大鼠心肌缺血再灌注損傷模型改良置管法*

李 睿， 王祎昕， 紀(jì)樹(shù)亮， 劉坤東， 孫治中， 馮藝昕，章潔淳， 鄺棗園， 卿立金， 吳 偉△

（1廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣州 440100；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，廣州 440100；3廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣州 440100）

急性心肌梗死因其高致死率和致殘率的特點(diǎn)而成為心血管疾病的頭號(hào)殺手。隨著各地區(qū)各級(jí)醫(yī)院再血管化措施的不斷普及（包括溶栓、冠脈介入術(shù)及冠脈旁路移植術(shù)等），急性心肌梗死患者住院死亡率由最初約30%，下降至如今4.3%［1］。雖然再灌注手段對(duì)于該病療效顯著，但隨著心肌梗死患者的增加和心臟介入治療的普及，急診介入圍術(shù)期無(wú)復(fù)流現(xiàn)象、微循環(huán)障礙及心肌缺血再灌注損傷（myocardial ischemia/reperfusion injury，MIRI）等問(wèn)題日益突出，如何進(jìn)一步增加冠脈介入的獲益成為當(dāng)下研究熱點(diǎn)。MIRI可引發(fā)心肌缺血期間并不存在的損傷或使已有損傷加重，是減少急性心肌梗死再灌注的治療獲益的重要因素，然而其復(fù)雜的病理生理機(jī)制和潛在的治療靶點(diǎn)仍有待闡明和開(kāi)發(fā)。目前，MIRI 研究最常用的模型動(dòng)物為大鼠，然而，現(xiàn)有大鼠造模方法常存在氣管插管困難、氣管切開(kāi)損傷大、左前降支結(jié)扎力度難以把握或線結(jié)易松動(dòng)等問(wèn)題，難以達(dá)到穩(wěn)定的造模效果。本實(shí)驗(yàn)在現(xiàn)有大鼠MIRI 造模方法基礎(chǔ)上進(jìn)行改良，以期為MIRI 研究提供較穩(wěn)定可靠的模型制備方法。

材料和方法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

45 只 SPF 級(jí)雄性 SD 大鼠，6～8 周齡，體重 220～250 g，由南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供［SCXK（粵）2021-0041］。飼養(yǎng)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院SPF級(jí)屏障環(huán)境動(dòng)物房［SYXK（粵）2018-0092］，大鼠自由進(jìn)食，環(huán)境晝夜均衡，溫度23～26 ℃，濕度（50±5）%，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用遵循3R 原則。所有實(shí)驗(yàn)操作均獲得廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的審批（審批號(hào)：TCMF1-2021044）。

2 主要儀器和試劑

戊巴比妥鈉鹽（型號(hào)57330）、2，3，5-氯化三苯基四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TTC；貨號(hào)T8877）購(gòu)自Sigma；伊文思藍(lán)（Evans blue，EB；貨號(hào)E6135）購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司；多聚甲醛固定液（型號(hào)G1101-500ML）、HE 染液套裝（型號(hào)G1003）和TUNEL 試劑盒（型號(hào)G1501）均購(gòu)于賽維爾生物有限公司；乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）測(cè)定試劑盒（型號(hào)S03034）購(gòu)于深圳雷杜生命科技有限公司；肌酸激酶同工酶MB（creatine kinase isoenzyme MB，CK-MB）測(cè)定試劑盒（型號(hào)C060）購(gòu)于長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)有限公司；大鼠心肌鈣蛋白I（cardiac troponin I，cTnI）酶免分析試劑盒（貨號(hào)MM-0377R1）購(gòu)自江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司；鼠恒溫實(shí)驗(yàn)臺(tái)（型號(hào)JR-30）和信號(hào)采集與處理系統(tǒng)（型號(hào)BL-420I）均購(gòu)于成都泰盟科技有限公司；大鼠手術(shù)撐開(kāi)輔助牽引器（型號(hào)10 mm 彎邊）購(gòu)于創(chuàng)博環(huán)球生物科技有限公司；麻醉咽喉鏡（型號(hào)MAC0）購(gòu)于江蘇永樂(lè)醫(yī)療科技有限公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（型號(hào)D3024R）購(gòu)于大龍儀器有限公司；U 型槽升降滑輪（型號(hào)2.5寸）購(gòu)于安捷順鼎有限公司；全自動(dòng)生化分析儀（型號(hào)Chemray 240）購(gòu)于深圳雷杜生命科技有限公司；數(shù)字病理切片掃描儀（型號(hào)Pannoramic MIDI Ⅱ）購(gòu)于濟(jì)南丹吉爾電子有限公司。

3 主要方法

3.1 實(shí)驗(yàn)分組 45只SD 大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3 組：假手術(shù)（sham）組、墊線（即傳統(tǒng)模型，traditional model，TM）組和改良置管（即優(yōu)化模型，optimized model，OM）組，每組15 只（每組用于心肌梗死面積測(cè)定 3 只，心肌組織 HE 染色及血清 LDH、CK-MB 和cTnI 含量測(cè)定 6 只，心肌組織 TUNEL 染色 6 只）。大鼠均可自由進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后進(jìn)行造模，術(shù)前12 h內(nèi)禁食不禁水。

3.2 MIRI模型建立方法

3.2.1 墊線結(jié)扎法［2］（TM 組） （1）氣管插管：采用2%戊巴比妥鈉對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉（1.5 mL/kg）后將其胸前區(qū)備皮置于恒溫臺(tái)，四肢連接心電電極。待心電信號(hào)穩(wěn)定后，將恒溫臺(tái)立起，使用新生兒咽喉鏡壓舌抬腭，聯(lián)合頸外光源照射可見(jiàn)咽喉聲門(mén)帶隨呼吸開(kāi)合，待吸氣相聲門(mén)開(kāi)啟時(shí)迅速將16G 的氣管導(dǎo)管插入，成功后連接呼吸機(jī)輔助通氣。呼吸機(jī)參數(shù)設(shè)置：潮氣量10.0 mL、呼吸頻率80 min-1，吸呼比 1∶1。（2）開(kāi)胸：胸骨中點(diǎn)位置旁開(kāi)0.5 cm 處提起皮膚，橫行剪開(kāi)1 cm，鈍性分離皮下肌肉，使用眼科直鑷于第3 肋間隙胸骨旁開(kāi)0.5 cm 位置小心戳破肋間肌及胸膜，直上剪斷第3 肋骨并使用止血鉗擴(kuò)開(kāi)2～4 肋間隙切口，使用小動(dòng)物擴(kuò)胸器撐開(kāi)胸廓，暴露心臟。（3）冠脈左前降支結(jié)扎：用少量濕潤(rùn)棉絮別開(kāi)肺部，小心扯開(kāi)心包膜，在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳交界處直下2～4 mm 處，在向左側(cè)旁開(kāi)2 mm 的位置使用穿有5-0 縫合線的4×6 mm 圓針進(jìn)針，走向垂直于肺動(dòng)脈圓錐與左心耳交界延長(zhǎng)線并于肺動(dòng)脈圓錐下出針，寬度2～3 mm，深度約為2 mm，穿線后提起心肌隱約可見(jiàn)白色細(xì)條狀冠狀動(dòng)脈左前降支，結(jié)扎時(shí)于針線上方墊一直徑為1.0 mm 適當(dāng)長(zhǎng)度的棉線并打活結(jié)，見(jiàn)結(jié)扎以下部位心肌發(fā)白且心電圖逐漸顯示ST段上抬或出現(xiàn)心律失常則提示定位準(zhǔn)確。（4）再灌注：結(jié)扎完成后濕潤(rùn)紗布蓋好胸部創(chuàng)口，缺血30 min后松開(kāi)活結(jié)，術(shù)后無(wú)需抽吸所謂胸腔積氣即可逐層關(guān)胸，拔出氣管插管，將大鼠繼續(xù)置于恒溫臺(tái)上恢復(fù)蘇醒。（5）模型標(biāo)準(zhǔn)：以左室前壁心肌發(fā)白、心電圖ST段抬高0.1 mV 以上為缺血標(biāo)志；再灌注時(shí)左室前壁缺血心肌部分恢復(fù)紅潤(rùn)，心電圖ST 段下降50%以上，即再灌注損傷造模成功。

3.2.2 改良置管法［3］（OM 組） OM 組在 3.2.1 第（3）步穿過(guò)冠脈左前降支后取出針頭，將線兩端穿過(guò)一聚乙烯管（如采血針管），長(zhǎng)度約0.5 cm，繼而借助12×5 mm 圓針于進(jìn)針口處旁開(kāi)約0.5 cm 處垂直往上依次穿過(guò)肋間肌、胸大肌直至皮膚，棄針頭，上端縫線打死結(jié)，借助拉鉤、滑輪及數(shù)個(gè)充滿水的2 mL 離心管拉直縫線（其中滑輪距大鼠心臟垂直距離約15 cm，拉鉤線長(zhǎng)約8～10 cm 且與大鼠心臟平面約成60°角），可見(jiàn)心電圖ST 段立即抬高至R 波的1/2 以上，穩(wěn)定后創(chuàng)口覆蓋濕潤(rùn)鹽水紗塊。其余步驟同3.2.1。見(jiàn)圖1。

3.2.3 假手術(shù)法（sham 組） 假手術(shù)除在3.2.1 中第（3）步是只穿線不結(jié)扎，其余步驟與3.2.1 相同，因其執(zhí)行假手術(shù)，故心電圖ST段應(yīng)無(wú)明顯變化。

上述各組大鼠于再灌注90 min 末，經(jīng)相應(yīng)處理后采用腹主動(dòng)脈失血休克法處死并取材檢測(cè)。

3.3 監(jiān)測(cè)造模過(guò)程心電圖變化 通過(guò)觀察并記錄Ⅱ?qū)?lián)心電圖，監(jiān)測(cè)大鼠插管前后、結(jié)扎前后及再灌注時(shí)的心電圖表現(xiàn)，觀察并記錄大鼠心電圖有無(wú)心律失?，F(xiàn)象。

Figure 1. The optimized method for MIRI modeling in rats. A and B：endotracheal intubation with neonatal laryngoscope；C：cut the skin horizontally；D：after passing through the left anterior descending artery and tying a slip knot，the left myocardium can be seen white；E and F：the ligature is passed through a 0.5 cm long polyethylene tube；G and H：hook the ligature through the skin with the help of hooks and pulleys.圖1 大鼠MIRI模型改良置管法

3.4 大鼠心臟缺血/梗死面積觀察 再灌注90 min末麻醉大鼠，再次結(jié)扎冠脈左前降支后腹腔靜脈注射2 mL 2%EB，待周身藍(lán)染后迅速摘取心臟，清潔灌洗并冷凍后，使用心臟切片槽將結(jié)扎以下部位切割呈5片，每片厚度2 mm。將切片放置1%TTC溶液中37 ℃避光孵育約15～20 min后多聚甲醛固定過(guò)夜；數(shù)碼相機(jī)拍照后使用ImageJ 軟件分析。白色為梗死區(qū)域（infarction area，IA），非藍(lán)色區(qū)域?yàn)槿毖獏^(qū)（area at risk，AAR）。梗死面積（%）=IA/AAR；缺血面積（%）=AAR/左心室區(qū)（left ventricule，LV）。

3.5 心肌酶學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 再灌注末大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，靜止并分離血清后，采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清LDH 和CK-MB 活性，并按照說(shuō)明書(shū)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清cTnI含量。

3.6 心臟組織損傷病理染色及觀察 造模完成后取材并將組織于4%多聚甲醛固定24 h。依次入梯度乙醇、醇苯混合液、二甲苯，觀察至充分透明?？酒?，組織膜放在45 ℃的水中展開(kāi)，用多聚賴氨酸載玻片撈片，二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化，放入蘇木素染色，水洗，放入伊紅染色30 s，依次梯度乙醇脫水、二甲苯脫蠟至透明，后用中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察并拍片。

3.7 心臟組織細(xì)胞凋亡染色 預(yù)冷0.9%氯化鈉液清洗缺血區(qū)心肌組織，置于4%多聚甲醛固定8 h 后脫水包埋切片。按TUNEL 試劑盒方法進(jìn)行操作，最后采用DAPI 染料染核。熒光顯微鏡拍照并使用ImageJ軟件計(jì)算心肌組織細(xì)胞凋亡率。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 24.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料符合正態(tài)分布的以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述；對(duì)于多組資料符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，多重兩兩比較采用LSD 法（方差齊）或鄧尼特T3 法（方差不齊）檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。采用GraphPad Prism 8.0軟件進(jìn)行圖表制作。

結(jié) 果

1 改良置管法造模過(guò)程心電圖表現(xiàn)

OM 組大鼠心電圖ST 段可在數(shù)分鐘內(nèi)迅速顯著抬高，并持續(xù)至缺血30 min，偶發(fā)嚴(yán)重室性心動(dòng)過(guò)速或心室顫動(dòng)，造模存活12只，造模成功12只，存活率80%，模型成功率為80%。TM 組大鼠心臟結(jié)扎10 min 后，心電圖ST 段開(kāi)始逐漸抬高，并在缺血30 min內(nèi)持續(xù)抬高，較少出現(xiàn)室性心律失常，造模存活14只，造模成功9 只，存活率93%，造模成功率為60%。在各造模時(shí)點(diǎn)，OM 組心電圖ST 段抬高幅度均較TM組更顯著，且迅速達(dá)到峰值，見(jiàn)圖2。

Figure 2. Comparison of electrocardiograms of different modeling methods. A：after anesthesia；B：after endotracheal intubation；C：10 min after ligation；D：20 min after ligation；E：30 min after ligation；F：reperfusion for 90 min.圖2 不同造模方法的心電圖比較

2 改良置管法對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響

各組非藍(lán)區(qū)域比例無(wú)顯著差異，表明結(jié)扎定位穩(wěn)定且一致性良好；TM 組和OM 組大鼠心梗面積比例均顯著高于sham 組（P＜0.01），且OM 組心梗面積比例顯著高于TM組（P＜0.01），見(jiàn)圖3、4。

Figure 3. The optimized method（OM）increased myocardial infarction area in rats. The representative images of Evans blue/TTC staining in myocardial tissues（scale bar=2 mm）.圖3 大鼠心臟伊文思藍(lán)/TTC染色

Figure 4. Comparison of cardiac ischemia/infarct size of rats in each group. A：the ratio of area at risk（AAR）/left ventricule（LV）；B：the ratio of infarction area（IA）/AAR. Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs TM group.圖4 各組大鼠心臟缺血/梗死面積比較

3 改良置管法對(duì)大鼠血清LDH、CK-MB和cTnI的影響

TM 組和OM 組血清心肌酶學(xué)指標(biāo)水平（LDH、CK-MB、cTnI）均較假手術(shù)組升高（P＜0.01），且OM組上述心肌酶學(xué)指標(biāo)水平均顯著高于TM組（P＜0.05），見(jiàn)圖5。

Figure 5. The optimized method（OM）increased the levels of myocardial injury markers in rats. A：the level of serum lactate dehydrogenase（LDH）；B：the level of serum creatine kinase isoenzyme MB（CK-MB）；C：the level of serum cardiac troponin I（cTnI）. Mean±SD. n=6.**P＜0.01 vs sham group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs TM group.圖5 各組大鼠血清心肌酶水平比較

4 改良置管法對(duì)大鼠心臟組織損傷的影響

HE染色結(jié)果顯示，sham 組顯示心肌細(xì)胞纖維排列整齊、肌節(jié)清晰緊密，大小一致，形狀規(guī)則；TM 組可見(jiàn)部分心肌細(xì)胞紊亂、心肌纖維斷裂，間質(zhì)水腫和白細(xì)胞浸潤(rùn)；OM組上述病理?yè)p傷較TM組嚴(yán)重，大部分心肌細(xì)胞腫脹變形，肌絲斷裂，組織間隙水腫和白細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯，見(jiàn)圖6。

Figure 6. The optimized method（OM）increased the extent of myocardial tissue injury. The representative images of HE staining in cardiac tissues（scale bar=100 μm）.圖6 大鼠心肌組織HE染色

5 改良置管法對(duì)大鼠心臟組織細(xì)胞凋亡的影響

TM 組和OM 組心肌組織細(xì)胞凋亡率均顯著高于sham 組（P＜0.01），且 OM 組 平 均 細(xì) 胞 凋 亡 率（35.86%）顯著高 于 TM 組（26.48%；P＜0.01），見(jiàn)圖7。

Figure 7. The optimized method（OM）aggravated the apoptosis of myocardial tissue in rats. The representative images of TUNEL staining in heart tissues（scale bar=100 μm；blue showed the nuclei of total cells）and the calculation of apoptotic rate.Mean±SD. n=6.**P＜0.01 vs sham group；##P＜0.01 vs TM group.圖7 大鼠心肌組織TUNEL染色

討 論

MIRI疾病動(dòng)物模型在MIRI研究中至關(guān)重要，雖然使用大型哺乳動(dòng)物如小型豬、比格犬等進(jìn)行MIRI模型制作似乎更類似人類發(fā)病及其病理生理過(guò)程，但大鼠、小鼠等嚙齒類動(dòng)物不僅與人類基因高度同源，且價(jià)格相對(duì)低廉、易獲得，故成為MIRI 造模的首選動(dòng)物類別。目前，大鼠MIRI 造模方法可分為體內(nèi)模型和離體心臟模型（Langendorff 體外循環(huán)模型），由于體內(nèi)模型受到整體內(nèi)分泌、神經(jīng)、免疫等系統(tǒng)調(diào)節(jié)的影響而更貼近實(shí)際損傷情況，故多被采用。常規(guī)大鼠MIRI 造模過(guò)程包括：氣管切開(kāi)插管接小動(dòng)物呼吸機(jī)輔助通氣，切開(kāi)皮膚，剪斷3、4 肋骨開(kāi)胸，定位結(jié)扎部位，使用相應(yīng)針線鉤起左前降支結(jié)扎，一段時(shí)間后松開(kāi)結(jié)線以實(shí)現(xiàn)再灌注［2］。在此過(guò)程中主要難點(diǎn)有：機(jī)械通氣、開(kāi)胸創(chuàng)口、結(jié)扎定位和結(jié)扎線松緊程度。

1 機(jī)械通氣

常規(guī)采用氣管切開(kāi)插管進(jìn)行輔助通氣，這種做法創(chuàng)傷大，造模后易因氣管縫合困難而發(fā)生呼吸困難或嚴(yán)重感染。目前有方法選擇氣管內(nèi)插管，雖然其創(chuàng)傷較小，但順利進(jìn)行氣管插管仍有一定困難，盲插易導(dǎo)致大鼠氣管損傷、反復(fù)缺氧甚至氣胸窒息［4］。甚至有方法不需要進(jìn)行機(jī)械通氣，采用外擠心臟方式結(jié)扎，利用極短的開(kāi)胸及關(guān)胸的時(shí)間差進(jìn)行冠脈結(jié)扎，這對(duì)操作者的熟練程度要求相當(dāng)高，技術(shù)操作難度大［5］。本實(shí)驗(yàn)借助新生兒咽喉鏡，在咽喉鏡直視下聯(lián)合頸外光源照透，見(jiàn)聲門(mén)開(kāi)啟即迅速將氣管導(dǎo)管插入，此法方便、快捷、無(wú)創(chuàng)傷且一次成功，極大地減少了因氣管插管所造成的干擾［6-8］。

2 開(kāi)胸創(chuàng)口

開(kāi)胸操作的質(zhì)量可對(duì)研究結(jié)果造成直接影響［9］。傳統(tǒng)方法多采用縱向切開(kāi)方式，剪斷胸大肌、肋間肌并至少2 根肋骨以較大創(chuàng)口暴露心臟并極易損傷動(dòng)脈。本研究采用1.0 cm橫向切口并鈍性分離肌肉、肋間肌，只需剪斷第3 肋骨并借助小動(dòng)物開(kāi)胸器即可完整暴露心臟，縮小了手術(shù)創(chuàng)口，最大程度避免肋間動(dòng)脈損傷而造成出血并增加了關(guān)胸時(shí)組織縫合的緊密度。

3 冠脈左前降支定位

MIRI 模型組的心臟需要有顯著的梗死區(qū)域，同時(shí)也不能導(dǎo)致缺血區(qū)內(nèi)心肌完全死亡。因?yàn)槿绻Ｐ徒M心肌梗死面積比例非常小或非常大，那么任何干預(yù)措施的挽救范圍和實(shí)現(xiàn)心臟保護(hù)的可能性都微不足道［10］。在一定缺血再灌注時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)相對(duì)足夠心肌梗死區(qū)域的結(jié)扎策略對(duì)于心臟保護(hù)藥物的研究較為關(guān)鍵。有文獻(xiàn)報(bào)道冠狀動(dòng)脈常伴行靜脈，沿靜脈下往寬處結(jié)扎即可，但因冠狀動(dòng)脈走形變異性較大，此法常難以定位準(zhǔn)確。雖然大鼠冠狀動(dòng)脈常隱藏于心肌淺肌層下難以識(shí)別，但往往從肺動(dòng)脈圓錐和左心耳之間發(fā)出，故結(jié)扎部位常選擇在左心耳和肺動(dòng)脈圓錐間往下2～4 mm處［11-12］。本研究進(jìn)針后輕提起心肌可見(jiàn)白色細(xì)條線狀血管，若扎下第一個(gè)十字結(jié)可見(jiàn)其下供血的心肌發(fā)白，心電圖ST 段抬高，則表明冠脈左前降支結(jié)扎定位準(zhǔn)確。

4 結(jié)扎方式

常規(guī)MIRI 造模常因結(jié)扎打死結(jié)而再灌注時(shí)使用手術(shù)尖刀挑線難免傷及心肌組織造成大出血，或因拉扯結(jié)線切斷冠狀動(dòng)脈而造成永久梗死無(wú)法再通。而墊管或墊線結(jié)扎法則是為避免再灌注時(shí)因解開(kāi)結(jié)線損傷心肌而設(shè)，有報(bào)道顯示其成模率80%～90%左右［11，13-15］。但實(shí)際操作過(guò)程中需要長(zhǎng)期積累手感，常因結(jié)扎松緊程度難以精確把握，或活結(jié)沒(méi)扎緊，或扎有軟管、魚(yú)絲線、棉線等線結(jié)易隨心臟搏動(dòng)而出現(xiàn)松動(dòng)等情況，導(dǎo)致造模效果不確切，梗死區(qū)域難以統(tǒng)一或達(dá)到研究要求。

本方法參考 Kim 等［3］關(guān)于小鼠 MIRI 的造模方法并進(jìn)行調(diào)整，采用穿管法將線兩端穿過(guò)一長(zhǎng)約0.5 cm 的聚乙烯管并將線兩端經(jīng)過(guò)胸壁肌肉穿出皮外，采用滑輪、拉鉤吊起使軟管上端頂住胸壁而下端壓向心臟造成冠脈血流中斷，因?yàn)橛谐掷m(xù)的外部拉力，在心臟缺血過(guò)程中不易因線結(jié)松動(dòng)而造成結(jié)扎效果不確切。本方法相較于熟練的墊線結(jié)扎法，心電圖ST段短時(shí)間內(nèi)即可抬高至峰值并保持不回落且心梗面積范圍更大，可見(jiàn)其缺血效果確切；在心肌損傷效果上，本方法心肌酶學(xué)指標(biāo)水平較TM 組更高，且心肌組織損傷更明顯，心肌細(xì)胞凋亡率達(dá)到35.86%，顯著高于TM 組的26.48%，表明采用本方法進(jìn)行大鼠MIRI 造?？色@得更充分可靠的缺血再灌注損傷效果。

然而，本方法仍有其難點(diǎn)或不足之處：（1）聚乙烯管的穿出胸壁的位置需要調(diào)整好以確保牽拉時(shí)軟管下端能垂直壓向心臟，從而直接壓迫冠脈造成缺血；（2）牽拉的強(qiáng)度不能太大，一般為5 個(gè)裝滿水的2 mL 離心管的重力，強(qiáng)度太大易誘發(fā)室性心律失常；（3）若觀察牽拉后未出現(xiàn)ST 段抬高，若冠脈左前降支定位無(wú)誤，則可調(diào)整軟管下端位置使其垂直壓向心肌，否則應(yīng)重新定位；（4）MIRI 時(shí)由心臟交感神經(jīng)激活觸發(fā)的室性心律失常與心肌梗死程度有關(guān)［16-17］，本方法的致死性室性心律失常的發(fā)生率稍高，考慮可能與其相對(duì)嚴(yán)重的心肌梗死和組織損傷有關(guān)。如借助其他儀器如光纖氧測(cè)量系統(tǒng)檢測(cè)局部心肌氧含量變化，則有助于模型缺血程度的監(jiān)測(cè)和定量化［18］。

總之，采用改良置管法進(jìn)行MIRI 造模采提高了技術(shù)操作的簡(jiǎn)易性，減少了心臟外組織損傷及相關(guān)干擾因素，提高了模型的穩(wěn)定性和可靠性，值得在MIRI模型中應(yīng)用推廣。