血清Hsp90α、AFP、Gpc3在原發(fā)性肝癌早期診斷中的臨床應(yīng)用*

彭美蓉 伍 麗 薛芳芳 劉恒辰

荊門市第一人民醫(yī)院檢驗科 (湖北 荊門， 448000)

多數(shù)原發(fā)性肝癌(PHC)患者在初次就診時已為中晚期，錯失了最佳治療時機，患者預(yù)后往往較差，因此對進行早期診斷十分關(guān)鍵[1]。臨床主要依據(jù)肝臟病理活檢及影像學檢查對PHC進行診斷，不適合臨床普查，在PHC早期篩查及診斷中具有一定困難。因此腫瘤標志物的檢測為PHC診斷提供新思路。當前已有研究提出甲胎蛋白(AFP)為診斷PHC首選標志物，但其靈敏度不甚理想[2]。熱休克蛋白90α(Hsp90α)與腫瘤相伴，為機體在理化因素刺激后高效表達的應(yīng)激蛋白，是抗癌治療的新靶點，在PHC檢測中具有較高的敏感度[3]。近年來，磷脂酰肌醇聚糖(Gpc3)作為新型腫瘤標志物已逐漸應(yīng)用在肝癌早期診斷中[4，5]。但當前少有研究分析Hsp90α、AFP及Gpc3在PHC患者中的表達水平及其與PHC發(fā)生的相關(guān)性，本研究擬探討Hsp90α、AFP及Gpc3與PHC發(fā)生相關(guān)性及在療效評估中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2020年12月在我院確診為PHC的患者193例，為PHC組，選取180例慢性乙型肝炎(CHB)患者為CHB組，另選取198例同期在我院進行體檢無肝臟疾病的健康人群為對照組。其中PHC組男102例，女91例；年齡32～75歲，平均53.56±5.47歲。CHB組男95例，女85例；年齡33～76歲，平均53.59±5.44歲。對照組男105例，女93例；年齡33～75歲，平均53.54±5.19歲，3組人群一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。所有患者均簽署我院倫理委員會出具的知情同意書。

1.2 納入及排除標準 納入標準：①自愿參與本項研究；②肝癌組患者均未接受肝臟外科切除、射頻消融及肝動脈化療栓塞治療；③精神無異常，可正常溝通者。

排除標準：①近期參與其他藥物試驗者；②合并嚴重免疫功能異常者。

1.3 治療方法 根據(jù)自愿原則，在我院進行治療的肝癌患者按照以下方式進行治療：術(shù)前對患者進行詳細檢查，在掌握患者適應(yīng)證后給予TACE治療，患者取平臥位，對局部皮膚進行常規(guī)消毒、鋪巾，將股動脈穿刺點設(shè)為中心，采用Seldinger技術(shù)進行穿刺治療，將導(dǎo)管鞘及導(dǎo)絲插入穿刺點，并將導(dǎo)管經(jīng)股動脈插入肝臟固有動脈，在手術(shù)中選擇肝動脈造影術(shù)，掌握腫瘤血管及供血動脈的分布情況，選擇插管至肝臟左側(cè)或右側(cè)動脈所屬分支的腫瘤供血動脈中。栓塞藥物：碘化油10～20 ml，順鉑60～100 mg，阿奇霉素60～80 mg，5-氟尿嘧啶750～1 000 mg，根據(jù)患者供血動脈直徑大小、腫瘤直徑、體質(zhì)量進行配比，充分混勻后配制為乳狀液待用。將準備好的栓塞藥物緩慢推注進供血動脈中，采用明膠海綿、彈簧栓子、碘化油進行栓塞，觀察患者腫瘤病灶沉積變化情況，間隔4～6周重復(fù)給予TACE治療1次。

1.4 觀察指標 ①抽取受試者清晨空腹血，并注入含EDTA-K2抗凝采血管中，給予離心10 min靜置，依據(jù)Hsp90α定量檢測說明書，采用ELISA法檢測Hsp90α含量。依據(jù)說明書，采用人Gpc3 ELISA試劑盒檢測Gpc3水平。采用電化學發(fā)光法檢測各組人群AFP水平。②比較3組人群血清Hsp90α、AFP及Gpc3檢測水平，陽性值判定標準：Hsp90α>20 ng/L，AFP>1.2 ng/ml，Gpc3>200 ng/L。③對PHC患者進行跟蹤隨訪，記錄PHC組中在我院治療的127例患者情況，并記錄治療患者血清Hsp90α、AFP及Gpc3水平治療前后的變化情況。④分析Hsp90α、AFP及Gpc3水平與PHC發(fā)生相關(guān)性。

2 結(jié)果

2.1 3組人群血清Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平 PHC組及CHB組患者血清Hsp90α、AFP及Gpc3水平均明顯高于對照組人群，且PHC組患者以上指標也顯著高于CHB組人群(P<0.05)，見表1。

表1 3組人群血清Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平

2.2 3組人群Hsp90α、AFP及Gpc3檢測陽性率 PHC組及CHB組患者Hsp90α、AFP及Gpc3檢測陽性率均明顯高于對照組人群，且PHC組患者以上指標也顯著高于CHB組患者(P<0.05)，見表2。

表2 3組人群Hsp90α、AFP及Gpc3檢測陽性率 [例(%)]

2.3 相關(guān)性分析 Hsp90α、AFP及Gpc3與PHC呈正相關(guān)(r=0.989，r=0.981，r=0.766,P<0.05)，見圖1。

2.4 Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平在PHC中的診斷價值 Hsp90α、AFP及Gpc3在早期PHC中有一定診斷價值，聯(lián)合診斷較單項指標檢測具有更高的診斷效能，見表3、圖2。

表3 Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平在PHC中的診斷價值分析

2.5 PHC組患者治療前后Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平變化情況 跟蹤隨訪發(fā)現(xiàn)，193例患者中僅有127例在我院進行治療，發(fā)現(xiàn)治療后PHC患者Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平均明顯低于治療前(P<0.05)，見表4。

表4 PHC組患者治療前后Hsp90α、AFP及Gpc3表達水平變化情況

3 討論

肝區(qū)疼痛是PHC的首發(fā)癥狀，部分患者出現(xiàn)食欲減退、消瘦、乏力等癥狀，臨床治療往往針對不同階段給予最佳治療方案，肝動脈化療栓塞、肝動脈結(jié)扎、手術(shù)、射頻、放射性治療、化療等是臨床常見治療措施[6，7]。但因PHC早期癥狀不明顯，發(fā)現(xiàn)多為中晚期，往往錯過最佳治療時間，且晚期治療預(yù)后較差，因此加強對PHC患者的早期診斷及治療是臨床研究重點。

本研究發(fā)現(xiàn)，PHC組及CHB組患者Hsp90α、AFP及Gpc3檢測陽性率均明顯高于對照組人群，且PHC組患者以上指標也顯著高于PHC組人群，提示臨床可通過監(jiān)測血清中Hsp90α、AFP及Gpc3水平鑒別肝癌、肝病。Hsp90α普遍存在于人體真核細胞中，是一種多功能的分子伴侶，在應(yīng)激因素及病理、生理刺激下，廣泛參與細胞信號傳導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄調(diào)控及激素應(yīng)答活動，維持機體正常生理功能。在正常情況下，Hsp90α是靜默狀態(tài)，因其構(gòu)象特異性，在細胞內(nèi)與輔分子及病變蛋白相互作用，結(jié)合突變型p53，阻礙細胞凋亡，增強腫瘤細胞分化、增殖，誘發(fā)腫瘤的形成，促進其發(fā)展[8-10]，在惡性腫瘤細胞中異常活躍，呈現(xiàn)明顯高表達。因此，AFP為與胚胎具有相關(guān)性的蛋白質(zhì)，是當前應(yīng)用最廣及發(fā)現(xiàn)最早的腫瘤標志物，臨床上廣泛應(yīng)用在腫瘤篩查及早期診斷中[11]。有研究提出，AFP生物學功能較為復(fù)雜，可在一定程度上促進肝癌細胞的增殖、轉(zhuǎn)化，抑制腫瘤細胞凋亡及免疫逃避[12]。因AFP濃度與腫瘤分化、直徑、變性壞死及生長相關(guān)，部分肝癌患者AFP濃度可能較低或檢測呈陰性，影響臨床診斷及鑒別[13]。因此，在AFP檢查陽性后還需進行其他檢查對PHC進行確診。分子生物學及蛋白組學技術(shù)在PHC診斷中有較大進展，研究提出，Gpc3是細胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，與肝癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[14]。在肝細胞出現(xiàn)癌變時，Gpc3異常表達，激活的Gpc3可通過多種信號傳導(dǎo)通路促進肝細胞惡化，肝細胞侵襲能力明顯增強[15]。近年來較多學者提出，聯(lián)合檢測可有效彌補單項檢測的不足，本研究中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測血清Hsp90α、AFP及Gpc3可有效提高PHC診斷率，且特異性較高，監(jiān)測以上指標在血清中的變化情況還可反應(yīng)臨床治療效果，在PHC早期診斷及療效評估中具有較高的應(yīng)用價值。本研究中還發(fā)現(xiàn)PHC組患者及CHB組患者血清Hsp90α、AFP及Gpc3水平均明顯高于對照組人群，且PHC組患者以上指標也顯著高于CHB組，分析可能是因為Hsp90α在體內(nèi)呈高表達時，還可能分泌至細胞外，稱之為分泌型Hsp90α，參與肝癌細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移[16]。肝細胞損傷后引發(fā)的應(yīng)激反應(yīng)及肝臟組織的纖維化、慢性重構(gòu)均可能導(dǎo)致Gpc3、AFP水平升高[17,18]。本研究中發(fā)現(xiàn)治療后PHC患者Hsp90α、AFP及Gpc3水平均明顯低于治療前，提示Hsp90α、AFP及Gpc3也可作為評估PHC患者治療效果的重要預(yù)測因子。經(jīng)散點圖及相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)Hsp90α、AFP及Gpc3與肝癌呈正相關(guān)，猜測隨著患者血清中Hsp90α、AFP及Gpc3水平的升高會加重肝癌發(fā)展，也提示以上指標參與PHC發(fā)生、發(fā)展，可為臨床早期診斷及評估疾病進展提供有效依據(jù)。

綜上所述，通過監(jiān)測患者血清中Hsp90α、AFP及Gpc3水平，可為肝癌早期鑒別、診斷提供有效依據(jù)，且在肝癌患者臨床治療期間，還可通過觀察以上指標水平變化，對治療效果進行評估。