茺蔚子中木脂素類化學成分及肝細胞保護作用研究

劉娟汝，彭 成，何育霖，彭 芳，蒙春旺*，熊 亮*

1成都中醫(yī)藥大學藥學院 西南特色中藥資源國家重點實驗室；2成都中醫(yī)藥大學西南特色藥材創(chuàng)新藥物成分研究所，成都 611137

茺蔚子(Leonuri Fructus)來源于唇形科植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)的干燥成熟果實，功善活血調(diào)經(jīng)、清肝明目[1]，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味辛、微溫。主明目益精，除水氣”，藥用歷史悠久。益母草和茺蔚子是同一植物不同入藥部位的兩味中藥，傳統(tǒng)功效亦有異同，《本草綱目》對兩味中藥的功能主治有所區(qū)分：“益母草行血養(yǎng)血……誠為血家之圣藥也。茺蔚子治婦女經(jīng)脈不調(diào)，胎產(chǎn)，一切血氣諸病妙也。其根莖花葉，并皆入藥，可同用。若治手、足厥陰血分風熱，清瀉肝熱，明目益精，調(diào)女人經(jīng)脈，則單用茺蔚子為良。若治腫毒瘡瘍，消水行血，婦人胎產(chǎn)諸病，則宜并用為良……”[2]。由此可知，益母草及茺蔚子均有活血化瘀之功，但前者長于活血化瘀，后者長于清肝明目。然而，目前對茺蔚子研究的廣度及深度遠不及益母草，化學研究發(fā)現(xiàn)，益母草中已分離鑒定300余個化學成分，且有較多文獻闡釋了其在舒張血管、抗血小板聚集、調(diào)節(jié)子宮平滑肌等方面的藥理作用和作用機制[3-5]，而茺蔚子中報道的化合物不足70個，主要成分類型為三萜、環(huán)肽、黃酮、甾醇、苯丙素、木脂素及生物堿等[6,7]。現(xiàn)代藥理研究表明，茺蔚子具有收縮子宮[8]、肝細胞保護[9]、抑制酪氨酸酶和乙酰膽堿酯酶活性[10]、抗癌[11]、抗炎[12]、神經(jīng)保護[13]等作用，然而，大多藥理研究僅停留在提取物的藥效層面，單體成分的藥效及機制研究較少。課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，茺蔚子中的四氫呋喃木脂素類化合物具有顯著的肝細胞保護活性[9]，并通過熒光染色、Western blot等手段探索了可能的作用機制。因此，為進一步研究茺蔚子中具有肝保護作用的活性成分，本研究運用多種色譜手段和波譜技術(shù)從茺蔚子正丁醇部位又分離鑒定8個木脂素類化合物，進而通過MTT、Hoechst 33342熒光染色和Western blot技術(shù)，表征化合物的肝細胞損傷保護作用及作用機制。

1 材料與方法

1.1 儀器

Burker-AVIIIHD-600型核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；Synapt G2HDMS型高分辨質(zhì)譜儀(美國Waters公司)；Agilent 1220型半制備型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；Ultimate XB-C18色譜柱(250 mm × 10 mm，5 μm；上海月旭科技股份有限公司)；DMI3000B熒光顯微鏡(德國Leica公司)；Multiskan MK3酶標儀(美國Thermo Fisher Scientific公司)；Tanon 5200顯影儀(上海天能科技有限公司)。D101大孔吸附樹脂(安徽三星樹脂科技有限公司)；柱層析硅膠(青島海洋硅膠干燥劑廠)；GF254硅膠制備薄層(煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司)；HW-40F(日本TOSOH公司)。

1.2 藥材與試劑

茺蔚子藥材于2016年9月購自四川省成都市荷花池藥材市場，由成都中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室高繼海副教授鑒定為益母草LeonurusjaponicusHoutt.的干燥成熟果實，標本(SCWZ-0917)現(xiàn)存于成都中醫(yī)藥大學西南特色藥材創(chuàng)新藥物成分研究所。HL-7702人正常肝細胞(美國博士德生物科技有限公司，批號：CX0157)；Gibco DMEM(美國Thermo Fisher Scientific公司，批號：8121052)；胰蛋白酶(Solarbio公司，批號：9100041)；新生牛血清(浙江天杭生物科技股份有限公司，批號：20100201)；磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS，pH=7.8)、辣根酶標記山羊抗體IgG(H+L)(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)；蛋白定量測試盒(南京建成生物工程研究所)；Anti-Bcl-2抗體、Anti-Bax抗體(英國Abcam公司)；Anti-β-actin(美國Gene Tex公司)；Hoechst 33342染色液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司)；Omni-ECLTM超靈敏化學發(fā)光檢測試劑盒(上海雅酶生物科技有限公司)。甲醇、乙醇等分析純試劑均購于成都科龍化工試劑廠；色譜甲醇(美國Sigma公司)；氘代甲醇(CD3OD，美國劍橋CIL(同位素標準品)公司)；對乙酰氨基酚(APAP，成都克洛瑪生物科技有限公司，批號：CHB210112)；噻唑藍(MTT，北京金泰宏達生物科技有限公司，批號：EZ6789A155)。

1.3 提取與分離

稱取60 kg茺蔚子藥材，加入8倍量體積的70%乙醇，回流提取3次，每次2 h。合并提取液，減壓濃縮，得乙醇浸膏(3.5 kg)。將浸膏分散于熱水中，依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到茺蔚子乙酸乙酯部位(0.9 kg)和正丁醇部位(1.8 kg)。取正丁醇部位，采用D-101大孔吸附樹脂柱進行分離純化，依次用10%、30%、50%、70%、95%乙醇溶液進行梯度洗脫，回收溶劑后得到5個洗脫部分(F1～F5)。

采用含1% NaOH的硅膠填料對F2進行柱色譜分離，用二氯甲烷-甲醇(50∶1→0∶1)溶液進行梯度洗脫，洗脫液經(jīng)薄層色譜檢測，合并相似流分，回收溶劑得到17個組分(F2-1～F2-17)。F2-14經(jīng)陽離子交換樹脂柱色譜(純水、80%乙醇、80%氨水乙醇)進行梯度洗脫，取80%氨水乙醇洗脫部位，再采用HW-40F凝膠柱色譜(90%甲醇-水)進行分離，得到4個部分(F2-14-1～F2-14-4)。F2-14-3再經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇-水(50∶1∶0→3∶2∶0.25)進行梯度洗脫，得到6個部分(F2-14-3A～F2-14-3F)。其中，F(xiàn)2-14-3F經(jīng)反相半制備液相色譜(28%甲醇-水)分離，得到化合物2(2.6 mg，tR= 75 min)和化合物4(2.8 mg，tR= 68 min)。F2-15通過反相中壓液相色譜分離，以甲醇-水(5%→100%)溶液進行梯度洗脫，得到17個部分(F2-15-1～F2-15-17)。F2-15-9經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇-水(50∶1∶0→3∶2∶0.25)進行梯度洗脫，再經(jīng)反相半制備液相色譜(38%甲醇-水)分離，得到化合物1(6.0 mg，tR= 62 min)。F2-15-14經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇-水(50∶1∶0→3∶2∶0.25)進行梯度洗脫，再經(jīng)反相半制備液相色譜(35%甲醇-水)分離，得到化合物3(2.0 mg，tR= 46 min)。

采用硅膠柱色譜對F3進行分離，用二氯甲烷-甲醇(100∶1→0∶1)進行梯度洗脫，共得到18個洗脫部分(F3-1～F3-18)。取F3-12經(jīng)反相C18減壓色譜柱分離，以甲醇-水(10%→100%)進行梯度洗脫，得到6個部分(F3-12-1～F3-12-6)。其中，F(xiàn)3-12-1經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇(50∶1→0∶1)進行梯度洗脫，得到10個部分(F3-12-1A～F3-12-1J)。F3-12-1G經(jīng)反相半制備液相色譜(42%甲醇-水)制備得到化合物6(0.4 mg，tR= 40 min)。F3-12-1J經(jīng)反相半制備液相色譜(35%甲醇-水)進行制備，得到化合物5(3.4 mg，tR= 70 min)。取F3-17經(jīng)反相中壓色譜分離，以甲醇-水梯度洗脫(10%→100%)，得到12個部分(F3-17-1～F3-17-12)。F3-17-11經(jīng)硅膠柱色譜分離，以二氯甲烷-甲醇溶液(50∶1→0∶1)進行梯度洗脫，再經(jīng)半制備液相色譜(36%甲醇-水)洗脫，分別得到化合物7(0.9 mg，tR= 17 min)和8(2.0 mg，tR= 33 min)。

1.4 肝細胞保護活性篩選及作用機制研究

1.4.1 肝細胞保護活性篩選

采用MTT法檢測化合物1～8對APAP誘導的人正常肝細胞HL-7702損傷的保護作用。HL-7702細胞用含1%青霉素-鏈霉素和10%滅活新生牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。取對數(shù)生長期的細胞株懸液，每孔100 μL接種至96孔板(約3×103個細胞/孔)，置于37 ℃、5%CO2、95%空氣培養(yǎng)箱中培育。待細胞貼壁后，分為空白組、模型組和給藥組，每個組設3個復孔?？瞻捉M為含1%新生牛血清的DMEM；模型組采用30 mmol/L APAP造模4 h；給藥組經(jīng)30 mmol/L APAP誘導損傷4 h后，分別加入濃度為50、25、12.5、6.25、3.13、1.5 μmol/L的待測化合物。繼續(xù)孵育24 h后，每孔加入5 mg/mL的MTT 20 μL，繼續(xù)孵育4 h后移除上清液，向每孔加入DMSO 180 μL，震蕩混勻，酶標儀測定各組在490 nm的吸光度值(OD)。

細胞保護率=(OD給藥-OD模型)/(OD空白-OD模型)×100%，并由此得出EC50值(EC50是細胞保護率為50%時的化合物濃度)。

1.4.2 凋亡實驗

取對數(shù)生長期的HL-7702細胞株懸液，每孔2 mL接種至6孔板(約3×103個細胞/孔)，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，分組給藥，空白組和模型組同“1.4.1”；給藥組經(jīng)30 mmol/L APAP造模4 h后，移去上清液，加入濃度為20、10、5、2 μmol/L的化合物3。繼續(xù)孵育24 h后棄去上清液，PBS清洗2次，再加入Hoechst 33342染色液(用PBS稀釋1000倍)50 μL/孔，避光染色15 min。棄去染色液，PBS清洗3次，于倒置顯微鏡下觀察并拍攝細胞和熒光細胞核圖片。

1.4.3 Western blot檢測對凋亡關(guān)鍵蛋白表達的影響

取“1.4.2”項下細胞，棄去上清液，用PBS清洗3次，收集細胞，加入細胞裂解液于冰上裂解30 min，用細胞刮刮下各孔內(nèi)細胞，粉碎細胞2 min，于4 ℃離心機12 000 r/min離心15 min，取少量上清液，用考馬斯亮藍法測定細胞蛋白濃度。剩余上清液經(jīng)變性處理，用10% SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠、5%濃縮膠分離蛋白，轉(zhuǎn)膜，再用含5%脫脂奶粉的TBST溶液封閉2 h。一抗(1∶1 000)4 ℃孵育過夜，TBST洗3次。二抗(1∶5 000)37 ℃孵育1 h，TBST清洗3次，顯影拍照，并對蛋白條帶進行灰度分析。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物5白色無定形粉末；ESI-MS：m/z383.1[M + Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.74(1H，d，J= 7.8 Hz，H-5′)，6.68(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2′)，6.66(1H，s，H-2)，6.62(1H，dd，J= 7.8，1.8 Hz，H-6′)，6.18(1H，s，H-5)，3.81(1H，overlapped，H-7′)，3.81(3H，s，3-OCH3)，3.78(3H，s，3′-OCH3)，3.71(1H，dd，J= 11.4，4.8 Hz，H-9′a)，3.66(2H，m，H-9)，3.40(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-9′b)，2.78(2H，d，J= 7.8 Hz，H-7)，2.00(1H，m，H-8)，1.76(1H，m，H-8′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：129.0(C-1)，112.4(C-2)，147.2(C-3)，145.9(C-4)，117.3(C-5)，134.2(C-6)，33.6(C-7)，40.0(C-8)，66.0(C-9)，138.6(C-1′)，113.8(C-2′)，149.0(C-3′)，145.2(C-4′)，116.0(C-5′)，123.2(C-6′)，48.1(C-7′)，48.0(C-8′)，62.2(C-9′)，56.4(3-OCH3)，56.3(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[18]報道一致，故鑒定化合物為異落葉松脂素。

化合物6白色無定形粉末；ESI-MS：m/z561.2[M + Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.68(1H，s，H-2′′)，6.62(1H，s，H-5′′)，6.62(1H，d，J= 1.8 Hz，H-6′)，6.59(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，6.57(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2)，6.42(1H，dd，J= 8.4，1.8 Hz，H-6)，6.37(1H，d，J= 1.8 Hz，H-2′)，5.46(1H，d，J= 1.8 Hz，H-7)，4.04(1H，d，J= 9.0 Hz，H-7′)，3.86(3H，s，3′′-OCH3)，3.83(1H，dd，J= 10.8，4.2 Hz，H-9a)，3.72(3H，s，3-OCH3)，3.70(1H，dd，J= 11.4，3.6 Hz，H-9′a)，3.66(2H，m，H-9′′)，3.51(1H，dd，J= 11.4，3.6 Hz，H-9′b)，3.46(1H，dd，J= 10.8，9.0 Hz，H-9b)，3.46(3H，s，3′-OCH3)，2.80(1H，dd，J= 15.6，4.8 Hz，H-7′′a)，2.74(1H，dd，J= 15.6，12.0 Hz，H-7′′b)，2.66(1H，m，H-8)，1.89(1H，m，H-8′′)，1.71(1H，m，H-8′)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：134.9(C-1)，110.2(C-2)，148.8(C-3)，146.9(C-4)，115.7(C-5)，118.9(C-6)，87.5(C-7)，54.2(C-8)，63.3(C-9)，138.1(C-1′)，112.7(C-2′)，149.1(C-3′)，147.9(C-4′)，128.3(C-5′)，122.9(C-6′)，45.5(C-7′)，49.6(C-8′)，61.4(C-9′)，131.8(C-1′′)，113.6(C-2′′)，145.0(C-3′′)，145.8(C-4′′)，115.6(C-5′′)，130.5(C-6′′)，34.4(C-7′′)，39.6(C-8′′)，65.8(C-9′′)，56.3(3-OCH3)，56.0(3′-OCH3)，56.6(3′′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[19]報道一致，故鑒定化合物為phyllanglaucin B。

化合物7白色無定形粉末；ESI-MS：m/z577.2[M + Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.99(1H，s，H-6′)，6.96(1H，s，H-2)，6.95(1H，s，H-2′)，6.87(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，5.63(1H，d，J= 6.0 Hz，H-7)，4.57(1H，d，J= 6.0 Hz，H-7′)，4.35(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′′)，4.22(1H，dd，J= 9.6，5.4 Hz，H-9a)，3.89(3H，s，3-OCH3)，3.86(1H，m，H-8′)，3.83(3H，s，3′-OCH3)，3.67(2H，m，H-8，9b)，3.52(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-9′a)，3.39(1H，dd，J= 11.4，6.6 Hz，H-9′b)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)，δ：134.6(C-1)，110.7(C-2)，149.0(C-3)，148.8(C-4)，116.9(C-5)，119.7(C-6)，89.1(C-7)，53.2(C-8)，72.3(C-9)，129.6(C-1′)，112.7(C-2′)，145.3(C-3′)，147.5(C-4′)，137.0(C-5′)，116.1(C-6′)，75.2(C-7′)，77.6(C-8′)，62.3(C-9′)，104.6(C-1′′)，75.5(C-2′′)，78.2(C-3′′)，71.6(C-4′′)，78.1(C-5′′)，62.8(C-6′′)，56.4(3-OCH3)，56.7(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道一致，故鑒定化合物為(-)-7R,8S-7′,8′-二羥基-二氫脫氫松柏醇-9-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物8白色無定形粉末；ESI-MS：m/z577.2[M + Na]+；1H NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.00(1H，s，H-6′)，6.98(1H，s，H-2)，6.95(1H，s，H-2′)，6.85(1H，d，J= 8.4 Hz，H-6)，6.76(1H，d，J= 8.4 Hz，H-5)，5.62(1H，d，J= 6.6 Hz，H-7)，4.57(1H，d，J= 6.6 Hz，H-7′)，4.35(1H，d，J= 7.8 Hz，H-1′′)，4.13(1H，t，J= 9.0 Hz，H-9a)，3.86(1H，m，H-8′)，3.87(3H，s，3-OCH3)，3.83(3H，s，3′-OCH3)，3.68(2H，m，H-8，9b)，3.51(1H，dd，J= 11.4，4.2 Hz，H-9′a)，3.39(1H，dd，J= 11.4，6.0 Hz，H-9′b)；13C NMR(150 MHz，CD3OD)δ：134.5(C-1)，110.8(C-2)，149.0(C-3)，148.8(C-4)，117.0(C-5)，119.7(C-6)，89.3(C-7)，52.9(C-8)，72.3(C-9)，129.6(C-1′)，112.6(C-2′)，145.3(C-3′)，147.5(C-4′)，137.0(C-5′)，116.1(C-6′)，75.2(C-7′)，77.6(C-8′)，64.3(C-9′)，104.2(C-1′′)，75.4(C-2′′)，78.2(C-3′′)，71.6(C-4′′)，78.1(C-5′′)，62.8(C-6′′)，56.5(3-OCH3)，56.7(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[20]報道一致，故鑒定化合物為(+)-7S,8R-7′,8′-二羥基-二氫脫氫松柏醇-9-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物1～8的化學結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 化合物1～8的化學結(jié)構(gòu)

2.2 肝細胞保護活性篩選及作用機制研究

2.2.1 肝細胞保護活性篩選

采用MTT法篩選化合物1～8的肝細胞保護活性，模型組用APAP誘導HL-7702肝細胞損傷。與空白對照組相比，模型組細胞存活率明顯下降(P<0.01)?；衔?和3可顯著增加APAP誘導受損肝細胞HL-7702的存活率，EC50分別是10.23 ± 2.45 μmol/L和5.20 ± 1.28 μmol/L。

2.2.2 Hoechst 33342熒光染色檢測化合物3抑制HL-7702細胞凋亡的作用

取活性顯著的化合物3，觀察其抑制HL-7702細胞凋亡的作用。Hoechst 33342熒光染色結(jié)果顯示，空白組細胞呈現(xiàn)微弱熒光；模型組細胞呈亮藍色熒光，細胞核皺縮、呈現(xiàn)致密濃染現(xiàn)象；2～20 μmol/L化合物3給藥后，細胞熒光強度減弱，且隨著給藥濃度增加，凋亡小體逐漸減少，細胞逐漸恢復正常形態(tài)，結(jié)果見圖2。

圖2 化合物3對APAP誘導的HL-7702細胞凋亡的影響(×10)

2.2.3 Western blot檢測化合物3對Bcl-2和Bax蛋白的表達水平

取活性顯著的化合物3，利用Western blot技術(shù)檢測其對APAP誘導損傷的HL-7702細胞內(nèi)Bcl-2和Bax蛋白表達的影響。由圖3可知，與空白組相比，模型組Bcl-2蛋白表達減少，Bax蛋白表達增加，Bcl-2/Bax比值顯著降低(P<0.01)。與模型組相比，5～20 μmol/L的化合物3均可上調(diào)Bcl-2蛋白表達，下調(diào)Bax蛋白表達，顯著升高Bcl-2/Bax比值，且具有一定的劑量依賴性。

圖3 化合物3對Bcl-2和Bax蛋白表達的影響

3 討論與結(jié)論

本研究從茺蔚子的正丁醇部位分離鑒定了8個木脂素類化合物，且化合物1～8均為首次從茺蔚子中分離得到。目前從茺蔚子中分離得到的化合物以三萜為主，而課題組研究至今，已從茺蔚子中分離得到23個木脂素類成分[7,9]。文獻研究發(fā)現(xiàn)[3,6]，從益母草和茺蔚子中分離得到的單體化合物均以萜類成分為主，但益母草中鮮少報道木脂素類成分，因而推測木脂素類成分是茺蔚子與益母草的差異性物質(zhì)。

對乙酰氨基酚也稱撲熱息痛，為苯胺類解熱鎮(zhèn)痛藥，過量服用易引起肝損傷甚至肝衰竭，主要通過引起肝細胞內(nèi)線粒體功能障礙和細胞凋亡造成嚴重的肝毒性[21]。因此，APAP常被用作藥物性肝損傷的造模藥[22-24]。本實驗采用APAP建立體外肝損傷模型，對分離得到的化合物進行肝細胞保護活性篩選，結(jié)果化合物1和3可顯著抑制APAP誘導的肝細胞損傷，EC50分別是10.23 ± 2.45 μmol/L和5.20 ± 1.28 μmol/L。同時，利用熒光染色實驗觀察到化合物3可抑制HL-7702細胞凋亡。

細胞凋亡的內(nèi)在途徑受B細胞淋巴瘤(Bcl-2)家族蛋白調(diào)節(jié)，Bcl-2家族蛋白形成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡，通過影響線粒體外膜的通透性來調(diào)節(jié)細胞凋亡，其中Bcl-2和Bax是一對調(diào)控細胞凋亡的關(guān)鍵蛋白，Bcl-2為抗凋亡蛋白，可增強肝細胞對大多數(shù)DNA損傷因子的抵抗性，Bax為促凋亡蛋白，可誘導線粒體膜通透性增強并釋放細胞色素c，引起細胞凋亡[23,25-27]，而Bcl-2與Bax蛋白表達量的比值反映出細胞受凋亡刺激后的生存能力[28]。為進一步探討化合物3抑制細胞凋亡的機制，本研究采用Western blot技術(shù)檢測其對Bcl-2和Bax蛋白的表達水平，結(jié)果表明化合物3可上調(diào)Bcl-2蛋白表達，下調(diào)Bax蛋白表達，并升高Bcl-2/Bax比值，提示化合物3可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax蛋白表達量發(fā)揮抗凋亡作用，從而起到肝細胞保護效果。

本研究對茺蔚子中具有肝細胞保護活性的藥效物質(zhì)基礎及作用機制進行了探索，為闡明茺蔚子的傳統(tǒng)功效提供依據(jù)，有利于后續(xù)對藥材資源的合理開發(fā)和利用。迄今為止，課題組已從茺蔚子中分離得到6個具有肝細胞保護活性的木脂素類成分，包括fruleoligide A、fruleoligide B、lariciresinol-4-O-β-D-glucoside、lariciresinol-4′-O-β-D-glucoside、(+)-異落葉松脂醇-9′-O-β-D-葡萄糖苷、馬先蒿木脂素[9]?！侗静菥V目》認為茺蔚子善于清肝明目，但目前對于其清肝明目的物質(zhì)基礎和作用機制的研究較少，通過課題組的研究可以發(fā)現(xiàn)茺蔚子的木脂素類成分具有較好的肝細胞保護作用，可能是茺蔚子清肝明目的活性物質(zhì)基礎。