與西藥組Lennon評分明顯降低，肌無力癥狀均明顯好轉(zhuǎn)，提示高劑量補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方以及激素能夠明顯改善EAMG大鼠肌無力癥狀。HE染色結(jié)果顯示，使用補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方干預(yù)后，小鼠胸腺細(xì)胞數(shù)量增多，且隨著劑量的增加，皮質(zhì)區(qū)和髓質(zhì)區(qū)細(xì)胞數(shù)量增加更多，呈現(xiàn)劑量依賴性，提示補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方可改善胸腺組織病理損傷。

MG的病理基礎(chǔ)是AchR-Ab導(dǎo)致的神經(jīng)肌肉神經(jīng)突觸的相應(yīng)受體破壞，因此降低AchR-Ab水平有助于治療MG和減緩MG進(jìn)展［14］。本研究結(jié)果顯示，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組AchR-Ab水平明顯降低，提示中、高劑量補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方可減少AchR-Ab表達(dá)，進(jìn)而減少因AchR-Ab導(dǎo)致的受體破壞，恢復(fù)神經(jīng)肌肉功能。本研究顯示，與模型組相比，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組大鼠胸腺CD4+CD25+T、CD4+CD25+Foxp3+T細(xì) 胞 比 例 升 高，CD4+CD25-Foxp3+和CD4+CD25+Foxp3-比例下降。Foxp3是目前公認(rèn)的CD4+CD25+T細(xì)胞的特異性標(biāo)志，其基因水平調(diào)控CD4+CD25+T細(xì)胞的發(fā)育和成熟，F(xiàn)OXP3表達(dá)下調(diào)引發(fā)CD4+CD25+Treg細(xì)胞減少，機(jī)體免疫耐受被破壞，形成自身免疫損傷［15］。XU等［15］認(rèn)為Treg細(xì)胞比例和數(shù)量的減少可能是MG發(fā)病的主要原因。本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組及西藥組TNF-β、IL-4和IL-10水平明顯降低，提示高劑量補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方可能通過調(diào)節(jié)TNF-β、IL-4和IL-10等細(xì)胞因子，對Treg細(xì)胞表達(dá)比例進(jìn)行調(diào)控。

Tab.5 Effects of Bupi Qiangli compound on functional impairment index of HPTT axis表5補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方對HPTT軸功能損傷指標(biāo)的影響 （n=10，±s）

Tab.5 Effects of Bupi Qiangli compound on functional impairment index of HPTT axis表5補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方對HPTT軸功能損傷指標(biāo)的影響 （n=10，±s）

＊＊P＜0.01；a與對照組比較，b與模型組比較，c與低劑量組比較，d與中劑量組比較，P＜0.05。

組別對照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組西藥組F T3（μg/L）1.92±0.26 1.87±0.19 1.94±0.21 1.88±0.10 1.93±0.25 1.82±0.07 0.551 T4（μg/L）119.41±9.49 112.05±10.43 116.23±10.13 111.89±17.06 110.99±11.55 111.42±16.22 0.698 T3R（fmol/mg DNA）178.51±32.63 125.32±45.29a 131.40±39.96a 155.41±36.19ab 169.57±45.46bcd 173.99±42.72bcd 3.100＊NE（ng/g）793.19±122.96 453.59±102.86a 508.96±113.04a 553.27±104.39ab 687.22±122.34bcd 696.24±123.31bcd 12.774＊＊TSH（μg/L）11.39±1.66 29.94±3.38a 26.61±2.34a 21.65±1.18bc 18.92±1.23abcd 19.82±1.40abcd 102.272＊＊TRH（ng/L）154.61±31.61 289.82±51.59a 227.19±51.42ab 195.26±45.26b 161.86±44.37bc 159.23±35.75bc 14.465＊＊

本研究結(jié)果顯示，所有大鼠T3、T4水平無明顯差異，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方中、高劑量組T3R和NE水平較模型組明顯升高，TSH和TRH水平明顯降低。既往有研究顯示，HPTT軸能夠通過神經(jīng)遞質(zhì)及內(nèi)分泌激素受體來實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)控作用，從而影響所有的免疫功能［17］。下丘腦神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞產(chǎn)生TSH，隨血液進(jìn)入垂體前葉，促進(jìn)甲狀腺激素合成與釋放。TSH不僅能夠調(diào)節(jié)甲狀腺激素分泌，其在免疫系統(tǒng)中也具備突出的功能和意義，HPTT軸與免疫系統(tǒng)存在復(fù)雜而緊密的聯(lián)系，這其中TSH發(fā)揮了重要作用［18-20］。一般而言，TSH在T3和T4變化之前就發(fā)生改變，尤其亞臨床甲狀腺功能異常時僅有TSH水平的變化而不伴有明顯的T3和T4水平的改變，因此本研究中EAMG大鼠可能伴隨亞臨床甲減癥狀。既往研究表示，MG患者常伴有甲狀腺功能異常，可能是甲狀腺功能亢進(jìn)、甲狀腺功能低下或亞臨床甲狀腺功能減退，造成這種現(xiàn)象的原因可能是由于甲狀腺自身抗原的免疫交叉反應(yīng)［21］。有研究發(fā)現(xiàn)，MG患者T3R減少，使TRH合成降低，進(jìn)而影響垂體TSH合成［22］，說明MG患者的HPTT軸功能損傷后造成神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽功能紊亂。

綜上所述，補(bǔ)脾強(qiáng)力復(fù)方可能通過干預(yù)HPTT軸，進(jìn)而調(diào)節(jié)大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌和免疫功能，改善EAMG大鼠自身免疫平衡。